劉 超，孟虹芳，戴詩(shī)云，荊 杰

（1.濱州醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)院，山東煙臺(tái) 264000；2.軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院輻射醫(yī)學(xué)研究所，北京 100850）

溶瘤腺病毒（oncolytic adenovirus，rAd）是腫瘤基因治療最常見(jiàn)的載體之一，可在腫瘤細(xì)胞內(nèi)特異性復(fù)制，并最終裂解腫瘤細(xì)胞；同時(shí)，可作為載體將治療基因?qū)肽[瘤細(xì)胞并大量表達(dá)，進(jìn)而發(fā)揮抑制腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的作用。然而，網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬清除以及病毒抗體的中和是阻礙rAd發(fā)揮作用的2個(gè)主要屏障。近年來(lái)，間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells，MSC）已成為治療多種疾病如癌癥的有效基因傳遞載體[1-3]。MSC遞送rAd，可規(guī)避病毒抗體的中和作用，增加rAd在腫瘤內(nèi)累積，最終提升rAd的抗腫瘤效應(yīng)。然而，MSC在腫瘤治療中的作用存在較大爭(zhēng)議，既有抑制腫瘤生長(zhǎng)的報(bào)道[4-5]，也有其可通過(guò)分泌生長(zhǎng)因子、抑制免疫和炎癥反應(yīng)促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)和進(jìn)展的報(bào)道[6-7]。核心蛋白聚糖（decorin，DCN）是一類(lèi)抑癌基因，研究表明，DCN能夠抑制多種腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移[8-11]。本研究前期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，感染攜帶DCN基因的溶瘤腺病毒rAd.DCN的MSC，即MSC.DCN，可以影響小鼠4T1移植瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移（待發(fā)表），但其作用機(jī)制尚未完全闡明。本研究將通過(guò)體外共培養(yǎng)體系探討MSC.DCN對(duì)小鼠乳腺癌細(xì)胞4T1生物學(xué)特性的影響，初步研究MSC.DCN抑制小鼠4T1移植瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞、病毒、試劑和儀器

小鼠乳腺癌4T1細(xì)胞購(gòu)自美國(guó)菌種保藏中心（American Type Culture Collection）；臍帶MSC及攜帶DCN基因的rAd.DCN和對(duì)照病毒rAd.Null由本實(shí)驗(yàn)室保存，病毒構(gòu)建參考文獻(xiàn)[8]。DMEM和alpha-MEM培養(yǎng)基購(gòu)自美國(guó)Thermo公司；胎牛血清購(gòu)自美國(guó)Gemini公司；RIPA裂解液和BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒購(gòu)自北京碧云天公司；小鼠抗人DCN單抗購(gòu)自美國(guó)R&D公司；小鼠抗人甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）單抗購(gòu)自英國(guó)Abcam公司；辣根過(guò)氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG單抗購(gòu)自北京中杉金橋公司；Dye670購(gòu)自美國(guó)Thermo公司；FITC-AnnexinⅤ/PI凋亡檢測(cè)試劑盒購(gòu)自天津三箭公司。Power-Pac164-5050電泳儀購(gòu)自美國(guó)Bio-Rad公司；BD FACS Calibur流式細(xì)胞儀購(gòu)自美國(guó)BD公司；光學(xué)顯微鏡購(gòu)自日本奧林巴斯株式會(huì)社；7500Fast實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)購(gòu)自美國(guó)ABI公司，Tanon 5200全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光成像儀購(gòu)自上海天能公司。

1.2 4T1細(xì)胞和MSC培養(yǎng)和傳代

以含有10%胎牛血清的DMEM為4T1細(xì)胞的培養(yǎng)基，以含有10%胎牛血清的alpha-MEM為MSC的培養(yǎng)基，待細(xì)胞生長(zhǎng)至80%～90%融合度時(shí)進(jìn)行傳代，傳代比例為1∶3。

1.3 溶瘤腺病毒感染MSC最佳感染滴度的篩選

培養(yǎng)至第4代的MSC以每孔1.5×108L-1的密度接種于6孔板內(nèi)，每孔2 mL，待細(xì)胞貼壁后按感染復(fù)數(shù)（multiplicity of infection，MOI）分別加入1，2，5和10 MOI的rAd.DCN及空載體（rAd.Null），并設(shè)置MSC對(duì)照組。MSC感染病毒48 h后，用RIPA裂解液裂解細(xì)胞，10 000×g離心10 min，取上清液。BCA法測(cè)定蛋白濃度，將樣品蛋白濃度調(diào)一致，以4∶1體積比加5×上樣緩沖液混勻，煮沸10 min。將提取的蛋白質(zhì)進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE），上樣量為 20 μg，分離后轉(zhuǎn)至PVDF膜，5%脫脂奶粉室溫封閉2 h。分別加DCN和GAPDH抗體（按1∶1000稀釋?zhuān)?℃孵育過(guò)夜。TBS-T清洗3次，每次5 min。隨后加HRP標(biāo)記山羊抗小鼠IgG抗體（二抗）（按1∶5000稀釋?zhuān)覝胤跤? h；TBS-T洗膜3次，每次5 min；發(fā)光，顯影，掃描后分析蛋白條帶積分吸光度（integrated absorbance，IA），待測(cè)蛋白表達(dá)水平用IA待測(cè)蛋白/IAGAPDH比值表示。

1.4 細(xì)胞裂解液的制備

培養(yǎng)至第4代的MSC以每孔1.5×108L-1的密度接種于6孔板內(nèi)，每孔2 mL，待細(xì)胞貼壁后按2 MOI的劑量分別加rAd.DCN和rAd.Null，并命名為MSC.Null和MSC.DCN，設(shè)置MSC對(duì)照組。48 h后，收集細(xì)胞及上清，在-80℃和37℃之間反復(fù)凍融裂解3次，300×g4℃離心10 min，收集上清。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的4T1細(xì)胞以1.5×108L-1的密度接種于6孔板內(nèi)，每孔2 mL，待細(xì)胞貼壁后將原培養(yǎng)基吸出，分別加1 mL上述裂解上清和DMEM完全培養(yǎng)基進(jìn)行共培養(yǎng)。

1.5 RT-PCR法檢測(cè)4T1細(xì)胞DCN mRNA表達(dá)

4T1細(xì)胞與各裂解上清共培養(yǎng)3 d后，Trizol提取4T1細(xì)胞RNA，按說(shuō)明書(shū)操作，以β肌動(dòng)蛋白為內(nèi)參基因，利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。β肌動(dòng)蛋白引物序列：5′-AGGCCAACCGTGAAAAGATG-3′（正向），5′-TGGCGTGAGGGAGAGCATAG-3′（反向）；DCN引物序列：5′-GGGATAGGCCCAGAAGTT-3′（正向），5′-TGGCATTGACAGCGGAAG-3′（反向）。反應(yīng)程序：95℃ 2 min；95℃ 15 s，60℃ 30 s，共40個(gè)循環(huán)，以循環(huán)閾值（Ct值）作為統(tǒng)計(jì)參數(shù)，mRNA的表達(dá)水平采用2-ΔCt表示。

1.6 Western印跡法檢測(cè)4T1細(xì)胞DCN蛋白表達(dá)

4T1細(xì)胞與各裂解上清共培養(yǎng)3 d后，用RIPA裂解液裂解細(xì)胞，10 000×g離心10 min，取上清液。BCA法測(cè)定蛋白濃度，將樣品蛋白濃度調(diào)一致，以4∶1體積比加5×上樣緩沖液混勻，煮沸10 min。將提取的蛋白質(zhì)進(jìn)行SDS-PAGE，上樣量為20 μg，分離后轉(zhuǎn)至PVDF膜，5%脫脂奶粉室溫封閉2 h。分別加入DCN和GAPDH抗體（按1∶1000稀釋?zhuān)?℃孵育過(guò)夜。TBS-T清洗3次，每次5 min。隨后加HRP標(biāo)記羊抗小鼠IgG抗體（1∶5000），室溫孵育1 h，TBS-T洗膜3次，每次5 min。發(fā)光，顯影，掃描后分析蛋白條帶IA，待測(cè)蛋白表達(dá)水平用IA待測(cè)蛋白/IAGAPDH比值表示。

1.7 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)4T1細(xì)胞增殖

取1×107對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的4T1細(xì)胞加入1×PBS 500 μL混勻，將Dye670 1 μL加1×PBS 500 μL混勻后加入到4T1細(xì)胞懸液中，37℃避光孵育10 min，然后加含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基4 mL混勻，在冰上孵育5 min，然后用1×PBS 5 mL洗滌3次。Dye670標(biāo)記完成后取出1×106，加2%多聚甲醛400 μL固定，避光保存，剩余4T1細(xì)胞以每孔3×105細(xì)胞接種于6孔板內(nèi)，按1.4與不同細(xì)胞裂解上清進(jìn)行共培養(yǎng)，并設(shè)置4T1對(duì)照組。共培養(yǎng)第3和5天收集4T1細(xì)胞，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)腫瘤細(xì)胞增殖。使用Modfit LT分析4T1細(xì)胞的增殖指數(shù)。

1.8 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)4T1細(xì)胞凋亡

4T1細(xì)胞與各裂解上清共培養(yǎng)3和5 d后，消化收集4T1細(xì)胞，300×g離心5 min，棄上清。加1×PBS 1 mL，300×g離心5 min，棄上清。加入結(jié)合緩沖液100 μL重懸細(xì)胞；然后加入FITC-Annexin V 5 μL混勻，室溫避光孵育10 min；再加PI 5 μL混勻，室溫避光孵育5 min加1×PBS 300 μL重懸細(xì)胞，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)4T1細(xì)胞凋亡，細(xì)胞凋亡的標(biāo)志為FITC-AnnexinⅤ和PI雙陽(yáng)性。

1.9 劃痕法檢測(cè)4T1細(xì)胞遷移

將4T1細(xì)胞以每孔6×105接種于6孔板內(nèi)，待細(xì)胞貼壁后用無(wú)菌槍頭進(jìn)行“井”字劃痕，然后用1×PBS 2 mL清洗細(xì)胞3次，去除劃痕過(guò)程中產(chǎn)生的細(xì)胞碎片。分別加1.4所述與不同細(xì)胞裂解上清1 mL和無(wú)血清DMEM培養(yǎng)基1 mL，并設(shè)置正常細(xì)胞對(duì)照組，劃痕后0和12 h在固定視野下拍照，觀察劃痕寬度。使用Image J軟件打開(kāi)圖片后，隨機(jī)劃取6條水平線(xiàn)，計(jì)算劃痕寬度的均值。遷移率（%）=（0 h劃痕寬度-12 h劃痕寬度）/0 h劃痕寬度×100%。

1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)用±s表示，應(yīng)用GraphPad Prism software version 5進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各組間的比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA），組間兩兩比較采用Studentt檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 rAd.DCN感染MSC最佳感染滴度的篩選

為驗(yàn)證rAd.DCN對(duì)MSC的感染效率，并篩選最佳感染滴度，本研究采用不同感染滴度的rAd.DCN感染MSC。Western印跡實(shí)驗(yàn)（圖1A和1B）顯示，與MSC對(duì)照組和rAd.Null組相比，rAd.DCN感染MSC 48 h即能高效介導(dǎo)DCN在MSC內(nèi)的表達(dá)，且隨感染滴度的增加，表達(dá)量增強(qiáng)，在2 MOI達(dá)到最高。因此，后續(xù)實(shí)驗(yàn)選用2 MOI感染MSC。

2.2 溶瘤腺病毒修飾MSC裂解上清對(duì)4T1細(xì)胞DCN表達(dá)的影響

在MSC，MSC.Null和MSC.DCN裂解上清與4T1細(xì)胞共培養(yǎng)3 d后，分別通過(guò)RT-PCR和Western印跡法從核酸及蛋白水平檢測(cè)4T1細(xì)胞DCN的表達(dá)。RT-PCR結(jié)果（圖2A）顯示，MSC.Null組與MSC對(duì)照組之間DCNmRNA的表達(dá)水平無(wú)明顯差異；MSC.DCN組DCNmRNA的表達(dá)水平較MSC對(duì)照組和MSC.Null組明顯升高（P＜0.01）。Western印跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果（圖2B和2C）顯示，與MSC對(duì)照組相比，MSC.Null組DCN蛋白表達(dá)無(wú)明顯改變；與MSC.Null組相比，MSC.DCN組DCN蛋白表達(dá)水平明顯升高。上述結(jié)果表明，MSC.DCN裂解上清中存在具有活性的溶瘤腺病毒顆粒，其可介導(dǎo)DCN在4T1細(xì)胞中的高效表達(dá)。

Fig.1 Effect of oncolytic adenovirus on expression of decorin（DCN）protein in mesenchymal stem cells（MSCs）detected by Western blotting.MSCs were infected by oncolytic adenovirus carrying DCN gene（rAd.DCN）and control virus（rAd.Null），respectively，for 48 h.B was the semi-quantitative result of A.MOI：multiplicity of infection；IA：integrated absorbance.

Fig.2 Effect of lysate supernatant of MSCs infected by rAd.DCN（MSC.DCN）and MSCs infected by rAd.Null（MSC.Null） on DCN expression in 4T1 cells by RT-PCR and Western blotting.MSCs were infected by 2 MOI rAd.DCN and 2 MOI rAd.Null，respectively，for 48 h.4T1 cells were treated with the lysates of MSC，MSC.Null and MSC.DCN for 3 d.A：DCN mRNA expression.±s，n=3.＊＊P＜0.01，compared with MSC control group；##P＜0.01，compared with MSC.Null group.B and C：DCN protein expression，C was the semi-quantitative result of B.

2.3 溶瘤腺病毒修飾MSC裂解上清對(duì)4T1細(xì)胞增殖的影響

將MSC，MSC.Null和MSC.DCN的裂解上清與4T1細(xì)胞共培養(yǎng)不同時(shí)間，通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)4T1細(xì)胞增殖。結(jié)果（圖3A和3B）顯示，共培養(yǎng)3 d后，與正常對(duì)照組相比，MSC組4T1細(xì)胞增殖指數(shù)下降（P＜0.01）；與 MSC組相比，MSC.Null組和MSC.DCN組4T1細(xì)胞增殖指數(shù)下降（P＜0.05，P＜0.01），但兩者之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。共培養(yǎng)5 d后，與正常對(duì)照組相比，MSC組4T1細(xì)胞增殖指數(shù)下降但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；與MSC組相比，MSC.Null組和MSC.DCN組4T1細(xì)胞增殖指數(shù)下降（P＜0.05，P＜0.01）。與MSC.Null組相比，MSC.DCN組4T1細(xì)胞增殖指數(shù)無(wú)明顯下降。上述結(jié)果表明，MSC裂解上清可在一定程度上抑制4T1細(xì)胞增殖，溶瘤腺病毒可以進(jìn)一步抑制4T1增殖，而且這種抑制作用與攜帶的基因之間的關(guān)系不明顯。

2.4 溶瘤腺病毒修飾MSC裂解上清對(duì)4T1細(xì)胞凋亡的影響

將MSC，MSC.Null和MSC.DCN的裂解上清與4T1細(xì)胞共培養(yǎng)不同時(shí)間，用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)4T1細(xì)胞凋亡。結(jié)果（圖4A和4B）顯示，共培養(yǎng)3 d，與正常對(duì)照組相比，MSC組4T1細(xì)胞凋亡無(wú)明顯改變；與MSC組相比，MSC.Null組和MSC.DCN組4T1細(xì)胞凋亡比例上升（P＜0.05，P＜0.01），兩組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。共培養(yǎng)5 d，與正常對(duì)照組相比，MSC組4T1細(xì)胞凋亡無(wú)明顯改變；與MSC組相比，MSC.Null組和MSC.DCN組4T1細(xì)胞凋亡比例升高（P＜0.01），兩組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。因此推測(cè)，4T1細(xì)胞凋亡主要是由溶瘤腺病毒自身引起的。

Fig.3 Effect of lysate supernatant of MSC.DCN and MSC.Null group on proliferation of 4T1 cells detected by flow cytometry.4T1 cells were treated with lysates from MSC，MSC.Null and MSC.DCN for 3（A1）and 5 d（A2）.B was the semiquantitative result of A.±s，n=3.＊＊P＜0.01，compared with cell control group；#P＜0.05，##P＜0.01，compared with MSC group.

Fig.4 Effect of lysate supernatant of MSC.DCN and MSC.Null group on apoptosis of 4T1 cells detected by flow cytometry.See Fig.3 for the cell treatment.A1：co-culture for 3 d；A2：co-culture for 5 d；B was the semi-quantitative result of A.±s，n=3.＊P＜0.05，＊＊P＜0.01，compared with MSC group.

2.5 溶瘤腺病毒修飾MSC裂解上清對(duì)4T1細(xì)胞遷移的影響

將MSC，MSC.Null和MSC.DCN的裂解上清與4T1細(xì)胞共培養(yǎng)，用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)觀察4T1細(xì)胞的遷移。結(jié)果（圖5A和5B）顯示，與對(duì)照細(xì)胞組相比，MSC裂解上清與4T1共培養(yǎng)12 h后可促進(jìn)4T1細(xì)胞遷移（P＜0.01）。與MSC組相比，MSC.Null組4T1細(xì)胞遷移無(wú)明顯差異，MSC.DCN組4T1細(xì)胞遷移明顯受到抑制（P＜0.05）。與MSC.Null組相比，MSC.DCN組4T1細(xì)胞遷移受到抑制（P＜0.05）。上述結(jié)果表明，rAd自身對(duì)MSC裂解上清所誘導(dǎo)的4T1細(xì)胞遷移具有一定的抑制作用，且DCN能夠增強(qiáng)這種遷移抑制效應(yīng)。

Fig.5 Effect of lysate supernatant of MSC.DCN and MSC.Null on migration of 4T1 cells detected by wound healing assay.4T1 cells were treated with lysates from MSC，MSC.Null and MSC.DCN for 12 h.B was the semiquantitative result of A.±s，n=3.＊＊P＜0.01，compared with cell control group；#P＜0.05，compared with MSC group；△P＜0.01，compared with MSC.Null group.

3 討論

溶瘤病毒（rAd）療法作為腫瘤基因治療的重要方向，不僅可以通過(guò)病毒復(fù)制直接溶解腫瘤細(xì)胞，而且可通過(guò)釋放大量腫瘤抗原和調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境來(lái)激活抗腫瘤免疫反應(yīng)。美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（FAD）于2015年批準(zhǔn)，表達(dá)粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子的Ⅰ型溶瘤性單純皰疹病毒用于臨床治療晚期黑素瘤[12]，在腫瘤的免疫治療領(lǐng)域具有重要的里程碑意義。而rAd作為腫瘤基因治療最常見(jiàn)的載體，可攜帶治療基因，發(fā)揮治療基因和病毒的協(xié)同抗腫瘤作用，增強(qiáng)腫瘤殺傷能力。對(duì)于發(fā)生了遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移的腫瘤，系統(tǒng)遞送rAd是一種有效的治療方式。但是，通過(guò)靜脈注射進(jìn)入血液循環(huán)的rAd靶向性差，使rAd的療效受限，并且經(jīng)肝后會(huì)造成不同程度的肝毒性。

MSC是一種多能干細(xì)胞，由于其免疫原性低，并具有向腫瘤組織定向遷移的能力，可作為系統(tǒng)遞送溶瘤腺病毒的有效載體[13-14]。以MSC作為溶瘤腺病毒的載體，可提高其靶向性，同時(shí)減少肝毒性。MSC歸巢至腫瘤組織后，rAd通過(guò)大量復(fù)制將MSC裂解后釋放并感染周?chē)[瘤細(xì)胞，可同時(shí)發(fā)揮溶瘤作用及其攜帶的治療基因的作用。本研究通過(guò)RT-PCR和Western印跡實(shí)驗(yàn)可以看到，MSC.DCN裂解上清可高效介導(dǎo)DCN在4T1細(xì)胞的表達(dá)。

多項(xiàng)研究表明，DCN作為一種抑癌基因，在肺癌和胰腺癌等惡性腫瘤組織中表達(dá)下調(diào)[15-17]。也有研究表明，DCN可以制乳腺癌和膽管細(xì)胞癌等多種腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移[18-20]。本課題組前期工作表明，以rAd作為載體，將DCN基因轉(zhuǎn)入腫瘤細(xì)胞，DCN通過(guò)抑制轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β信號(hào)通路，抑制間充質(zhì)表皮轉(zhuǎn)化因子信號(hào)通路，抑制Wnt/β連環(huán)蛋白（β-catenin）和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子信號(hào)通路等，調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡和遷移，從而有效抑制乳腺癌和前列腺癌等腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移[21-23]。

本研究采用rAd作為載體攜帶DCN基因，評(píng)價(jià)其對(duì)4T1細(xì)胞生物學(xué)特性的影響。細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)表明，MSC裂解上清能抑制4T1細(xì)胞的增殖，MSC.Null和MSC.DCN裂解上清的抑制作用更強(qiáng)，但2組之間的抑制作用無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，因此推測(cè)，rAd自身可增強(qiáng)MSC裂解上清對(duì)4T1細(xì)胞增殖的抑制作用。而細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)結(jié)果也提示，4T1細(xì)胞的凋亡主要是由rAd自身引起的，而攜帶的DCN基因?qū)Υ俗饔脽o(wú)明顯影響。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)表明，MSC.DCN裂解上清能夠抑制MSC裂解上清的促遷移作用，推測(cè)可能是MSC.DCN裂解上清能有效感染4T1細(xì)胞，使4T1細(xì)胞高表達(dá)DCN，從而抑制由MSC裂解上清所誘導(dǎo)的4T1細(xì)胞遷移，但這種抑制作用并不能使4T1細(xì)胞的遷移速率降至其自發(fā)遷移。具體作用機(jī)制和所涉及的信號(hào)通路等尚需深入研究。

綜上所述，MSC.DCN能抑制小鼠乳腺癌細(xì)胞4T1細(xì)胞的增殖及MSC裂解上清所誘導(dǎo)4T1細(xì)胞的遷移，同時(shí)促進(jìn)4T1細(xì)胞的凋亡。因此，以MSC作為載體，可以將攜帶DCN基因的溶瘤腺病毒遞送至腫瘤局部，從而發(fā)揮抗腫瘤作用。同時(shí)，DCN可以抑制MSC裂解上清的促腫瘤作用，降低MSC應(yīng)用于腫瘤治療的風(fēng)險(xiǎn)。因此，以MSC作為載體，介導(dǎo)rAd的基因治療可作為一種潛在的腫瘤治療方式。