楊陽， 林琪， 張雨凝， 吳振， 王立強

(1. 華僑大學(xué) 生物醫(yī)學(xué)學(xué)院， 福建 泉州 362021; 2. 廈門大學(xué) 藥學(xué)院， 福建 廈門 361102)

抑郁癥(depression)是一類精神障礙性疾病，主要影響人的情緒，患病者表面與常人并無區(qū)別.臨床特點主要表現(xiàn)為心境低落、思維遲緩和意志力脆弱等[1]，嚴(yán)重者甚至?xí)a(chǎn)生自殺行為，且知曉率低、治療率低[2-3].目前，臨床上常見的治療抑郁癥的藥物主要有三環(huán)類抗抑郁藥(丙咪嗪)、單胺氧化酶(MAO)抑制劑(異卡波肼、苯乙肼等)和新型藥物選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑(氟西汀、帕羅西汀等)[4-7].然而，以上藥物在治療抑郁癥的同時，也具有很大的副作用.鹽酸維拉佐酮是首個吲哚烷基胺類新型抗抑郁癥藥，具有選擇性的5-HT再攝取抑制劑和5-HT1A受體部分激動劑雙重活性[8-9]，能夠有效抑制5-HT再攝取位點.臨床數(shù)據(jù)表明，鹽酸維拉佐酮具有起效快、耐受性好和不良反應(yīng)小等特點[10].仿制藥占當(dāng)今社會的主流地位，大多數(shù)化學(xué)藥品都是仿制藥.由于過去的藥品評審對仿制藥和原研制劑沒有嚴(yán)格的質(zhì)量一致性要求，很大程度上影響了患者的用藥療效.因此，開展仿制藥的一致性評價是確保仿制藥臨床療效的首要前提[11-12]，而體外溶出度是考察固體制劑最核心的評價指標(biāo)[13].本文以原研制劑為參考，探索鹽酸維拉佐酮片的處方及制備工藝，對其體外溶出行為進(jìn)行考察和對比研究.

1 實驗部分

1.1 試劑與儀器

1.1.1 試劑 鹽酸維拉佐酮對照品(美國Trovis Pharmaceuticals LLC公司，生產(chǎn)批號為 S170707)；自制鹽酸維拉佐酮片(本單位研發(fā)，生產(chǎn)批號：一批20181101、二批20181102、三批20181103)；乳糖(江蘇徐州豐瑞生物科技有限公司)；微晶纖維素(臺灣明臺化工股份有限公司)；二氧化硅(安徽山河藥用輔料股份有限公司)；硬脂酸鎂(河南銘之鑫化工產(chǎn)品有限公司)；交聯(lián)羧甲基纖維素鈉(上海昌為醫(yī)藥輔料技術(shù)有限公司)；歐巴代包衣預(yù)混粉(胃溶型，上?？房蛋录夹g(shù)有限公司)；甲醇(廣東汕頭西隴化工股份有限公司，色譜級)；磷酸、磷酸二氫鉀(西安悅來醫(yī)藥科技有限公司).

1.1.2 儀器 高效液相色譜儀(DAD 檢測器，美國安捷倫公司)；pH計(賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司)；電子天平(奧豪斯儀器常州有限公司)；YQ100型氣流粉碎機(jī)(上海塞山粉體機(jī)械有限公司)；DP60A型單沖壓片機(jī)(上海天闔機(jī)械設(shè)備有限公司)；BG75B型高效包衣機(jī)(中航工業(yè)北京航空制造工程研究所)；QS-15型混合機(jī)(浙江溫州市佳禾電氣有限公司)；RC806型溶出試驗儀(天津市天大天發(fā)科技有限公司).

1.2 鹽酸維拉佐酮片的制備

1.2.1 輔料用量的選擇 參考原研制劑的質(zhì)量情況后，發(fā)現(xiàn)原料對高濕環(huán)境比較敏感，且本試驗采用直接壓片法.因此，試驗選擇了粒徑較大、含水量≤1.5%的Avicel PH-112規(guī)格的微晶纖維素和休止角較小的Tablettose 80乳糖作為填充劑，選用交聯(lián)羧甲基纖維素鈉為崩解劑，以溶出度為主要評價指標(biāo)，對輔料(填充劑和崩解劑)的用量(m)進(jìn)行考察，結(jié)果如表1所示.

表1 輔料用量的篩選Tab.1 Selection of excipient dosage g

1.2.2 原輔料相容性的考察 參考原研產(chǎn)品處方組成，根據(jù)原輔料相容性試驗指導(dǎo)原則對產(chǎn)品處方設(shè)計，如表2所示.按表2比例稱取原輔料于自封袋中混合均勻，在溫度60 ℃，光照度(4 500±500) lx，濕度為92.5%的條件下放置10 d.然后，于第5天和第10天取樣檢測，考察各樣品原料藥的含量、有關(guān)物質(zhì)和晶型等項目各時間節(jié)點變化.

表2 原輔料相容性試驗處方設(shè)計Tab.2 Prescription design of compatibility test

1.2.3 鹽酸維拉佐酮的壓片 將鹽酸維拉佐酮的原料微粉化后，過100目篩，按處方量稱取鹽酸維拉佐酮、乳糖、微晶纖維素、二氧化硅、硬脂酸鎂和交聯(lián)羧甲基纖維素鈉，加入到混合料斗中充分混合.采用直接壓片法進(jìn)行壓片，據(jù)所得片芯質(zhì)量對素片進(jìn)行包衣.

1.2.4 鹽酸維拉佐酮片的包衣 選用滬Q/WS-1-2273-99型歐巴代包衣粉為鹽酸維拉佐酮的包衣材料，用純化水將其配置成8%的溶液，攪拌，過100目篩，備用.按照最佳的處方制備素片，稱量后置于包衣鍋內(nèi)；然后，調(diào)節(jié)主機(jī)轉(zhuǎn)速為6～9 r·min-1，送風(fēng)溫度為60～65 ℃，蠕動泵轉(zhuǎn)速為6～15 r·min-1，霧化壓力為0.3～0.6 MPa，開槍壓力為0.2～0.6 MPa，出風(fēng)溫度為37～45 ℃進(jìn)行包衣.當(dāng)片劑質(zhì)量增加約4%時，停止包衣，干燥后即得薄膜衣片.

1.3 色譜條件

色譜柱為Hypersil ODS2(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相為體積比1∶1的甲醇-磷酸緩沖液，檢測波長為240 nm，流速為1.0 mL·min-1，進(jìn)樣體積為20 μL，柱溫為25 ℃.

1.4 溶出轉(zhuǎn)速的選擇

根據(jù)各國藥典及美國FDA溶出數(shù)據(jù)庫中的方法可知，50，60，75 r·min-1的溶出轉(zhuǎn)速均有被使用.

表3 溶出轉(zhuǎn)速的考察結(jié)果Tab.3 Examination results of dissolution speed

本實驗選擇參比制劑和批號為20181101的自制品為樣品，在醋酸溶液(pH=3.1)中對3種轉(zhuǎn)速的溶出度進(jìn)行考察，結(jié)果如表3所示.表3中：t為時間；D為溶出度.

從表3可知：溶出轉(zhuǎn)速為60 r·min-1較 50 r·min-1的溶出量和溶出速率明顯增多變快，而75 r·min-1較60 r·min-1的溶出量和溶出速率略有增多.由于美國FDA中規(guī)定鹽酸維拉佐酮的溶出轉(zhuǎn)速為60 r·min-1，因此，選擇轉(zhuǎn)速為60 r·min-1.

1.5 實驗方法

1.5.1 體外溶出度測定 取自制的鹽酸維拉佐酮片，參照溶出度測定法[13]，以醋酸溶液(pH=3.1)、鹽酸溶液(pH=1.0)、磷酸鹽緩沖液(pH=6.8)和水為溶出介質(zhì)，介質(zhì)體積為1 000 mL ，轉(zhuǎn)速為60 r·min-1.然后，以醋酸溶液(pH=3.1)為介質(zhì),取樣時間分別為0,5,10,20,30,45 min;以水、磷酸鹽緩沖液(pH=6.8)和鹽酸溶液(pH=1.0)為溶出介質(zhì),取樣時間分別為0,5,10,20,30,45,60,90 min.上述樣點取樣后,過濾得供試品溶液.另精密稱取原研藥10.0 mg，加稀釋劑定容到500 mL容量瓶中，配置成2 μg·mL-1的鹽酸維拉佐酮對照品溶液;精密量取各溶液100 μL，注入液相色譜儀，按外標(biāo)法以峰面積計算各點的累積溶出度.

1.5.2 專屬性實驗 取10 mg空白輔料、自制鹽酸維拉佐酮片和參比制劑，按溶出度測定方法操作，過濾;精密量取上述續(xù)濾液和溶出介質(zhì)(pH=3.1醋酸溶液)各20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖.

1.5.3 線性實驗 精密稱取質(zhì)量分?jǐn)?shù)為99.89%的鹽酸維拉佐酮對照品15.0 mg，置于50 mL燒杯中，用甲醇溶解后，轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中定容，搖勻；精密移取上述溶液0.2，0.5，0.8，1.1，1.4 mL，置于50 mL容量瓶中，加入稀釋劑(甲醇∶水的體積比為80∶20)定容，搖勻，作為供試品溶液.按照色譜條件進(jìn)樣分析，進(jìn)樣量100 μL，進(jìn)行鹽酸維拉佐酮線性回歸并計算相關(guān)系數(shù).

1.5.4 回收率實驗 精密稱取鹽酸維拉佐酮10.0,15.0和20.0 mg各3份，按處方比例加入適量的空白輔料后，用少許甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶定容，搖勻;然后，精密移取各溶液1 mL置于100 mL容量瓶中，用稀釋劑定容，過濾，取續(xù)濾液作為50%，80%，100%的供試品溶液.精密稱取原研對照藥品10.0 mg，加入稀釋劑500 mL，配置成2 μg·mL-1的鹽酸維拉佐酮溶液，過濾后作為對照品溶液;然后，按照色譜條件進(jìn)樣，進(jìn)樣量100 μL，用外標(biāo)法的峰面積計算溶出量，溶出量與標(biāo)示量之間的比值為回收率.

1.5.5 穩(wěn)定性實驗 取自制樣品，按照建立的溶出度測定方法，分別在2，4，6，8 h時取適量溶出液，用0.45 μm的微孔濾膜過濾；然后，取續(xù)濾液加入稀釋劑稀釋成濃度為2 μg·mL-1的溶液作為供試品，進(jìn)樣量100 μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積.

1.5.6 濾膜吸附性實驗 以醋酸溶液(pH=3.1)為溶出介質(zhì)，取溶出液100 mL，分為5份.其中,第一份溶液經(jīng)4 000 r·min-1離心5 min 后取上清液100 μL，其余四份分別棄去3,5,7,10 mL初濾液，取續(xù)濾液100 μL進(jìn)樣，注入液相色譜儀，記錄峰面積.

1.6 體外溶出度的比較

為了更好地體現(xiàn)自制樣品與參比制劑的一致性，本試驗用相似因子法比較釋藥曲線間的異同[14-15].相似因子(f2)的計算公式為

上式中:n為取樣點的總數(shù)；Rt和Tt分別代表兩種制劑在時間t的平均累積釋放度.f2的大小表示兩條釋藥曲線的吻合程度，其取值范圍為0～100，且f2越大，兩條曲線的相似性越高，一般認(rèn)為f2在50～100之間，兩條釋藥曲線相似.

2 試驗結(jié)果與分析

2.1 處方的篩選

對輔料(填充劑和崩解劑)用量的考察結(jié)果,如表4所示.表4中：F為脆碎度.由表4可知：處方1和處方2 在壓片過程中出現(xiàn)粘沖現(xiàn)象，處方5溶出度略高于處方4，但是脆碎度明顯增大.綜合考慮，處方4為最優(yōu)處方.在此基礎(chǔ)上,進(jìn)一步對崩解劑進(jìn)行篩選.由表4可知：隨著崩解劑用量的提高，溶出度由90.78%提高到99.05%.因此，將處方8暫定為最佳片芯處方.

表4 輔料用量的考察結(jié)果Tab.4 Results of investigation of excipient dosage

2.2 原料藥與輔料的相容性

原輔料相容性考察結(jié)果，如圖1所示.從圖1可知：根據(jù)原料藥與輔料的相容性，在有關(guān)物質(zhì)測定中除原料本身的雜質(zhì)外，無其他雜質(zhì)出現(xiàn)，含量、晶型和參比制劑無明顯差別，說明擬選用的輔料與原料相容性良好，可以進(jìn)行后續(xù)的處方篩選.

圖1 鹽酸維拉佐酮雜質(zhì)圖Fig.1 Impurity map of vilazodone hydrochloride

2.3 包衣材料對自制品溶出度的影響

自制素片和包衣片劑、參比制劑在不同溶出介質(zhì)中的溶出曲線,如圖2所示.從圖2可知：4種溶出曲線基本一致，可見滬Q/WS-1-2273-99型歐巴代系列胃溶型包衣粉可用于鹽酸維拉佐酮片的包衣.

(a) 醋酸溶液(pH=3.1) (b) 水

(c) 磷酸鹽緩沖液(pH=6.8) (d) 鹽酸溶液(pH=1.0)圖2 不同溶出介質(zhì)中自制片芯和薄膜衣片與參比制劑的溶出曲線Fig.2 Dissolution profiles of homemade tablet cores, film-coated tablets and reference formulations in different dissolution media

2.4 專屬性結(jié)果

對溶出介質(zhì)、空白輔料、自制品和參比試劑進(jìn)行專屬性測試，結(jié)果如圖3所示.從圖3可知：溶出介質(zhì)和空白輔料對主成分的測定均無干擾，本品專屬性良好.

(a) 溶出介質(zhì)

(b) 空白輔料

(c) 自制品

(d) 參比試劑圖3 不同溶出介質(zhì)專屬性考察結(jié)果Fig.3 Results of investigations on specificity of different dissolution media

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

以鹽酸維拉佐酮的濃度(X)和峰面積(Y)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸曲線方程：Y=186.75x+4.929 7，R2=0.999 7.表明鹽酸維拉佐酮在1.00～12.08 μg·mL-1濃度范圍內(nèi)與峰面積的線性關(guān)系良好.

2.6 回收率

實驗結(jié)果表明：鹽酸維拉佐酮的回收率范圍是98.50%～101.87%，平均回收率為99.54%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.07%.表明上述方法準(zhǔn)確度良好，適合用于鹽酸維拉佐酮的溶出度測定.

表5 濾膜吸附性的實驗結(jié)果Tab.5 Experimental results of membrane adsorption

2.7 供試品溶液穩(wěn)定性

由試驗結(jié)果表明：供試品溶液在2，4，6，8 h時的峰面積RSD值分別為0.15%，0.19%，2.34%，3.16%.說明供試品溶液在4 h內(nèi)穩(wěn)定，故檢測應(yīng)在4 h內(nèi)完成.

2.8 濾膜吸附性實驗結(jié)果

圖4 參比制劑在4種溶出介質(zhì)中的溶出曲線Fig.4 Dissolution curves of reference products in four kinds of media

濾膜吸附性的實驗結(jié)果，如表5所示.從表5可知：在醋酸溶液(pH=3.1)中，鹽酸維拉佐酮片經(jīng)濾膜和離心處理后，其峰面積幾乎無差異，RSD<2%.說明濾膜對鹽酸維拉佐酮無吸附性.

2.9 原研制劑的體外溶出行為考察

以醋酸溶液(pH=3.1)、水、鹽酸溶液(pH=1.0)和磷酸鹽緩沖液(pH=6.8)各1 000 mL為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為60 r·min-1，按中國藥典2015年版四部通則0931第二法測定原研制劑的體外溶出行為[16].

分別于0,5,10,20,30,45,60，90 min時取適量溶出液(醋酸溶液n=5)，用0.45 μm的微孔濾膜過濾;然后，取續(xù)濾液加入溶出介質(zhì)，稀釋成濃度為2 μg·mL-1的溶液作為供試品，用高效液相色譜進(jìn)行測定.參比制劑在4種溶出介質(zhì)中的溶出曲線,如圖4所示.

2.10 與原研制劑體外溶出度的比較

采用相似因子法對三批自制品與參比制劑的溶出度進(jìn)行評價.在4種溶出介質(zhì)中，三批自制品與參比制劑的溶出曲線圖，如圖5所示.從圖5可知：在醋酸溶液(pH=3.1)中,三批自制品在15 min內(nèi)溶出度均為85%以上，與參比制劑一致；水中f2為79，磷酸緩沖液中f2為66，鹽酸溶液中f2為64.

(a) 醋酸溶液(pH=3.1) (b) 水

(c) 磷酸鹽緩沖液(pH=6.8) (d) 鹽酸溶液(pH=1.0)圖5 不同溶出介質(zhì)中三批自制品與原研制劑的溶出曲線Fig.5 Dissolution curves of three batches of self-produced products and original preparation in different dissolution media

3 討論

首先，參照原研制劑，對鹽酸維拉佐酮片的輔料進(jìn)行篩選，通過原輔料相容性試驗，初步擬定輔料種類.通過單因素試驗對輔料的用量進(jìn)行考察，確定主藥10 g、乳糖60 g、微晶纖維素26 g、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉1 g、二氧化硅2 g、硬脂酸鎂1 g為最優(yōu)處方.然后，將原輔料進(jìn)行微粉化后，過100目篩，加入到混合料斗中充分混合.采用直接壓片法制備鹽酸維拉佐酮片.以高效液相色譜法建立鹽酸維拉佐酮片的溶出度檢測方法，該方法準(zhǔn)確度高、操作簡單，可作為體外一致性評價的重要檢測方法.

根據(jù)國家食品藥品監(jiān)督管理總局(CFDA)發(fā)布的《普通口服固體制劑溶出曲線測定與比較指導(dǎo)原則》，通過比較多條溶出曲線的相似性，評價自研制劑與原研制劑的質(zhì)量一致性.相似因子f2法是目前較常見的評價溶出度的方法之一，故本試驗通過比較自制品和原研制劑在4種不同的溶出介質(zhì)中的溶出行為，確定其質(zhì)量一致性.結(jié)果表明，自制品在醋酸溶液(pH=3.1)中45 min內(nèi)的累積釋放度大于80%，符合藥典要求，在水中的累積釋放度大于60%，在鹽酸溶液(pH=1.0)中的累積溶出度大于50%，而在磷酸緩沖液(pH=6.8)中的累積釋放度很小.由于相似因子f2均大于50，說明自制品與原研制劑的體外溶出行為具有較高的一致性.但這并不能說明鹽酸維拉佐酮片仿制成功，后期應(yīng)進(jìn)行生物等效性試驗的考察.