張玉枝，張兆波，趙丹娜

(河北省滄州市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，河北滄州 061000)

我國是乙型肝炎病毒(HBV)感染的高流行區(qū)，肝纖維化是慢性乙型肝炎(CHB)感染后的常見病理改變，易進(jìn)展為肝硬化和肝癌。肝纖維化的診斷金標(biāo)準(zhǔn)是肝穿刺病理組織學(xué)活檢技術(shù)，但因有創(chuàng)性、取樣誤差以及不宜反復(fù)進(jìn)行等缺點(diǎn)，使其在肝纖維化程度動態(tài)監(jiān)測和評估治療效果中應(yīng)用受限[1]。因此，尋找合適的無創(chuàng)性血清學(xué)指標(biāo)或者影像學(xué)技術(shù)成為臨床判斷肝纖維化程度和評估肝纖維化治療效果的研究熱點(diǎn)。目前臨床常用于肝纖維化診斷的血清學(xué)指標(biāo)有透明質(zhì)酸(HA)和Ⅳ型膠原(Ⅳ-C)等[2]，但這些指標(biāo)單獨(dú)用于肝纖維化診斷時，特異度和靈敏度較低，故尋找新的血清診斷標(biāo)志物對肝纖維化診斷和疾病監(jiān)測具有十分重要的意義。

前膠原C端蛋白酶增強(qiáng)子1(PCPE-1)是一種在膠原蛋白聚集反應(yīng)中起關(guān)鍵作用的結(jié)締組織糖蛋白。有研究表明，血漿PCPE-1在小鼠肝纖維化的發(fā)展過程中呈逐漸升高趨勢，可作為一種新的、有臨床價值的肝纖維化生物標(biāo)志物[3]。故本文研究了CHB患者血清PCPE-1水平與肝纖維化程度的相關(guān)性，并探討PCPE-1、HA和Ⅳ-C對CHB患者肝纖維化的診斷價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2016年8月至2018年8月本院收治的100例經(jīng)化學(xué)發(fā)光法檢測HBV陽性且經(jīng)肝穿刺病理組織學(xué)確診為CHB肝纖維化患者(A組)作為研究對象。A組中男57例、女43例，年齡32～78歲、平均(53.24±8.96)歲。根據(jù)2000年修訂的《病毒性肝炎防治方案》[4]中有關(guān)肝纖維化程度分期標(biāo)準(zhǔn)[(1)S1期為匯管區(qū)及周圍纖維化，小葉結(jié)構(gòu)完整；(2)S2期為纖維間隔形成，小葉結(jié)構(gòu)大部分保留；(3)S3期為大量纖維間隔，小葉結(jié)構(gòu)紊亂；(4)S4期為早期肝硬化，肝實(shí)質(zhì)呈彌漫性纖維增生，假小葉形成]將A組研究對象分為4組：S1期組患者29例，S2期組患者37例，S3期組患者19例，S4期組患者15例。選取同期本院收治的100例單純CHB患者作為非肝纖維化組(B組)，其中男59例、女41例，年齡31～80歲、平均(55.08±6.39)歲。CHB診斷符合《慢性乙型肝炎防治指南(2015年版)》[5]中的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。另選取同期本院健康體檢者50例作為對照組，其中男26例、女24例，年齡30～80歲、平均(54.13±8.67)歲。3組研究對象在年齡、性別等一般資料方面比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究所有研究對象均簽署知情同意書，且本研究已獲得本院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2方法 所有研究對象經(jīng)無菌操作采集靜脈血3 mL，4 000 r/min離心10 min，取血清進(jìn)行PCPE-1、HA和Ⅳ-C水平的檢測。HA和Ⅳ-C檢測采用化學(xué)發(fā)光法，儀器使用鄭州安圖AutoLumo A2000全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀及其配套試劑。PCPE-1檢測使用ELISA法，試劑盒(貨號：YB-E11303)購于上海研伴實(shí)業(yè)有限公司，按照試劑盒說明書嚴(yán)格進(jìn)行操作。比較各組血清PCPE-1、HA和Ⅳ-C水平的差異。

2 結(jié) 果

2.1各組血清PCPE-1、HA和Ⅳ-C水平比較 A組患者血清PCPE-1、HA和Ⅳ-C水平明顯高于B組和對照組，B組以上指標(biāo)水平明顯高于對照組，組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 各組血清PCPE-1、HA和Ⅳ-C水平比較

2.2不同肝纖維化程度患者血清PCPE-1、HA和Ⅳ-C水平比較 隨著肝纖維化程度的增加，血清PCPE-1、HA和Ⅳ-C水平呈遞增趨勢，S4期>S3期>S2期>S1期，組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 不同肝纖維化程度患者血清PCPE-1、HA和Ⅳ-C水平比較

2.3血清PCPE-1、HA和Ⅳ-C對CHB肝纖維化的診斷價值 繪制ROC曲線分析得出血清PCPE-1、HA和Ⅳ-C診斷CHB肝纖維化的曲線下面積(AUC)分別為0.701、0.789、0.706，靈敏度分別為60%、77%、72%，特異度分別為75%、85%、65%。見圖1。

圖1 ROC曲線分析

3 討 論

流行病學(xué)研究表明，在全球范圍內(nèi)有4億以上人口為HBV慢性感染者，可為無癥狀攜帶者，也可進(jìn)展為肝纖維化和肝硬化患者等。肝纖維化在CHB患者中普遍存在，而肝纖維化是大量細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)成分在肝臟結(jié)締組織異常沉積而造成肝臟結(jié)構(gòu)和功能改變的結(jié)果[6]。ECM是包括膠原、非膠原糖蛋白、基質(zhì)結(jié)合生長因子、糖胺聚糖、蛋白聚糖和基質(zhì)蛋白等成分的大分子物質(zhì)，其合成與降解的失衡導(dǎo)致了肝纖維化的發(fā)生[7]，這為研究肝纖維化的發(fā)病機(jī)制和尋找有效的診斷指標(biāo)提供了方向。

PCPE-1是普遍存在的、相對分子質(zhì)量為55×103且不具催化活性的ECM糖蛋白，但其可通過加快前膠原C-蛋白酶(PCPs)從前膠原羧基中釋放的速度，從而增強(qiáng)對前膠原活性的作用[8]。MASSOUDI等[9]發(fā)現(xiàn)PCPE-1在角膜損傷修復(fù)過程中具有促進(jìn)膠原沉積和抗血管生成因子作用，認(rèn)為PCPE-1在瘢痕形成或者與膠原相關(guān)代謝過程中具有重要的意義。SAFRIN等[10]的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，肝纖維化患者血清PCPE-1水平較健康人高，認(rèn)為PCPE-1可作為一種有臨床應(yīng)用價值的非侵襲性肝纖維化生物學(xué)指標(biāo)。目前關(guān)于血清PCPE-1水平與CHB肝纖維化程度相關(guān)性的文獻(xiàn)較少，因此，筆者研究了不同肝纖維化程度CHB患者血清PCPE-1水平的變化，結(jié)合SAFRIN等[10]的結(jié)果和本研究結(jié)果可見，血清PCPE-1水平在CHB肝纖維化患者中升高，其水平隨著肝纖維化的病理變化而變化：當(dāng)肝纖維化程度增加時，血清PCPE-1水平呈相應(yīng)升高，表明血清PCPE-1可用于肝纖維化患者病情程度評估。具體機(jī)制如下：HBV感染導(dǎo)致肝纖維化后的肝臟免疫功能紊亂，在轉(zhuǎn)化生長因子-β、核因子-κB等炎性因子的刺激下，影響Notch、Hedgehog等通路中分子信號的調(diào)控作用，激活肝臟Kupffer細(xì)胞合成和釋放大量脂質(zhì)過氧化物和細(xì)胞因子，進(jìn)而激活肝臟星狀細(xì)胞合成大量ECM[11]。筆者將進(jìn)行后續(xù)的細(xì)胞分子以及動物驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步揭示PCPE-1在肝纖維化中的分子機(jī)制，以期為PCPE-1的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

HA是ECM的主要成分，是反映肝組織中纖維水平較為準(zhǔn)確的蛋白多糖[12]。Ⅳ-C在機(jī)體中通過與細(xì)胞膜受體、膠原纖維以及細(xì)胞間的相互黏附、結(jié)合而發(fā)揮作用[13]。研究表明，HA和Ⅳ-C是較好的用于肝纖維化診斷的血清學(xué)指標(biāo)，其中HA的診斷價值高于Ⅳ-C，其原因可能與HA是ECM的主要成分，而Ⅳ-C并不直接參與膠原纖維形成有關(guān)[14]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CHB肝纖維化患者血清HA和Ⅳ-C水平較單純CHB患者及健康體檢者高，且水平變化與肝纖維化程度相關(guān)。這與孫蕾[15]的研究結(jié)果相一致，表明血清HA、Ⅳ-C水平在一定程度上反映了肝纖維化的進(jìn)程，對肝纖維化的早期臨床診斷具有意義。為了探討PCPE-1對CHB肝纖維化的診斷價值，筆者通過繪制ROC曲線發(fā)現(xiàn)PCPE-1的診斷價值低于HA，而與Ⅳ-C的診斷價值相近，但PCPE-1對CHB肝纖維化診斷的特異度高于Ⅳ-C，表明PCPE-1較Ⅳ-C具有更高的特異度，或許在臨床應(yīng)用中具有更高的早期診斷價值。結(jié)合本研究結(jié)果中CHB患者血清PCPE-1與HA、Ⅳ-C水平的一致性變化趨勢以及三者對CHB肝纖維化的診斷價值，推測PCPE-1在CHB肝纖維化中的表達(dá)與HA、Ⅳ-C存在某種聯(lián)系，三者共同檢測能更好地反映CHB肝纖維化嚴(yán)重程度，從而增加診斷CHB肝纖維化的靈敏度。本研究尚存在樣本量較小、未進(jìn)行CHB肝纖維化患者血清PCPE-1水平和HA、Ⅳ-C的相關(guān)性研究以及未進(jìn)行血清PCPE-1與HA、Ⅳ-C聯(lián)合檢測診斷CHB肝纖維化的研究，這有待于加大樣本量進(jìn)行下一步的臨床對比研究。

綜上所述，CHB肝纖維化患者體內(nèi)血清PCPE-1水平隨肝纖維化程度的增加而上升。PCPE-1具有一定的臨床診斷價值，可作為潛在的肝纖維化診斷標(biāo)志物。