丹參益肝自乳化微乳抗大鼠門靜脈高壓的作用

房辰晨 孫敬蒙 盧美彤 張煒煜 金清龍

(1長春中醫(yī)藥大學藥學院，吉林 長春 130117；2吉林大學白求恩第一醫(yī)院)

丹參為唇型科植物丹參的干燥根及根莖〔1〕，具有祛瘀止痛、活血通經(jīng)、清心除煩的功效〔2,3〕。中藥丹參活血化瘀作用顯著，多用于心腦血管疾病的治療，可降低心肌興奮性和傳導性，保護心肌缺血性損傷、腦組織缺血、再灌注損傷等〔4〕。近年研究報道，丹參對肝病的治療作用明顯，具有改善肝臟微循環(huán)、抗血小板聚集和血栓形成、降低血液黏度、抗菌、消炎、抗氧化作用等〔5〕。丹參有活血化瘀功效，研究報道丹參能激活纖溶系統(tǒng)，促進纖維蛋白的溶解，降低纖維蛋白原，抑制纖維細胞增殖和分泌，減少膠原纖維形成和纖維組織增生，將其用于臨床抗肝纖維化，療效十分理想〔6〕。劉星等〔7〕研究了丹參降低肝硬化門靜脈高壓作用，結(jié)果顯示丹參具有一定的作用，但其治療機制等還有待研究。

肝硬化門靜脈高壓是門靜脈壓力升高導致的一系列癥狀，壓力升高的主要原因是肝硬化引起的毛細血管床破壞，聯(lián)合其他原因?qū)е麻T靜脈血流受阻，血流速度降低，從而表現(xiàn)出門靜脈高壓。在機體內(nèi)的一系列代謝和血流動力學紊亂往往互為因果，在肝臟疾病的發(fā)生及發(fā)展過程中形成惡性循環(huán)。各種慢性肝病，如肝硬化、肝纖維化等可引起門靜脈高壓，而門靜脈高壓一旦形成，又可引起肝臟疾病的進一步惡化。在我國肝病發(fā)病率較高，肝炎病毒攜帶人口約占10%，其中，肝炎肝硬化在我國十分常見。肝纖維化潛伏期長，為可逆過程，患者一般不易發(fā)現(xiàn)，進一步發(fā)展則形成肝硬化、門靜脈高壓，危及患者生命〔8〕。因此，門靜脈高壓的治療對各種慢性肝病的預防和治療有積極意義。

目前，臨床上用于降低門靜脈高壓的藥物為鹽酸普萘洛爾(心得安)。心得安可降低門靜脈高壓，但副作用較大，導致肝功能惡化、心臟抑制、心搏過緩、低血糖等。而手術(shù)治療方法胃鏡下食管胃底靜脈曲張?zhí)自g(shù)價格比較昂貴，且為有創(chuàng)的治療方法，部分患者不能承受。因此，將丹參提取制備成丹參自乳化微乳滴丸，改善肝臟微循環(huán)，并進行體內(nèi)藥效學評價其降低門靜脈高壓的效果，有其獨特的意義。

1 材料與方法

1.1儀器 AR2140型電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)；JA5103N型電子天平(上海民橋精密科學儀器有限公司)；Leitz 512切片機(西德)由吉林大學基礎醫(yī)學院病理實驗室提供；低速自動平衡離心機(德國Hettich公司)；生物電放大器、壓力換能器、十六導數(shù)據(jù)分析記錄儀(澳大利亞埃德公司)；酶標儀(TECAN公司)。

1.2材料 丹參酮提取物、丹參總酚酸提取物、丹參自乳化微乳為實驗室自制；水合氯醛購自河北高碑店市春光試劑廠，肝素鈉注射液購自徐州萬邦生化制藥有限公司，橄欖油和乙醇為市售某品牌，生理鹽水注射液從四平巨能藥業(yè)有限公司購買。

1.3動物及造模、分組 健康Wistar大鼠120只，雌雄各半，體重220～250 g，購于吉林大學白求恩醫(yī)學部基礎動物實驗室。正常喂養(yǎng)的10只作為空白組，灌胃1 ml/100 g空白自乳化微乳，每天1次。適應環(huán)境1 w后，皮下注射40%橄欖油稀釋(CC14)0.5 ml/100 g，首次給予1 ml/100 g，以后改為0.5 ml/100 g，2次/w，5%～30%乙醇喂飲，56 d后，造模完成。

造模成功的大鼠隨機分為4組，分別為模型組、心得安組、丹參高劑量組、丹參低劑量組，各8只。模型組灌胃1 ml/100 g空白自乳化微乳，每天1次。心得安組灌胃心得安2.7 mg/kg，每天1次。丹參高劑量組灌胃丹參酮ⅡA 6 mg/kg、丹酚酸B 18 mg/kg，每天1次。丹參低劑量組灌胃丹參酮ⅡA 3 mg/kg、丹酚酸B 9 mg/kg，每天1次。給藥15 d后，分別對大鼠體重變化、臟器指數(shù)、門靜脈壓力、肝功能、肝硬化、抗氧化、羥脯氨酸(HyP)、一氧化氮(NO)、NO合酶(NOS)等指標進行測定。

1.4門靜脈壓力測定 大鼠禁食24 h，自由飲水。開始試驗時，先采用10%水合三氯乙醛(0.3 ml/kg)，腹腔注射，麻醉大鼠。大鼠取仰臥位，大鼠腹壁正中線剪開長約2 cm“一”字形小口，打開腹腔，暴露門靜脈，主干，分離出腸系膜上靜脈，結(jié)扎遠離門靜脈一端，血管夾夾住近端，同樣用膜狀內(nèi)翳剪于腸系膜上靜脈上剪開一“V”形小缺口，暴露血管。接壓力換能器，應用十六導生理記錄儀，測定門靜脈壓力。

1.5肝功能檢測 采用腹主動脈取血，血液放置30 min，以4 000 r/min離心，取血清100 μl置于EP管中，對肝功能指標測定。

1.6肝硬化指標測定 采用ELISA法測定肝硬化指標，操作方法按試劑盒說明進行操作，采用酶標儀進行測定。

1.7抗氧化指標及HyP、NO、NOS測定 采用ELAIA法，操作方法按試劑盒說明進行，采用酶標儀測定。

1.8統(tǒng)計學處理 采用SPSS13.0進行方差分析、t檢驗。

2 結(jié) 果

2.1體重變化 治療期間，空白組和模型組體重變化較小。心得安組、丹參高劑量組和丹參低劑量組體重呈逐漸增長趨勢。見表1。

表1 各組治療后不同時間大鼠體重變化

2.2臟器指數(shù)測定結(jié)果 造模后，模型組肝臟指數(shù)和脾指數(shù)極顯著升高(P<0.001)，胃指數(shù)顯著升高(P<0.01)。與模型組比較，心得安、丹參高劑量、丹參低劑量組肝臟指數(shù)、脾指數(shù)顯著降低，丹參高劑量組胃指數(shù)顯著降低(P<0.01)。見表2。

表2 各組臟器指數(shù)

2.3門靜脈壓力測定結(jié)果 與空白組〔(2.12±0.38)mmHg〕比較，模型組門靜脈壓力〔(4.33±0.87)mmHg〕極顯著升高(P<0.001)。與模型組比較，丹參高劑量和丹參低劑量組門靜脈壓力〔(2.89±0.83)、(3.14±0.67)mmHg〕顯著降低(P<0.01)，心得安組門靜脈壓力〔(3.48±1.10)mmHg〕降低較小，無顯著性。

2.4肝功能檢測結(jié)果 與空白組比較，模型組膽堿酯酶、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶和總膽紅素顯著增高(P<0.05,P<0.01)；堿性磷酸酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、間接膽紅素、總蛋白、白蛋白顯著降低(P<0.01)。與模型組比較，心得安組堿性磷酸酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、總蛋白顯著增高(P<0.05)，直接膽紅素顯著降低(P<0.05)。丹參高劑量組膽堿酯酶、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、總膽紅素直接膽紅素顯著降低(P<0.05，P<0.01,P<0.001)，堿性磷酸酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、間接膽紅素、總蛋白、白蛋白顯著升高(P<0.05,P<0.01)。丹參低劑量組丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、直接膽紅素顯著降低(P<0.05),白球比、間接膽紅素、總蛋白、白蛋白顯著升高(P<0.05,P<0.01)。丹參高劑量藥效優(yōu)于心得安和丹參低劑量。見表3。

表3 各組肝功能檢測結(jié)果

2.5肝硬化指標測定 模型組與空白組比較，肝硬化指標含量顯著升高(P<0.01)。心得安、丹參高劑量、丹參低劑量組肝硬化指標明顯改善，以丹參高劑量較好。見表4。

表4 各組肝硬化指標測定結(jié)果

2.6抗氧化指標測定結(jié)果 模型組與空白組比較，體內(nèi)MDA含量顯著升高(P<0.05)，SOD含量極顯著降低(P<0.01)。心得安、丹參高劑量和丹參低劑量組較模型組MDA含量降低(P<0.05，P<0.01)，心得安、丹參高劑量組SOD顯著升高(P<0.01,P<0.001)。見表5。

表5 各組抗氧化指標測定結(jié)果

2.7HyP測定結(jié)果 模型組HyP含量〔(371.0±107.1)ng/ml〕較空白組〔(253.91±19.22)ng/ml〕顯著升高(P<0.01)。心得安、丹參高劑量和丹參低劑量組HyP水平〔(253.08±49.87)、(262.92±69.90)、(237.45±61.57)ng/ml〕較模型組顯著降低(P<0.05)。

2.8NO、NOS測定結(jié)果 模型組與空白組比較，血清NO、NOS含量顯著降低(P<0.001)。與模型組比較，心得安組和丹參低劑量組NO、NOS含量顯著升高(P<0.05)，丹參高劑量組NO、NOS含量顯著升高(P<0.01)。見表6。

表6 各組NO、NOS結(jié)果

3 討 論

目前，國內(nèi)外對門靜脈高壓的研究主要以手術(shù)治療，對動物門靜脈高壓模型的研究較少，采用40%CC14皮下注射，可成功造成大鼠門靜脈高壓模型，方法較簡單、經(jīng)費少，且大鼠模型較好。本實驗結(jié)果表明丹參自乳化微乳可顯著降低門靜脈高壓。

丹參自乳化微乳可明顯改善肝硬化指標，說明對肝硬化具有一定治療作用，可改善肝功能。NO在體內(nèi)可同時體現(xiàn)促氧化和抗氧化作用，而NOS主要參與調(diào)節(jié)血管張力和血流分布，同時可促進產(chǎn)生NO，本試驗結(jié)果顯示，大鼠造模后，血清中NO、NOS均極顯著下降，給藥后，二者含量有所提高，但未完全達到正常水平，丹參效果較心得安效果好。提示丹參降低門靜脈高壓作用可能與NOS水平升高有關(guān)。