鄒德勇　楊智越　杜春梅

摘要 為了得到能夠有效抑制馬唐Digitaria sanguinalis生長的生防微生物，在農(nóng)田采集馬唐種子，進行萌發(fā)試驗，觀察種子的萌發(fā)狀況，從發(fā)病的種子和馬唐幼苗基部分離致病菌，通過形態(tài)學觀察以及ITS 序列分析對致病菌進行鑒定。結果從罹病的馬唐幼苗基部分離得到一株致病菌HD-06，該菌株的發(fā)酵液用水稀釋至60%濃度時，對馬唐種子的萌發(fā)抑制率和幼苗發(fā)病率均達到100%，這說明菌株HD-06對馬唐有較好的生物防治作用。根據(jù)其形態(tài)學特點及ITS 序列分析結果，鑒定菌株HD-06為暗球腔菌屬Phaeosphaeria的真菌。這些結果為深入研究其對馬唐的防治作用奠定了基礎。

關鍵詞 馬唐; 生防菌; 致病性; 鑒定

中圖分類號： S 476

文獻標識碼： A

DOI： 10.16688/j.zwbh.2019166

Pathogenicity of Phaeosphaeria sp. HD-06 against Digitaria sanguinalis and the preliminary identification of the strain

ZOU Deyong1，2， YANG Zhiyue3， DU Chunmei1，2*

（1. Engineering Research Center of Agricultural Microbiology Technology， Ministry of Education， Heilongjiang University，

Harbin 150500， China; 2. Key Laboratory of Microbiology， College of Heilongjiang Province， School of Life Sciences，

Heilongjiang University， Harbin 150080， China; 3. Harbin Xingpu Feed Company， Harbin 150010， China）

Abstract

In order to obtain the effective biocontrol microorganism for inhibiting the growth of Digitaria sanguinalis， the seeds of crabgrass were collected in the farmland， and seed germination test was carried out. The germinating situation was tracked over time; meanwhile， the pathogens were isolated from the diseased seeds and the seedling base， and morphological observation and ITS sequence analysis were conducted to identify the pathogenic fungi. The results showed that a disease-causing strain named HD-06 was successfully isolated from diseased crabgrass seedling base. When the fermentation broth of strain HD-06 was diluted by 60% with water， the germination inhibition rate and seedling disease incidence rate of crabgrass reached 100% after treatment. It indicated that strain HD-06 had a good biological control effect on crabgrass. According to the morphological characteristics and ITS sequence analysis results， strain HD-06 was identified as a fungus of the genus Phaeosphaeria. These results laid a foundation for further research on its control effect on crabgrass.

Key words

Digitaria sanguinalis; biocontrol bacteria; pathogenicity; identification

馬唐Digitaria sanguinalis是禾本科單子葉植物，是一種秋熟作物農(nóng)田中的雜草，在熱帶和溫帶地區(qū)的36個國家均有分布，對30多種農(nóng)作物的生產(chǎn)有嚴重危害[1]。由于馬唐具有極強的抗逆能力和營養(yǎng)競爭力，能夠在水、旱等多種類型的連作農(nóng)田中快速蔓延，極難防除，被列為18種惡性雜草之一[2]?；瘜W農(nóng)藥的長期施用導致馬唐已經(jīng)對草甘膦[3-4]、氟磺草胺、噁唑酰草胺、精噁唑禾草靈、煙嘧磺隆[5-6]等多種除草劑產(chǎn)生了抗藥性。而一些化學除草劑具有的潛在致癌致畸毒性也導致人們對其應用產(chǎn)生了一定的抵觸心理。而生物除草劑具有無毒、無害、無污染、生物安全性高，且不易產(chǎn)生抗藥性等優(yōu)點，成為化學農(nóng)藥的良好替代品，引起人們的廣泛關注。

目前國內(nèi)外可用于防除雜草的真菌主要有10屬8種[7]，其中柄銹菌屬Puccinia sp.、鐮刀菌屬Fusarium sp.、尾孢屬Cercospora sp.、鏈格孢屬Alternaria sp.等的種類較多，目前在生產(chǎn)中應用的真菌除草劑主要有Collegeo（主要成分為盤長孢狀刺盤孢Colletotrichum gloeosporioides）、Devine（主要成分為棕櫚疫霉Phytophthora palmivora的厚垣孢子懸液）、魯保一號（主要成分為膠孢炭疽菌菟絲子專化型Colletotrichum gloeosporioides（Penz.） Sacc. f.sp. cuscutae）和Biochon（主要成分為銀葉菌Chondrostereum purpureum）以及敵散克（主要成分為畫眉草彎孢霉菌Curvularia eragrostidis QZ-2000），其中敵散克是主要針對馬唐研制的真菌除草劑[8]。另外，許多細菌及其代謝物也具有防除馬唐的作用，如日本研發(fā)的細菌除草劑Camperico（主要成分為甘藍黑腐病黃單胞菌Xanthomonas campestris pv. campestris JT4P82）已經(jīng)商品化，鏈霉菌Streptomyces sp.638產(chǎn)生的茴香霉素能防除馬唐和稗草[9]，假單胞菌、歐文氏菌、細菌S4[10]對馬唐也具有良好的防效。盡管已報道的對馬唐有致病性的菌株有很多，但是真正商品化的防除馬唐的微生物制劑種類相對較少，且由于各種生防菌株的寄主范圍不同，其應用往往受到一定的限制，不能完全滿足生產(chǎn)的需要。因此，繼續(xù)分離、篩選和鑒定馬唐生防菌株能夠為研發(fā)新型、高效的生物除草劑提供微生物品種資源，具有重要的科學意義和廣泛的應用前景。

已報道的馬唐致病菌多是從罹病的葉片分離得到的，極少有從種子和罹病幼苗上分離得到[11]。黑龍江大學微生物學重點實驗室從罹病馬唐幼苗的基部分離到一株能夠有效抑制馬唐種子萌發(fā)和幼苗生長的生防菌株，對其進行了形態(tài)學觀察和ITS序列分析，為后續(xù)進一步研究其防除馬唐的機理，開發(fā)新型除草劑奠定了基礎。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

馬唐種子：鑒于秋季采集的馬唐種子萌發(fā)率較低，而越冬的種子萌發(fā)率較高，本試驗采用的種子為3月末從黑龍江省齊齊哈爾市梅里斯區(qū)雅爾塞鎮(zhèn)農(nóng)田采集的自然條件下越冬的種子。

培養(yǎng)基：以馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基（PDA）為固體培養(yǎng)基，在PDA的基礎上，不添加瓊脂為液體培養(yǎng)基，121℃滅菌20 min。

試劑：葡萄糖、瓊脂、次氯酸鈉、CTAB、氯仿、異戊醇、異丙醇、無水乙醇、溴化乙錠、瓊脂糖、dNTPs（2.5 mmol/L）、10×PCR Buffer、Taq DNA聚合酶和DNA Marker DL2000，均購于寶泰克有限公司。

儀器：DYY-12電泳儀，北京六一儀器廠;Omega 10 UVP凝膠成像系統(tǒng)，德國UVP公司;TC-512 Thermal CylerPCR儀，英國Techne公司;CX31體視顯微鏡，奧林巴斯有限公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 馬唐病原真菌的分離

挑選外觀成熟飽滿的馬唐種子，用2%次氯酸鈉消毒5 min，無菌水沖洗3遍，用滅菌濾紙吸干種子表面殘留的水分后，置于鋪有滅菌的濕潤濾紙的培養(yǎng)皿中，每皿加10 mL無菌水， 25℃恒溫保濕培養(yǎng)7 d，觀察萌發(fā)情況，分別挑取發(fā)病種子和發(fā)病幼苗上的菌絲體接種于PDA培養(yǎng)基上，待菌落形成后，挑取菌落邊緣的菌絲體，純化培養(yǎng)，備用。

1.2.2 馬唐生防菌株的篩選

用無菌水沖洗各分離株培養(yǎng)物表面，制成1×106個/mL的孢子懸浮液，對馬唐種子浸種處理6 h，以無菌水為對照。然后置于鋪有滅菌濾紙的無菌PDA培養(yǎng)皿中，每皿50粒，每處理3次重復，25℃光照培養(yǎng)箱中保濕培養(yǎng)，記錄種子萌發(fā)率，計算萌發(fā)抑制率。

1.2.3 菌株HD-06的發(fā)酵液對馬唐的致病性

皿栽試驗：將菌株HD-06在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)5 d，挑取菌絲體，接種于馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基中（每瓶裝液量為50 mL/250 mL）中，28℃，180 r/min發(fā)酵培養(yǎng)4 d。發(fā)酵液用無菌水稀釋至終濃度分別為60%、40%和20%，對馬唐種子進行浸種處理，以無菌培養(yǎng)基作為對照，然后置于鋪有滅菌保濕濾紙的無菌培養(yǎng)皿中進行萌發(fā)試驗，每處理3次重復，調(diào)查種子的萌發(fā)率和萌發(fā)6 d后幼苗的發(fā)病率。

盆栽試驗：為模擬大田土壤生態(tài)環(huán)境，采用未滅菌的花壇土壤進行盆栽試驗。將花壇土與蛭石按照1∶1的比例混合。選取直徑15 cm，高度14 cm的花盆，盆內(nèi)裝2/3的土。 每盆播撒100粒成熟飽滿的馬唐種子，對照組噴施20 mL無菌發(fā)酵培養(yǎng)液，處理組噴施20 mL發(fā)酵培養(yǎng)4 d的HD-06含菌發(fā)酵液，然后覆土1 cm，表層土壓實平整后，室內(nèi)自然溫度條件下培養(yǎng)。每處理3盆。定期觀察記錄各處理馬唐生長情況，在接種37 d后進行調(diào)查并記錄數(shù)據(jù)。

1.2.4 生防菌株的鑒定

1.2.4.1 形態(tài)觀察

將菌株HD-06接種于PDA平板上，28℃連續(xù)培養(yǎng)25 d，定期對菌株形態(tài)進行觀察，測量和拍照。

1.2.4.2 分子生物學鑒定

采用CTAB法提取真菌DNA，采用上海生工生物公司合成的引物 ITS4（5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′）和ITS5（5′-GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3′）對菌株的ITS序列進行PCR擴增[12]。50 μL PCR反應體系：10 μmol/L的上游引物和下游引物各2 μL、DNA模板2 μL、10×PCR Buffer 5 μL、2.5 mmol/L dNTP Mixture 1 μL、5 U/μL TaqDNA聚合酶1 μL，補充ddH2O至50 μL。PCR擴增反應程序：94℃預變性5 min;95℃變性1 min，54℃退火40 s，72℃延伸40 s，循環(huán)34次，產(chǎn)物送博仕生物公司進行測序。在NCBI數(shù)據(jù)庫中進行BLAST比對分析，并應用MEGA 5.1軟件構建系統(tǒng)發(fā)育樹，初步確定其系統(tǒng)發(fā)育地位。

根據(jù)生防真菌的形態(tài)學特征及ITS序列分析，查閱植物病原真菌鑒定手冊和相關文獻，明確其分類地位[13]。

1.3 計算和統(tǒng)計方法

萌發(fā)抑制率=（未萌發(fā)種子數(shù)/種子總數(shù)）×100%，利用SPSS軟件Duncan氏多重比較進行差異顯著性分析。種子萌發(fā)率=（已萌發(fā)種子數(shù)/種子總數(shù)）×100%，致病率=（發(fā)病株數(shù)/萌發(fā)總株數(shù)）×100%，用EXCEL軟件t測驗法分析檢驗處理間的效應，用SPSS軟件LSD法檢驗平均值之間的差異。

2 結果與分析

2.1 馬唐生防菌株的分離和篩選

從馬唐種子和罹病幼苗基部共分離得到6株真菌。它們對馬唐種子的萌發(fā)均表現(xiàn)出一定的抑制作用（表1），其中菌株HD-06處理對馬唐種子的萌發(fā)抑制率最高，為43.0%，方差分析結果表明，各菌株間的萌發(fā)抑制率差異達到顯著水平（F=38.95，P<0.05）。

2.2 菌株HD-06發(fā)酵液對馬唐的致病性

皿栽試驗結果表明（表2，圖1），當對照組馬唐種子的萌發(fā)率達到90%時，菌株HD-06的20%、40%和60%濃度發(fā)酵液處理的種子萌發(fā)率僅為30%、10%和0（F=1 733.33，P<0.01），差異達到極顯著水平，說明HD-06的發(fā)酵液對馬唐種子的萌發(fā)具有較好的抑制作用。各處理植株情況見圖1，對照（圖1a）幼苗葉片鮮綠，芽長和根長顯著高于各發(fā)酵液處理（芽長F=13.1，P<0.05;根長F=510.75，P<0.01）（圖1b、c），而發(fā)酵液處理的種子已多數(shù)霉爛發(fā)病，看不出種子原來的形狀，只能看到致病菌的霉層和菌絲體;少數(shù)萌發(fā)并長成幼苗的種子，其長勢、芽長、根長均顯著低于對照（圖1d）。雖然已萌發(fā)種子的霉爛程度要輕于未萌發(fā)的種子，仍能清晰地看出種子的形狀，但其莖部和根部呈現(xiàn)明顯的水漬狀，且葉片明顯變黃（圖1e）。

盆栽試驗結果（表3）表明，對照組與處理組間的發(fā)芽率、致病率、株高以及單株地上部干重都存在顯著差異（發(fā)芽率F=45.0，P<0.01;致病率F=74.33，P<0.01;株高F=13.77，P<0.05;單株結籽數(shù)F=1.94，P>0.05;單株地上部干重F=64.66，P<0.01）。說明施用菌株HD-06可以起到抑制馬唐種子萌發(fā)和幼苗生長的作用，具有較好的除草潛力。當然，可能由于土壤中的狀況比較復雜，有較多的物理化學和生物方面的因素影響馬唐的萌發(fā)和生長，導致盆栽防治效果不如皿栽防治效果好。這也說明，要想讓生防菌株在田間表現(xiàn)更好的除草效果，除了需要高效菌株外，還需要合理的制劑方案，使用合理的助劑和施用方法，才能進一步提高微生物除草劑的應用效果。

2.3 菌株HD-06的鑒定

2.3.1 形態(tài)觀察

對菌株HD-06的形態(tài)觀察結果表明，在PDA培養(yǎng)基上，菌落正面藍灰色，菌絲向上生長，毛絨狀;菌落背面黑褐色，能觀察到小黑點狀的子囊殼，針刺時有堅硬感。培養(yǎng)15～20 d時，挑取小黑點部位壓碎制片，在顯微鏡下觀察，能看到大量的子囊簇生在墊狀結構上（圖2a）。子囊頂端圓，壁薄，圓柱狀，大小為（52～103）μm×（7.7～11.6）μm，內(nèi)含有8個子囊孢子，具有膠質(zhì)鞘（圖2b）;子囊孢子單列至3列，多為紡錘形，直或稍彎曲，大?。?0.6～36）μm×（3.9～5.2）μm，L/W約為5.2，被5個隔膜分成6個細胞，中間細胞膨大，一端細胞略尖，另一端有一個尖細的柄細胞（圖2c， d， e），中間的2～3個細胞均分布有較多的滴狀油球。子囊孢子為黃綠色，中間兩個細胞顏色較深（圖2c， e）。孢子萌發(fā)時，顏色變深，呈褐色，細胞整體明顯膨大，尤其是頂部細胞膨大成鈍圓狀，孢子一端萌發(fā)出絲狀體（圖2e）。

2.3.2 菌株HD-06的ITS序列分析

菌株HD-06的ITS序列長度為613 bp，將ITS序列提交到NCBI數(shù)據(jù)庫中，應用BLAST軟件從數(shù)據(jù)庫中搜索出相關菌株的ITS序列，與已知菌的ITS序列進行同源性比較，分析其系統(tǒng)發(fā)育關系。GenBank數(shù)據(jù)庫比對結果表明，菌株HD-06的ITS序列（MK110375）與座囊菌綱格孢腔菌目的暗球腔菌屬真菌Phaeosphaeria sp. CBS123.76（KF251194.1）和小球腔菌屬Leptosphaeria sp. VegaE4-83（EF694661.1）相似度均為99%，集合在同一大分支（圖3），且暗球腔菌屬真菌和小球腔菌屬真菌的ITS序列在系統(tǒng)發(fā)育上極為相近，即菌株HD-06可能是格孢腔菌目真菌中的暗球腔菌屬或小球腔菌屬真菌。

2.3.3 鑒定結論

菌株HD-06的形態(tài)學特征符合子囊菌亞門座囊菌綱格孢菌目的形態(tài)學特征[14]。暗球腔菌屬Phaeosphaeria 和小球腔菌屬 Leptosphaeria 都是格孢腔菌目中的大屬，而且親緣關系較為相近，它們的ITS序列在系統(tǒng)發(fā)育上界限并不清晰，建屬初期關于它們的分類學地位一直存在爭議[15]。Holm在格孢菌科的研究中，將Phaeosphaeria界定為一個獨立的屬，理由是這類菌的子囊座具有擬側絲，將P.oryzae I. Miyake定為模式種，并將原來屬于Leptosphaeria Ces. & De Not. 的17個具有由擬

薄壁組織構成的小子囊座和具單子葉植物寄主的種移入Phaeosphaeria中[16]。李文英等利用18S和28S

序列對座囊菌目及相關類群屬間關系的系統(tǒng)學進行了初探，發(fā)現(xiàn)格孢腔菌目參試的 7 個屬形成一個單系群，但屬間的支持率非常低[17]。分子系統(tǒng)學研究表明子囊及子囊孢子的形態(tài)及寄主范圍（侵染單子葉植物的通常為Phaeosphaeria，侵染雙子葉植物的通常為Leptosphaeria）對界定這兩個屬菌株的分類地位非常重要[18]。菌株 HD-06所侵染的馬唐為單子葉植物，因此，根據(jù)其寄主，我們將菌株HD-06初步鑒定為暗球腔菌屬Phaeosphaeria真菌。

3 討論

馬唐是世界性惡性雜草，現(xiàn)有的微生物源除草劑還不能滿足農(nóng)業(yè)的需求。因此，廣泛篩選對馬唐具有防除作用的生防微生物，具有較重要的科學意義。我們分離到的生防真菌HD-06的發(fā)酵液能夠抑制馬唐種子的萌發(fā)，對馬唐幼苗有強致病性，具有開發(fā)為生物除草劑的潛力，經(jīng)形態(tài)學、分子生物學特性及其侵染單子葉植物的綜合特征，鑒定該菌株為暗球腔菌屬真菌。目前相關文獻已經(jīng)報道了10個屬的真菌對馬唐具有良好的防除效果，包括刺盤孢屬Colletotrichum、疫霉屬Phytophthora、鐮刀菌屬Fusarium、交鏈孢屬Alternaria、柄銹菌屬Puccinia、尾孢屬Cercospora、葉黑粉菌屬Entyloma、殼單孢菌屬Ascochyta、核盤菌屬Sclerotinia、彎孢屬Curvularia[19]，而上述10個屬的真菌多數(shù)是從馬唐葉片分離得到的，至今未見有關在馬唐的種子上分離到暗球腔菌屬真菌的報道。菌株HD-06的分離與鑒定，擴大了馬唐生防菌的資源庫。

到目前為止，暗球腔菌屬Phaeosphaeria已有114個種[20]，中國對該屬研究報道較少，喬倩等曾報道了中國黃海黃島海域潮間帶木上的2個中國新記錄種新海暗球腔菌P.neomaritima 和高山暗球腔菌P.subalpina[21];于輝霞等報道了來自福建武夷山、安徽黃山和山東昆崳山的3個中國新記錄種，肩狀暗球腔菌P.humerata、馬西山暗球腔菌P.marciensis和香蒲暗球腔菌P.typharum[20]。但是在馬唐上未見分離到該屬致病真菌的報道。

4 結論

HD-06為暗球腔菌屬Phaeosphaeria真菌，該菌株60%濃度的發(fā)酵液對馬唐種子的萌發(fā)抑制率為100%，處理后馬唐幼苗發(fā)病率達到100%;在盆栽試驗中發(fā)現(xiàn)經(jīng)其發(fā)酵液處理后的馬唐種子的萌發(fā)抑制率和幼苗發(fā)病率均遠遠高于空白對照組，且對馬唐植株的株高、結籽數(shù)以及干重都有顯著影響，顯示出對馬唐的萌發(fā)和生長都有很好的抑制效果。今后我們將對菌株HD-06的寄主范圍和安全性進行評估，對其侵染和發(fā)病過程進行觀察，分析其致病機理，并在此基礎上對其發(fā)酵條件進行優(yōu)化，對發(fā)酵液中能夠防除馬唐的有效物質(zhì)進行分離純化，為開發(fā)新型馬唐生物除草劑奠定基礎。

參考文獻

[1] 李健， 李巖， 高興祥， 等. 馬唐生防菌厚垣孢鐮刀菌ZC201301的生物學特性研究[J]. 草業(yè)學報， 2016， 25（3）：234-239.

[2] 陳世國， 強勝， 毛嬋娟. 草甘膦作用機制和抗性研究進展[J]. 植物保護， 2017，43（2）：17-24.

[3] GREEN J M. Current state of herbicides in herbicide-resistant crops [J]. Pest Management Science， 2014，70（9）：1351-1357.

[4] 李玉， 宗濤， 楊浩娜， 等. 長江中下游棉田馬唐（Digitaria sanguinalis）對草甘膦的抗藥性初步研究[J]. 棉花學報， 2016，28（3）： 300-306.

[5] LI Jiao， LI Mei， GAO Xingxiang， et al. A novel amino acid substitution Trp574Arg in acetolactate synthase （ALS）confers broad resistance to ALS-inhibiting herbicides in crabgrass （Digitaria sanguinalis） [J]. Pest Management Science， 2017， 73（1）：2538-2543.

[6] MEI Yu， SI Chong， LIU Mingjie， et al. Investigation of resistance levels and mechanisms to nicosulfuron conferred by non-target-site mechanisms in large crabgrass （Digitaria sanguinalis L.） from China [J]. Pesticide Biochemistry and Physiology， 2017， 141：84-89.

[7] 屈洋， 馮佰利. 雜草生物控制技術研究進展[J]. 中國農(nóng)學通報， 2019， 35（4）：114-121.

[8] 王建書， 朱云枝， 趙敏， 等. 畫眉草彎孢霉菌株QZ-2000與低劑量化學除草劑復配增效機制研究[J]. 河南農(nóng)業(yè)科學， 2010， 39（10）：65-67.

[9] 冀營光， 黃亞麗， 史延茂， 等. 細菌除草劑馬唐致病菌的篩選[J]. 生物技術，2006，16（3）：71-74.

[10]楊葉， 胡美姣， 王蘭英. 馬唐草新月彎孢霉生物學特性及其代謝產(chǎn)物活性測定[J]. 中國生物防治， 2009，25（2）：154-159.

[11]IKLEY J T， WISE K A， JOHNSON W G. Annual ryegrass （Lolium multiflorum）， johnsongrass （Sorghum halepense）， and large crabgrass （Digitaria sanguinalis）are alternative hosts for Clavibacter michiganensis subsp. nebraskensis， causal agent of gosss wilt of corn [J]. Weed Science， 2017， 63（4）：901-909.

[12]KHAN A M， BHADAURIA S. Molecular characterization of keratin degrading fungi isolated from semi-arid soil by PCR using ITS4 and ITS5 primers [J/OL]. Journal of King Saud University-Science， 2018. DOI： 10.1016/j.jksus.2018.04.014.

[13]SOUZA A R C D， BALDONI D B， LIMA J， et al. Selection， isolation， and identification of fungi for bioherbicide production [J]. Brazilian Journal of Microbiology， 2016， 48（1）：101-108.

[14]SENANAYAKE I C， JEEWON R， CAMPORESI E， et al. Sulcispora supratumida sp. nov. （Phaeosphaeriaceae， Pleosporales） on Anthoxanthum odoratum from Italy [J]. Journal Citation Reports， 2018， 38： 35-46.

[15]HYDE K D， JONES E B G， LIU Jiankui， et al. Families of Dothideomycetes： In loving memory of Majorie Phyllis Hyde （affectionately known as Mum or Marj）， 29 August 1921-18 January 2013—without mums determination， a character passed on to children， this treatise would never have been completed—K.D. Hyde [J]. Fungal Diversity， 2013，63（1）：1-313.

[16]HOLM L. Etudes taxonomiques sur les pléosporacéess [J]. Symbolae Botanicae Upsalienses， 1957， 14（3）：1-188.

[17]李文英， 莊文穎. 座囊菌目及相關類群屬間關系的系統(tǒng)學初探[J]. 菌物學報，2009， 28（2）： 161-170.

[18]SENANAYAKE I C， CROUS P W， GROENEWALD J Z， et al. Families of Diaporthales based on morphological and phylogenetic evidence [J]. Studies in Mycology， 2017， 86（C）：217-296.

[19]ZHANG Lihui， KANG Zhanhai， JIAO Xu， et al. Isolation and structural identification of herbicidal toxin fractions produced by Pythium aphanidermatum [J]. Journal of Integrative Agriculture， 2010， 9（7）：995-1000.

[20]于輝霞， 遲勝起， 李秀嵐， 等. 暗球腔菌屬三個中國新記錄種[J]. 菌物學報， 2013， 32（1）：136-141.

[21]喬倩， 金靜. 暗球腔菌屬的2個中國新記錄種[J]. 青島農(nóng)業(yè)大學學報（自然科學版）， 2011， 28（1）：44-46.

（責任編輯：田 喆）