閻欲曉，粟桂嬌，何勇強(qiáng)

（廣西大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，廣西 南寧 530004）

植物多酚是植物中具有多個(gè)酚羥基結(jié)構(gòu)的化合物的總稱，通常分為可溶性多酚與不可溶性-結(jié)合態(tài)多酚，其中可溶性多酚易于用有機(jī)溶劑直接提取，結(jié)合態(tài)多酚類通常與植物細(xì)胞壁中的纖維素、蛋白質(zhì)、木質(zhì)素、糖基、有機(jī)酸結(jié)合成共價(jià)復(fù)合物而難以提取[1-4]。

近年來，微生物固態(tài)發(fā)酵技術(shù)逐漸應(yīng)用于植物酚類物質(zhì)提取研究中，通過微生物發(fā)酵產(chǎn)生的復(fù)合酶系（纖維素水解酶、木質(zhì)素水解酶和果膠水解酶等）的水解作用，破壞細(xì)胞壁纖維成分的致密結(jié)構(gòu)或者切除多酚物質(zhì)與其他物質(zhì)之間交聯(lián)的共價(jià)鍵，從而促進(jìn)酚類物質(zhì)的釋放和轉(zhuǎn)化，進(jìn)而影響其生物活性的變化[5]。有學(xué)者利用黑曲霉和少孢根霉固態(tài)發(fā)酵果汁加工后副產(chǎn)品果渣，發(fā)酵后果渣中多酚、黃酮的含量有較大增加，自由基清除活性顯著上升[6-7]。Bei Qi等[8]研究表明，燕麥經(jīng)紅曲固態(tài)發(fā)酵后，游離型和共軛型酚類物質(zhì)的含量顯著增加，并且有效提升了燕麥的生物活性。Saharan等[9]利用真菌對(duì)5 種谷物原料進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵，發(fā)酵后谷物酚類物質(zhì)含量的增加與發(fā)酵過程中的木聚糖酶和β-葡萄糖苷酶酶活性呈顯著相關(guān)；Wang Lu等[10-11]研究發(fā)現(xiàn)，使用混合真菌發(fā)酵番石榴葉后其總酚和槲皮素含量比發(fā)酵前增加了2.06 倍和3.02 倍，發(fā)酵過程中產(chǎn)生的總纖維素酶活力、木聚糖酶活力與α-淀粉酶活力相對(duì)較高，能有效切除番石榴多酚與細(xì)胞壁上纖維素、半纖維素、多糖組分之間的化學(xué)鍵，釋放出更多的可溶性多酚。

甘蔗葉是甘蔗制糖產(chǎn)業(yè)中主要的副產(chǎn)品，產(chǎn)量非常大。研究表明，甘蔗葉中含有一定量的酚類物質(zhì)，主要是黃酮[12-14]、酚酸類[15-16]，在不同甘蔗品種（系）葉片中含量差異較大[17]，大致在0.5%～2%范圍內(nèi)[17]，具有抗氧化[18]、抗突變[19]、抗炎[20]、降血糖[21]等生理功能。但甘蔗葉中大部分酚酸都以結(jié)合態(tài)的形式存在[22]，為更有效提取甘蔗葉中的酚類物質(zhì)，本研究利用黑曲霉對(duì)甘蔗葉進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵，探討發(fā)酵過程對(duì)甘蔗葉中多酚、黃酮的釋放及抗氧化性能的影響，旨在為甘蔗葉的深度開發(fā)利用提供理論支持。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

甘蔗葉，采摘自廣西大學(xué)農(nóng)學(xué)院試驗(yàn)田，取甘蔗莖頂上嫩節(jié)及青綠色葉片，自然干燥后粉碎過20 目篩；黑曲霉GXU003，廣西大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院實(shí)驗(yàn)室分離保藏；斜面培養(yǎng)基：馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基；種子培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g/L，葡萄糖20 g/L，自然pH值，水1 000 mL。

福林-酚（分析純） 北京普博欣生物科技有限責(zé)任公司；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（分析純） 生工生物工程（上海）有限公司；1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）、對(duì)硝基苯酚（p-nitrophenol，p-NP）、對(duì)硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷（p-nitrophenylβ-D-glucopyranoside，p-NPG）（均為分析純） 美國Sigma公司；其余試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

超聲波破碎儀 美國SONIC & MATERKALS公司；3-18K高速冷凍離心機(jī) 德國Sigma公司；全自動(dòng)酶標(biāo)儀Elx80 美國BioTek Instruments公司；UVmini-1240紫外分光光度計(jì) 島津企業(yè)管理（中國）有限公司。

1.3 方法

1.3.1 黑曲霉種子液的制備

取馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)的黑曲霉斜面2 支，在無菌條件下，各用5 mL無菌水洗下孢子液，將黑曲霉菌懸液全部接種到50 mL的種子培養(yǎng)液中，在30 ℃、180 r/min條件下培養(yǎng)8 h。

1.3.2 甘蔗葉培養(yǎng)基制備

稱取3.5 g甘蔗葉于250 mL的三角瓶中，加入1 g麩皮及1 g豆粕，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基含水量，于121 ℃滅菌20 min，冷卻后備用。

1.3.3 甘蔗葉固態(tài)發(fā)酵單因素試驗(yàn)

接種量的選擇：分別以7、14、21、28、35 mL/100 g的接種量將黑曲霉種子液接入甘蔗葉固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基，培養(yǎng)基含水量為60%，30 ℃培養(yǎng)3 d。每天手動(dòng)搖瓶2 次，發(fā)酵結(jié)束后，產(chǎn)品置于60 ℃的烘箱中烘干，保存于干燥器中。以未接菌的甘蔗葉培養(yǎng)基為對(duì)照組。

培養(yǎng)基含水量的選擇：控制培養(yǎng)基的初始含水量分別為40%、50%、60%、70%，按28 mL/100 g接種量將黑曲霉種子接入不同含水量培養(yǎng)基中，30 ℃培養(yǎng)3 d。

發(fā)酵時(shí)間的選擇：以28 mL/100 g的接種量接入黑曲霉，控制培養(yǎng)基的初始含水量60%，在30 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2、3、4、5、6 d。

1.3.4 甘蔗葉固態(tài)發(fā)酵正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

以發(fā)酵基質(zhì)中黃酮和多酚含量為綜合指標(biāo)，選取接種量、培養(yǎng)基含水量和發(fā)酵時(shí)間，進(jìn)行L9（34）3因素3水平正交試驗(yàn)，試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果見表1。

表1 L9（334）正交試驗(yàn)因素與水平Table 1 Coded levels for independent variables used in orthogonal array desiiggnn

1.3.5 甘蔗葉發(fā)酵產(chǎn)物中多酚、黃酮含量測定

1.3.5.1 活性成分的提取

取一定量的發(fā)酵和未發(fā)酵產(chǎn)品，以料液比1∶20（g/mL）加入60%乙醇溶液，在功率為300 W條件下超聲提取35 min，超聲結(jié)束后抽濾，收集濾液進(jìn)行黃酮和多酚含量測定。

1.3.5.2 多酚含量測定

按照GB/T 8313—2008《茶葉中茶多酚和兒茶素類含量的檢測方法》進(jìn)行測定。根據(jù)沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程y=11.425x+0.024 9（R2=0.999 8），計(jì)算樣品中多酚含量?？偡雍勘硎緸闆]食子酸干基當(dāng)量（mg/g）。

1.3.5.3 黃酮含量測定

使用硝酸鋁絡(luò)合分光光度法測定總黃酮含量[23]。按照蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計(jì)算樣品中總黃酮含量，具體為：y=11.831x－0.038 4（R2=0.999 6）。黃酮含量表示為蘆丁干基當(dāng)量（mg/g）。

1.3.6 發(fā)酵過程中酶活力測定

1.3.6.1 粗酶液的提取

取一定量的研磨后的發(fā)酵產(chǎn)物，按料水比1∶10（g/mL）加入蒸餾水，置于120 r/min、40 ℃恒溫?fù)u床1 h，隨后4 ℃、8 000 r/min離心10 min取上清液，即為粗酶液。

1.3.6.2 纖維素酶（羧甲基纖維素酶）活力測定

參照郝建宇等[24]的方法，略作修改。在20 mL刻度試管中加入粗酶液0.5 mL和羧甲基纖維素鈉懸浮液（0.05 mol/L檸檬酸緩沖液配制）1 mL，50 ℃水浴30 min后，立即加入3 mL 3,5-二硝基水楊酸試劑，沸水浴5 min。冷卻后定容到20 mL，于540 nm波長處測定吸光度。根據(jù)葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)方程計(jì)算葡萄糖質(zhì)量（以加入滅活0.5 mL粗酶液為空白對(duì)照）。1 g發(fā)酵基質(zhì)（干質(zhì)量），在酶最適反應(yīng)條件下，每小時(shí)分解纖維素產(chǎn)生1 μmol葡萄糖所需的酶量定義為1 個(gè)酶活力單位，用U/g表示。

1.3.6.3 β-葡萄糖苷酶活力測定

取160 μL的緩沖液和20 μL 20 mmol/L的p-NPG溶液混勻后，30 ℃預(yù)熱2 min，加入20 μL的粗酶液，反應(yīng)20 min，加入50 μL 2 mol/L Na2CO3溶液終止酶反應(yīng)，測定OD405nm。采用p-NP為標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（以加入20 μL已失活的酶液作為空白對(duì)照）。1 g發(fā)酵基質(zhì)（干質(zhì)量），在酶最適反應(yīng)條件下，每小時(shí)水解p-NPG釋放1 μmol p-NP所需的酶量定義為1 個(gè)酶活力單位，用U/g表示。1.3.7 羥自由基清除率測定

參照郭麗等[25]的方法，略作修改。試管中依次加入0.75 mmol/L鄰二氮菲-無水乙醇溶液1 mL、0.2 mol/L pH 7.40的磷酸緩沖液2 mL和去離子水1 mL，搖勻后加入0.75 mmol/L硫酸亞鐵溶液1 mL，混勻后加入0.01%雙氧水溶液1 mL，37 ℃恒溫水浴60 min，536 nm波長下測定反應(yīng)體系吸光度AP。1 mL去離子水代替1 mL 0.01%雙氧水溶液，其他操作方法同上，測定其吸光度AB。加入一定濃度樣液1 mL，代替1 mL去離子水，其他操作方法同上，測定其吸光度AS。羥自由基清除率計(jì)算如式（1）所示：

1.3.8 DPPH自由基清除測定

參照陳樹俊等[26]的方法，略作修改。取一定濃度的發(fā)酵產(chǎn)物待測樣液2 mL，加入0.3 mmol/L DPPH-乙醇溶液2 mL，搖勻后避光放置30 min，517 nm波長處測定吸光度。DPPH自由基清除率計(jì)算如式（2）所示：

式中：A為DPPH溶液吸光度；As為DPPH混合樣液的吸光度；Ar為樣液+60%乙醇溶液的吸光度。

1.4 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素試驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 接種量對(duì)發(fā)酵甘蔗葉多酚、黃酮含量的影響

圖1 接種量對(duì)黃酮（A）和多酚（B）含量的影響Fig. 1 Effect of inoculum volume on the release of flavonoids (A) and polyphenols (B)

從圖1可以看出，經(jīng)不同接種量的黑曲霉發(fā)酵處理3 d后，發(fā)酵甘蔗葉中黃酮和多酚的釋放量均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。在接種量為7～28 mL/100 g的范圍內(nèi)，黃酮和多酚含量隨接種量的增加而提高，當(dāng)接種量為28 mL/100 g時(shí)黃酮和多酚釋放量均達(dá)到最高，分別為9.65 mg/g和9.47 mg/g，而接種量增加至35 mL/100 g時(shí)，黃酮和多酚的釋放量反而有所下降。原因可能是當(dāng)接種量過大時(shí)，培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)不能滿足菌體生長需要，一些酚類化合物被微生物當(dāng)作碳源利用[27]。

2.1.2 培養(yǎng)基含水量對(duì)發(fā)酵甘蔗葉多酚、黃酮含量的影響

圖2 培養(yǎng)基含水量對(duì)黃酮（A）和多酚（B）含量的影響Fig. 2 Effect of initial water content of culture medium on the release of flavonoids (A) and polyphenols (B)

由圖2可知，當(dāng)培養(yǎng)基含水量為40%時(shí)，由于基質(zhì)中的自由水不足以維持黑曲霉菌體生長所需，進(jìn)而影響細(xì)胞代謝，導(dǎo)致黃酮、多酚的釋放量較低；而含水量達(dá)到70%時(shí)，培養(yǎng)基出現(xiàn)結(jié)塊，傳質(zhì)困難，也影響了發(fā)酵效果。當(dāng)含水量為50%時(shí)黃酮釋放效果最好，達(dá)到9.90 mg/g，含水量為60%時(shí)多酚含量達(dá)到最大，為10.35 mg/g。

2.1.3 發(fā)酵時(shí)間對(duì)發(fā)酵甘蔗葉多酚、黃酮含量的影響

圖3 發(fā)酵時(shí)間對(duì)黃酮（A）和多酚（B）含量的影響Fig. 3 Effect of fermentation time on the release of flavonoids (A) and polyphenols (B)

從圖3可以看出，與對(duì)照組相比，甘蔗葉經(jīng)過黑曲霉發(fā)酵處理的2～6 d內(nèi)，黃酮和多酚含量逐漸增高，且均比未發(fā)酵對(duì)照組有顯著提高（P＜0.05），這是因?yàn)楣虘B(tài)發(fā)酵過程中黑曲霉代謝產(chǎn)生的復(fù)合水解酶系的作用，改變了甘蔗葉纖維的致密結(jié)構(gòu)，促進(jìn)了黃酮和多酚的釋放。其中在第3～5天酚類物質(zhì)均保持較高含量，變化幅度不大，但第6天后，黃酮和多酚含量則顯著下降（P＜0.05），這可能與在發(fā)酵后期產(chǎn)生的水解酶系的活力下降有關(guān)，也可能與一些酚類化合物在發(fā)酵后期被真菌菌株代謝產(chǎn)生的氧化酶催化氧化成了酚類物質(zhì)聚合物[28]，或者與酚類化合物被微生物利用有關(guān)[27]。Saharan[9]、Wang Lu[10]、Lin Sen[29]等的相關(guān)研究也均發(fā)現(xiàn)發(fā)酵后基質(zhì)中多酚與黃酮含量在發(fā)酵初期增加明顯，發(fā)酵成熟期含量保持基本不變，隨后減少的現(xiàn)象。

2.2 正交試驗(yàn)優(yōu)化發(fā)酵條件

在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，選擇接種量、培養(yǎng)基含水量、發(fā)酵時(shí)間為正交試驗(yàn)因素，每個(gè)因素3 個(gè)水平，正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)按L9（34）正交表進(jìn)行。試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果見表2。

表2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table 2 Orthogonal array design with experiment results

表3 正交試驗(yàn)方差分析Table 3 Analysis of variance for the experimental results of orthogonal array design

表3方差分析可知，發(fā)酵時(shí)間在各個(gè)水平上有顯著差異，但培養(yǎng)基含水量和接種量的水平差異不顯著。以黃酮含量為指標(biāo)，優(yōu)化后的發(fā)酵最佳工藝為接種量28 mL/100 g、培養(yǎng)基含水量60%、發(fā)酵時(shí)間5 d；以多酚含量為指標(biāo)，最佳條件為接種量35 mL/100 g、培養(yǎng)基含水量50%、發(fā)酵時(shí)間4 d。

根據(jù)3 個(gè)因素的極差大小以及表3方差分析的顯著性差異情況，綜合考慮，選擇接種量28 mL/100 g、培養(yǎng)基含水量50%、發(fā)酵時(shí)間5 d，測得發(fā)酵甘蔗葉中黃酮含量為13.82 mg/g，多酚含量為10.40 mg/g，比未發(fā)酵甘蔗葉中可溶性黃酮和多酚含量分別提高了135%和92%（P＜0.05）。

2.3 甘蔗葉發(fā)酵過程中相關(guān)水解酶活力的變化與酚類物質(zhì)釋放的關(guān)系

2.3.1 發(fā)酵過程中水解酶活力的變化

圖4 發(fā)酵過程中水解酶活力變化Fig. 4 Changes in the activity of hydrolytic enzymes during fermentation

為闡明甘蔗葉發(fā)酵過程中，黑曲霉產(chǎn)生的 相關(guān)碳水化合物水解酶與甘蔗葉多酚、黃酮釋放的關(guān)系，對(duì)發(fā)酵過程中產(chǎn)生的纖維素酶活力和β-葡萄糖苷酶活力進(jìn)行了跟蹤測定，結(jié)果如圖4所示。黑曲霉固態(tài)發(fā)酵過程中能夠產(chǎn)生一定量的纖維素酶和β-葡萄糖苷酶，而且纖維素酶活力明顯比β-葡萄糖苷酶活力高，2 種水解酶活力均呈現(xiàn)先增加后降低的變化趨勢。纖維素酶活力在發(fā)酵第4天達(dá)到最大值，為632.17 U/g，β-葡萄糖苷酶活力在發(fā)酵第5天時(shí)達(dá)到了頂峰，為75.02 U/g，隨后活力顯著下降。與圖3進(jìn)行比較可知，發(fā)酵過程中產(chǎn)生的水解酶系與酚類物質(zhì)釋放的變化趨勢基本保持一致，均是在發(fā)酵第4～5天，產(chǎn)量達(dá)到最大，進(jìn)一步說明甘蔗葉酚類物質(zhì)的釋放與微生物發(fā)酵過程中產(chǎn)生的水解酶系有密切的關(guān)系。

2.3.2 酚類物質(zhì)釋放量與酶活力變化的相關(guān)性分析

為進(jìn)一步探究黑曲霉發(fā)酵甘蔗葉的過程中酚類物質(zhì)含量與纖維素酶和β-葡萄糖苷酶活力的關(guān)系，分別以黑曲霉發(fā)酵后甘蔗葉多酚和黃酮含量為橫坐標(biāo)，以兩種酶活力為縱坐標(biāo)，檢驗(yàn)酚類物質(zhì)的釋放量與酶活力變化的相關(guān)性。

從圖5可知，酚類物質(zhì)的釋放量與纖維素酶和β-葡萄糖苷酶活力呈顯著正相關(guān)。其中多酚和黃酮含量與纖維素酶活力的相關(guān)系數(shù)R2分別為0.856 3和0.678 9，與β-葡萄糖苷酶活力的相關(guān)系數(shù)R2分別為0.510 0和0.622 6，說明酶活力越強(qiáng)，越有利于甘蔗葉中酚類物質(zhì)的釋放。分析原因，首先纖維素酶破壞甘蔗葉細(xì)胞壁纖維素的致密結(jié)構(gòu)，有助于暴露出酚類物質(zhì)與其他物質(zhì)之間結(jié)合的化學(xué)鍵，然后纖維素酶、β-葡萄糖苷酶等水解酶系斷裂結(jié)合態(tài)多酚與植物纖維素、半纖維素、木質(zhì)素以及一些多糖結(jié)構(gòu)連接的共價(jià)鍵，釋放出甘蔗葉中結(jié)合態(tài)酚類物質(zhì)，從而使可溶性酚類物質(zhì)含量增加。

圖5 酚類物質(zhì)含量與纖維素酶、β-葡萄糖苷酶活力的相關(guān)性Fig. 5 Correlations between the amount of released phenolics and cellulase and β-glucosidase activity

2.4 抗氧化能力

從圖6可知，在一定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，甘蔗葉提取液中黃酮與羥自由基清除率有良好的量效關(guān)系，清除率隨黃酮質(zhì)量濃度的增大而上升。發(fā)酵甘蔗葉提取液黃酮質(zhì)量濃度在200 μg/mL和400 μg/mL時(shí)，羥自由基清除率分別為29.61%和91.73%，其IC50值為268.93 μg/mL；而未發(fā)酵甘蔗葉黃酮質(zhì)量濃度在270 μg/mL和450 μg/mL時(shí)，羥自由基清除率僅為18.18%和82.78%，IC50值為366.06 μg/mL，說明經(jīng)過黑曲霉發(fā)酵后的甘蔗葉提取液具有較強(qiáng)的羥自由基清除能力，但低于對(duì)照組VC（IC50=158.34 μg/mL）。

圖6 發(fā)酵甘蔗葉黃酮質(zhì)量濃度對(duì)羥自由基的清除效果Fig. 6 Scavenging effect of flavonoids from fermented sugarcane leaves on hydroxyl radicals

圖7 發(fā)酵甘蔗葉黃酮質(zhì)量濃度對(duì)DPPH自由基的清除效果Fig. 7 Scavenging effect of flavonoids from fermented sugarcane leaves on DPPH radical

圖7 顯示，發(fā)酵甘蔗葉提取液中黃酮對(duì)DPPH自由基清除能力（IC50=21.25 μg/mL）和對(duì)照組VC的清除能力差別不大（IC50=20.13 μg/mL），而且明顯強(qiáng)于未發(fā)酵甘蔗葉（IC50=39.44 μg/mL），在黃酮質(zhì)量濃度為40 μg/mL時(shí)，發(fā)酵甘蔗葉的DPPH自由基清除率達(dá)到了79.18%，而未發(fā)酵甘蔗葉在黃酮質(zhì)量濃度為45 μg/mL時(shí)，清除率僅為54.01%。

酚類物質(zhì)抗氧化能力取決于酚類化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)、芳香環(huán)上的羥基數(shù)目、羥基位置以及羥基結(jié)構(gòu)糖基化[30]。已有研究表明，甘蔗葉組織中游離態(tài)酚酸對(duì)DPPH自由基清除活性優(yōu)于結(jié)合態(tài)酚酸[22]。通過微生物發(fā)酵過程中產(chǎn)生的復(fù)合酶系的水解作用，甘蔗葉中的酚類物質(zhì)與其他物質(zhì)（糖類、蛋白質(zhì)、有機(jī)酸）之間的共價(jià)作用或非共價(jià)作用解除，使甘蔗葉中的酚酸，如沒食子酸、阿魏酸、咖啡酸、綠原酸、香草酸向游離態(tài)轉(zhuǎn)化，增加了可提取和可利用酚類物質(zhì)的含量，而這些酚酸已被證實(shí)為具有高抗氧化能力[8,31-33]。此外，通過β-葡萄糖苷酶的水解作用，黃酮糖苷分子去糖基化降解為黃酮苷元，研究已證實(shí)黃酮苷元清除人體氧自由基的生物活性明顯優(yōu)于黃酮糖苷[34]。

3 結(jié) 論

利用黑曲霉對(duì)甘蔗葉進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵，經(jīng)60%乙醇溶液提取后，提取液中多酚含量和黃酮含量均比未發(fā)酵甘蔗葉樣品顯著上升。在接種量28 mL/100 g、培養(yǎng)基含水量50%、發(fā)酵時(shí)間5 d條件下，甘蔗葉中黃酮和多酚含量分別為13.82 mg/g和10.40 mg/g，比未發(fā)酵甘蔗葉中可溶性黃酮和多酚含量提高了135%和92%（P＜0.05）。

測定發(fā)酵過程中微生物代謝產(chǎn)生的纖維素酶活力和β-葡萄糖苷酶活力的變化，發(fā)現(xiàn)這2 種水解酶活力均呈現(xiàn)先增加后降低的變化趨勢，而且酶活力的變化趨勢與酚類物質(zhì)（黃酮、多酚）含量的變化趨勢基本一致；通過相關(guān)性分析可知，發(fā)酵過程中酚類物質(zhì)的釋放量與纖維素酶和β-葡萄糖苷酶活力呈良好正相關(guān)，說明甘蔗葉酚類物質(zhì)的釋放與微生物發(fā)酵過程中產(chǎn)生的水解酶系有密切關(guān)系。

發(fā)酵前后的甘蔗葉黃酮提取液均對(duì)自由基具有一定的清除能力，但發(fā)酵后甘蔗葉黃酮提取液對(duì)DPPH自由基和羥自由基清除能力均比發(fā)酵前有明顯提高。