羅勝 宋彥錕

【摘要】 目的：探討免疫組化室內(nèi)質(zhì)控中應(yīng)用組織懸液作為HER-2（人表皮生長因子受體-2）陽性對(duì)照的效果，為建立更好的HER-2免疫組化室內(nèi)質(zhì)控提供參考。方法：擇取2018年1月-2019年12月筆者所在醫(yī)院的37例HER-2（3+）的胃癌根治標(biāo)本，包埋成石蠟塊連續(xù)切片，行免疫組化染色，另取切片攪碎后制成組織懸液，分別進(jìn)行免疫組化染色和常規(guī)HE染色，于試驗(yàn)后4、12周時(shí)，復(fù)行免疫組化染色，比較觀察染色定位及強(qiáng)度情況。結(jié)果：組織懸液標(biāo)本HE染色鏡下觀察均可見異形癌細(xì)胞，多數(shù)平鋪，輪廓清晰。免疫組化染色的胃癌組織懸液標(biāo)本，HER-2表達(dá)均見于細(xì)胞膜，染色強(qiáng)度均為強(qiáng)陽性（3+），同石蠟切片定性定位與染色均相符。試驗(yàn)后4、12周復(fù)行免疫組化，HER-2染色定位與強(qiáng)度同前無明顯改變。結(jié)論：組織懸液癌細(xì)胞HER-2陽性定位明確，染色強(qiáng)度準(zhǔn)確，質(zhì)量穩(wěn)定易判讀，能夠保障染色過程可靠，可以作為免疫組化室內(nèi)質(zhì)控，為HER-2染色提供陽性參考。

【關(guān)鍵詞】免疫組化 室內(nèi)質(zhì)控 組織懸液 HER-2 陽性對(duì)照

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2020.19.023 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 B 文章編號(hào) 1674-6805（2020）19-00-03

Role and Value of HER-2 Positive Specimens in Tissue Suspensions as Positive Controls in the Quality Control of Immunohistochemical Laboratory/LUO Sheng， SONG Yankun. //Chinese and Foreign Medical Research， 2020， 18（19）： -61

[Abstract] Objective： To investigate the effect of using tissue suspension as a positive control of HER-2 （human epidermal growth factor receptor-2） in the quality control of indoor immunohistochemistry， and provide a reference for establishing a better quality control of HER-2 immunohistochemistry indoor. Method： From January 2018 to December 2019， 37 radical specimens of HER-2 （3+） gastric cancer in our hospital were selected and embedded into paraffin sections for immunohistochemical staining， and then the sections were broken to make tissue suspension. Immunohistochemical staining and routine HE staining were carried out respectively. At 4 and 12 weeks after the test， immunohistochemical staining was carried out again to observe the location and intensity of staining. Result： The heteromorphic cancer cells were observed under HE staining microscope， most of them were flat and clear. The expression of HER-2 was found in the cell membrane of gastric cancer tissue with immunohistochemical staining， and the staining intensity was strong positive （3+）， which was consistent with the qualitative localization and staining of paraffin section. After 4 and 12 weeks of the experiment， immunohistochemistry was carried out again， and the location and intensity of HER-2 staining were the same as before. Conclusion： HER-2 positive localization of cancer cells in tissue suspension is clear， the staining intensity is accurate， the quality is stable and easy to read， which can guarantee the reliable staining process， and can be used as the indoor quality control of immunohistochemistry， providing positive reference for HER-2 staining.

[Key words] Immunohistochemistry Indoor quality control Tissue suspension HER-2 Positive control

First-authors address： The First Affiliated Hospital of Fujian Medical University， Fuzhou 350005， China

人表皮生長因子受體-2（HER-2），表皮生長因子受體（FEFR）家族成員，是一種原癌基因，于細(xì)胞表面表達(dá)，可以通過參與信號(hào)通道通路活動(dòng)影響細(xì)胞增殖與分化[1]。其癌基因及蛋白產(chǎn)物P185在乳腺癌、胃癌、直腸癌、卵巢癌等多種腫瘤中存在過度表達(dá)和擴(kuò)增，是誘導(dǎo)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的促發(fā)因素，與惡性腫瘤發(fā)生進(jìn)展密切相關(guān)，是臨床治療監(jiān)測(cè)的重要預(yù)后指標(biāo)，近年隨著分子生物學(xué)研究的深入及靶向治療的突破進(jìn)展，也成為靶向治療藥物選擇的重要靶點(diǎn)。有統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，約30%的乳腺癌患者HER-2擴(kuò)增/過度表達(dá)，其腫瘤侵襲性強(qiáng)，患者預(yù)后相對(duì)較差[2]。對(duì)于HER-2蛋白表達(dá)的檢測(cè)，免疫組化是公認(rèn)可靠且常用的方法，但受機(jī)械故障、人為誤差、抗體商品種類繁多等因素影響，檢測(cè)仍存在假陰性風(fēng)險(xiǎn)，影響結(jié)果準(zhǔn)確性，不利于臨床治療，因此，檢測(cè)有必要設(shè)立陰性與陽性對(duì)照，加強(qiáng)免疫組化質(zhì)量控制，保證質(zhì)量監(jiān)測(cè)持續(xù)性[3]。為探究更為簡便可靠的質(zhì)控方法，文章現(xiàn)擇取胃癌根治標(biāo)本展開調(diào)研，擬采用組織懸液作為HER-2陽性對(duì)照，探究可行性，以期為建立更好的HER-2免疫組化室內(nèi)質(zhì)控提供參考，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

擇取筆者所在醫(yī)院病理科2018年1月-2019年12月的37例胃癌標(biāo)本為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：胃癌根治術(shù)切除樣本，以10%中性緩沖福爾馬林固定;免疫組化檢測(cè)樣本腫瘤組織，HER-2強(qiáng)陽性表達(dá)（3+）;病理樣本對(duì)應(yīng)患者對(duì)本研究知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：HER-2表達(dá)明顯異質(zhì)性。檢測(cè)試劑與儀器：DAKO公司Envision檢測(cè)系統(tǒng)及配套試劑兔抗人HER-2單克隆抗體。

1.2 方法

選擇腫瘤組織豐富區(qū)域的標(biāo)本，制成10 mm×5 mm×5 mm組織塊，酒精梯度脫水，浸蠟包埋后備用。切片機(jī)設(shè)6 μm層厚，連續(xù)切片50張，置于離心管中，另滴加二甲苯溶液6 ml，以玻璃攪拌棒輕攪至切片粉碎，石蠟溶解，上機(jī)離心2 min，離心速率4 000 r/min，半徑10 cm，取底部沉淀，同法加入二甲苯溶液，攪拌后離心，重復(fù)過程3次。然后加無水乙醇溶液6 ml，同法重復(fù)離心3次取底部沉淀，以充分洗脫二甲苯。最后按1∶30的配比向底部沉淀中滴加無水乙醇制成懸液，置于4 ℃低溫保存?zhèn)溆?，組織懸液制備完成。取兩張防脫載玻片，吸取預(yù)先搖勻的懸液，分別各滴2 μl，60 ℃烘烤2 min后，其中一份樣本常規(guī)HE染色，一份免疫組化染色。另取石蠟塊切片染色，比較觀察兩種樣本的染色定位及強(qiáng)度情況。于試驗(yàn)后4、12周時(shí)，復(fù)行組織懸液HER-2免疫組化染色，對(duì)比之前的陽性定位及強(qiáng)度情況。

2 結(jié)果

鏡下觀察HE染色的37份胃癌組織懸液標(biāo)本，均可見異形癌細(xì)胞。其中，35例癌細(xì)胞多數(shù)平鋪，輪廓清晰，2例樣本發(fā)現(xiàn)細(xì)胞重疊較多，適當(dāng)加大組織保存液比例，復(fù)行HE染色，鏡下觀察細(xì)胞顯像良好，見圖1。行免疫組化染色的37份胃癌組織懸液標(biāo)本，HER-2表達(dá)均見于細(xì)胞膜，同胃癌石蠟切片標(biāo)本染色定位一致，染色強(qiáng)度均為強(qiáng)陽性（3+），同石蠟切片標(biāo)本也相符，見圖2。試驗(yàn)后4、12周復(fù)行免疫組化，HER-2染色定位與強(qiáng)度同前無明顯改變，見圖3。

3 討論

臨床對(duì)于HER-2基因的研究既往主要集中在乳腺癌，病理作用也較為明確，被視為判斷乳腺癌預(yù)后的獨(dú)立指標(biāo)[4]。但近年研究發(fā)現(xiàn)，HER-2在胃癌、卵巢癌、膀胱癌、食管癌、腸癌等惡性腫瘤中也存在陽性表達(dá)，除了能夠反映病程進(jìn)展及預(yù)后，也提示多耐藥可能，對(duì)臨床用藥具有指導(dǎo)意義[5]。有研究顯示，胃癌患者HER-2過表達(dá)占比10%～45%，陽性表達(dá)者對(duì)術(shù)后輔助化療的敏感性欠佳，遠(yuǎn)期生存情況不及陰性患者理想，因此，準(zhǔn)確檢測(cè)胃癌患者HER-2狀態(tài)，對(duì)指導(dǎo)臨床治療及預(yù)后評(píng)估具有重要意義[6]。

免疫組化是利用抗原抗體反應(yīng)，通過化學(xué)反應(yīng)顯色標(biāo)記抗體來定位、定量、定性組織細(xì)胞內(nèi)抗原的檢測(cè)技術(shù)，是臨床公認(rèn)的檢測(cè)HER-2的有效手段[7]。但為了確保HER-2免疫組化檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，加強(qiáng)質(zhì)量控制、盡可能避免誤差仍十分必要。根據(jù)相關(guān)檢測(cè)指南與專家共識(shí)，HER-2免疫組化染色必須設(shè)立對(duì)照，陽性對(duì)照推薦不同染色強(qiáng)度組織芯片，陰性對(duì)照推薦癌旁正常上皮組織[8]。為獲得精準(zhǔn)染色對(duì)照，提高檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性，國外臨床多使用組織芯片，或采用羊膜卷對(duì)照，也有關(guān)于手工制作多組織“香腸”塊的報(bào)道[9]。不過，多組織芯片制作技術(shù)要求高，工藝煩瑣，而商品化質(zhì)控品價(jià)格較高，以此替代耗材成本大，又難于普及，臨床應(yīng)用存在局限[10]。

從國內(nèi)來看，單組織蠟塊對(duì)照仍是目前臨床最主要使用的對(duì)照方法，但是此法需要消耗大量組織樣本，而且在HER-2檢測(cè)需求增加背景下，頻繁為待檢樣本切取對(duì)照不僅耗時(shí)耗力，亦難于質(zhì)量控制[11]。為簡化質(zhì)控流程，提高可操作性，國內(nèi)曾有學(xué)者嘗試在HER-2免疫組化中應(yīng)用勻漿液[12]，本次臨床研究亦基于此目的展開組織懸液制備研究，結(jié)果顯示胃癌組織懸液標(biāo)本HE染色鏡下觀察均可見異形癌細(xì)胞，清晰度理想，免疫組化染色均可于細(xì)胞膜見HER-2陽性表達(dá)，染色定位及染色強(qiáng)度同胃癌石蠟切片標(biāo)本一致，數(shù)周后復(fù)檢，HER-2染色定位與強(qiáng)度同前無明顯改變，保存時(shí)間長久，提示染色定位與強(qiáng)度準(zhǔn)確且質(zhì)量穩(wěn)定。另外，組織懸液的制備方法相對(duì)簡單，滴加對(duì)照快捷，可以節(jié)省對(duì)照所用時(shí)間和人力，同時(shí)滿足多組織于一張玻片進(jìn)行對(duì)照檢測(cè)的需要，更易于強(qiáng)化對(duì)切片的質(zhì)控效果，而且制作一次組織懸液可以滿足較長時(shí)間的檢測(cè)需求，所用樣本量少，不會(huì)過度損耗存檔樣本。

不過值得注意的是，組織懸液HER-2免疫組化后，有時(shí)鏡下可見染色陽性減弱甚至呈陰性，可能與染色過程中的某些因素有關(guān)，為保證結(jié)果準(zhǔn)確性，需重新檢測(cè)并另加陽性石蠟組織對(duì)照。實(shí)際操作中，防脫載玻片滴加懸液組織后，通過酒精揮發(fā)與烘烤，可以獲得牢固的黏附效果，亦不會(huì)污染待檢樣本。而為了盡可能避免組織污染，考慮儀器染色沖洗自玻片頭端向末，對(duì)照添加于玻片末端右下，可以防止對(duì)樣本的干擾。

綜上，組織懸液制備簡單，滴加對(duì)照易操作，癌細(xì)胞HER-2陽性定位明確，染色強(qiáng)度準(zhǔn)確，質(zhì)量穩(wěn)定易判讀，能夠保障染色過程可靠，可以作為免疫組化室內(nèi)質(zhì)控，加以推廣使用，為HER-2染色提供陽性參考。

參考文獻(xiàn)

[1]陳敏，劉鍵平，龍曉雨，等.全自動(dòng)免疫組化和熒光原位雜交方法檢測(cè)胃癌HER2狀態(tài)[J].西部醫(yī)學(xué)，2017，29（7）：902-907.

[2]董志成，劉凌翔.血清AFP陽性胃癌中HER2和RRM1的表達(dá)及其意義[J].東南大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2019，38（5）：799-805.

[3]鄒治銘，張柳，龔平，等.PDCA循環(huán)在Her-2免疫組化室間質(zhì)控中的應(yīng)用[J].診斷病理學(xué)雜志，2018，25（3）：231-232.

[4]李萌，于傳飛，王文波，等.抗體偶聯(lián)藥物抗HER2單抗-MCC-DM1質(zhì)控方法的建立[J].藥物分析雜志，2016，36（1）：22-30.

[5]吳景，何杰.組織懸液HER2陽性標(biāo)本在免疫組化室內(nèi)質(zhì)控中作為陽性對(duì)照的作用和價(jià)值[J].中山大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)科學(xué)版，2019，40（5）：683-688.

[6]王文義，王桂芝，張明智.熒光原位分子雜交技術(shù)檢測(cè)乳腺癌組織中HER-2基因的表達(dá)[J].醫(yī)藥論壇雜志，2011，32（13）：60-62.

[7]詹琦，周晟，婁麗萍.EGFR，HER2和HER3在膽管癌中的表達(dá)及預(yù)后價(jià)值[J].實(shí)用腫瘤學(xué)雜志，2019，33（6）：491-496.

[8]郭寶琴，劉蓉，吳黨潔.超順磁氧化鐵納米微粒在HER-2陽性乳腺癌模型MRI和熒光成像中的應(yīng)用[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2019，18（22）：2359-2362.

[9]張宇帆，劉建井，李小鳳，等.18F-FDG PET傳統(tǒng)參數(shù)與影像組學(xué)特征在免疫組織化學(xué)難以明確HER2表達(dá)乳腺癌中的價(jià)值[J].中華核醫(yī)學(xué)與分子影像雜志，2019，39（11）：641-646.

[10]張丹丹，華佳，莊治國，等.MRI參數(shù)聯(lián)合免疫組化對(duì)HER-2陽性乳腺癌新輔助化療療效的評(píng)估價(jià)值[J].實(shí)用放射學(xué)雜志，2019，35（11）：1754-1758.

[11]蔣依娜，王博，周燦，等.568例HER2不確定乳腺癌原位雜交結(jié)果分析[J].腫瘤防治研究，2019，46（7）：605-609.

[12]武莎斐，劉媛媛，劉笑玎，等.HER2免疫組織化學(xué)1+浸潤性乳腺癌的基因擴(kuò)增狀態(tài)和mRNA表達(dá)分析[J].中華病理學(xué)雜志，2018，47（7）：522-526.

（收稿日期：2020-02-24） （本文編輯：馬竹君）