馮天斌　李延儉　冼志榮　楊家誠　陶珊花　羅儉權(quán)

【摘要】 目的：探究PAK4在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)情況及臨床意義。方法：從筆者所在醫(yī)院甲狀腺癌標(biāo)本庫中選取2013-2017年經(jīng)手術(shù)后的組織標(biāo)本，其中甲狀腺乳頭狀癌（PTC）60例，甲狀腺非惡性病例30例。采用免疫組化的方法對(duì)PAK4在甲狀腺非惡性病例與甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果：在60例PTC中PAK4陽性表達(dá)為27例（45.00%），其中強(qiáng)陽性表達(dá)12例（20.00%），中等陽性表達(dá)15例（25.00%）。PTC中PAK4的陽性表達(dá)率為45.00%，顯著高于甲狀腺良性組織中的6.67%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。PAK4在甲狀腺乳頭狀癌陽性表達(dá)和正常表達(dá)的性別、年齡、腫瘤大小、是否單發(fā)、是否單側(cè)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;兩者腺體外浸潤、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：PAK4在甲狀腺乳頭狀癌中陽性表達(dá)率較高，可能預(yù)示存在腺體外浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、疾病Ⅲ或Ⅳ期，為本病的早期診治提供新的策略。

【關(guān)鍵詞】 PAK4 甲狀腺乳頭狀癌 免疫組化

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2020.21.060 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 B 文章編號(hào) 1674-6805（2020）21-0-03

Study on the Expression of PAK4 in Papillary Thyroid Carcinoma/FENG Tianbin， LI Yanjian， XIAN Zhirong， YANG Jiacheng， TAO Shanhua， LUO Jianquan. //Chinese and Foreign Medical Research， 2020， 18（21）： -147

[Abstract] Objective： To investigate the expression and clinical significance of PAK4 in papillary thyroid carcinoma. Method： From 2013 to 2017， there were 60 cases of papillary thyroid cancer and 30 cases of non malignant thyroid cancer were selected. The expression of PAK4 in non malignant thyroid cases and papillary thyroid carcinoma were detected by immunohistochemistry. Result： A total of 60 PTC patients， the positive expression of PAK4 was 27 cases （45.00%）， strong positive expression was 12 cases （20.00%）， moderate positive expression was 15 cases （25.00%）. The positive expression rate of PAK4 in PTC was 45.00%， which was significantly higher than the non malignant thyroid cancer （6.67%）， the difference was statistically significant （P<0.05）， there were no significant differences in gender， age， tumor size， single lesion and unilateral expression between positive and normal expression of PAK4 （P>0.05）. There were significant differences in extraglandular infiltration， clinical stage and lymph node metastasis between the two groups （P<0.05）. Conclusion： The positive expression of PAK4 in papillary thyroid carcinoma may indicate the presence of extraglandular infiltration and lymph node metastasis to Ⅲ or Ⅳ of the disease， providing a new strategy for the early diagnosis and treatment of the disease.

[Key words] PAK4 Papillary thyroid carcinoma Immunohistochemistry

First-authors address： Sihui Peoples Hospital， Sihui 526200， China

甲狀腺癌惡性程度不高，因此臨床不被重視，且其相關(guān)診斷發(fā)現(xiàn)不了較小的腫瘤。甲狀腺乳頭狀癌（PTC）占其病理類型的80%，為防止臨床癥狀被忽視所致PTC至疾病中晚期，死亡率增高，因此采取適宜的早期診斷尤為關(guān)鍵[1]。P21激活激酶4（PAK4）在當(dāng)今已被證實(shí)，與食管癌、肝癌、胰腺癌、直腸癌及乳腺癌等腫瘤疾病的發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移具有密切聯(lián)系[2]。PAK4是在RAS驅(qū)動(dòng)腫瘤形成通路中具有關(guān)鍵作用的介導(dǎo)蛋白之一，能夠刺激MAPK通路[3]。曾有研究表明，PAK4與腫瘤惡性程度具有密切聯(lián)系，其表達(dá)水平提高，提示腫瘤預(yù)后不良[4]。因此，本研究就PAK4在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)情況進(jìn)行研究，如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取筆者所在醫(yī)院2013-2017年經(jīng)手術(shù)切除手術(shù)后具有完整臨床資料及隨訪資料的甲狀腺乳頭狀癌60例及甲狀腺非惡性病例30例的組織標(biāo)本。納入標(biāo)準(zhǔn)：參照文獻(xiàn)[5]《NCCN臨床實(shí)踐指南：甲狀腺癌》中甲狀腺乳頭狀癌的診斷。排除標(biāo)準(zhǔn)：既往存在手術(shù)病史或者甲狀腺癌復(fù)發(fā);存在有神經(jīng)源性疾病;合并心肝腎等功能不全;未超過18歲，懷疑或確有藥物濫用病史;受試過程中病情改變顯著，不宜進(jìn)一步接受試驗(yàn);臨床病理資料缺失。甲狀腺乳頭狀癌中男21例，女39例，年齡25～67歲，平均（33.35±4.66）歲;甲狀腺非惡性病例中男8例，女22例，年齡25～66歲，平均（33.88±4.69）歲，正常甲狀腺6例，結(jié)節(jié)性甲狀腺腫9例，橋本甲狀腺炎7例，亞急性甲狀腺炎5例，甲狀腺腺瘤3例。

1.2 方法

1.2.1 試劑 鼠抗人BRAFV600E單克隆抗體（克隆VE1），武漢華美生物工程有限公司CUSABIO?;PAK4多克隆抗體-PAK4 polyclonal antibody，上海群己生物科技有限公司;PAK4 ELISA KIT/人PAK4 ELISA試劑盒，武漢菲恩生物科技有限公司;顯色劑及其他相關(guān)試劑，北京冬歌博業(yè)生物科技有限公司。

1.2.2 檢測(cè)方法 采用免疫組化的方法對(duì)PAK4在甲狀腺乳頭狀癌表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，并在光學(xué)顯微鏡下閱片，采取雙盲法，其中陽性染色可見黃色或棕黃色顆粒。根據(jù)染色程度進(jìn)行評(píng)分：其中0分為與背景無顯著顏色差別為陰性;1分為背景顏色存在輕微差別，染色呈淡黃色為弱陽性;2分為背景差別較為明顯，染色深黃色或淺棕色，為中度陽性;3分為染色中等棕色甚至更深，為強(qiáng)陽性。根據(jù)高倍鏡顯示細(xì)胞著色百分比計(jì)分：0分為總著色細(xì)胞數(shù)量所占總計(jì)細(xì)胞數(shù)量比例未超過5%;1分為百分比超過5%，未超過25%;2分為超過25%，百分比未超過50%;3分為超過50%，百分比未超過75%;4分為超過75%?？偡稚鲜鰞煞N計(jì)分方法的乘積。其中分?jǐn)?shù)0分為陰性，以“-”表示為低表達(dá);≤3分為弱陽性，以“+”表示為正常表達(dá);4分≤總分≤6分者為中等陽性，以“++”表示為高表達(dá);≥7分者為強(qiáng)陽性，以“+++”表示為過表達(dá)。其中“-”和“+”視為低表達(dá)或正常表達(dá)?！?+”和“+++”視為陽性表達(dá)。其中總分未超過4分及以下者為PAK4正常表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

本研究數(shù)據(jù)采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析和處理，計(jì)量資料以（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，采用字2檢驗(yàn)及Fisher確切概率檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PAK4表達(dá)情況

60例PTC中存在PAK4陽性表達(dá)27例（45.00%），其中強(qiáng)陽性表達(dá)及中等陽性表達(dá)分別為12例（20.00%）及15例（25.00%）。正常甲狀腺組織中未存在陽性表達(dá)，其中亞急性甲狀腺炎及甲狀腺濾泡性腺瘤中均存在1例高表達(dá)，其余未存在陽性表達(dá)。PAK4陽性表達(dá)和陰性表達(dá)見圖1。PTC中PAK4的陽性表達(dá)率為45.00%，顯著高于甲狀腺良性組織中的6.67%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（字2=13.457，P=0.000）。

注：左圖PAK4蛋白強(qiáng)陽性表達(dá);右圖PAK4蛋白陰性表達(dá)。

2.2 PAK4的表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系

PAK4在甲狀腺乳頭狀癌陽性表達(dá)和正常表達(dá)的性別、年齡、腫瘤大小、是否單發(fā)、是否單側(cè)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;兩者腺體外浸潤、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

3 討論

PTC發(fā)病過程較為隱匿，因此其早期診斷尤為關(guān)鍵，本病的發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜[6-7]。PAK4是1994年在進(jìn)行RAS相關(guān)蛋白研究中發(fā)現(xiàn)的一種下游分子蛋白，參與經(jīng)典MAPK信號(hào)通路[8]。曾有研究表明，PAK4能不經(jīng)過RAF及MEK等激酶，通過其他途徑激活ERK以調(diào)節(jié)PTC細(xì)胞的轉(zhuǎn)移[9-11]。筆者研究表明，PTC中PAK4的陽性達(dá)率為45.00%，顯著高于甲狀腺良性組織的6.67%，與PTC臨床病理參數(shù)相關(guān)性的研究中發(fā)現(xiàn)，臨床分期越高，PAK4表達(dá)率越高，這與胃癌、卵巢癌及乳腺癌的研究基本一致。PAK4在有腺體外浸潤及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中呈高表達(dá)，這與金成玲[12]在結(jié)腸癌及胃癌的研究中存在相似結(jié)論。此外在性別、年齡、腫瘤大小、單發(fā)與否及單側(cè)與否等相關(guān)因素中差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。黃凱等[13]通過對(duì)膀胱癌進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤較大PAK4表達(dá)較高，與本實(shí)驗(yàn)研究存在差異，這可能與實(shí)驗(yàn)樣本較小有關(guān)。此外年齡也是甲狀腺癌的一項(xiàng)危險(xiǎn)因素，可能也與樣本數(shù)量存在關(guān)系，因此進(jìn)一步擴(kuò)大樣本對(duì)本實(shí)驗(yàn)研究具有重要意義。

綜上，PAK4在甲狀腺乳頭狀癌中陽性表達(dá)率較高，可能作為預(yù)測(cè)是否存在腺體外浸潤、癌癥分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的有效指標(biāo)，為本病的早期診治提供新的策略。

參考文獻(xiàn)

[1]只璟泰，鄭向前，高明.甲狀腺癌相關(guān)基因研究進(jìn)展[J].中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2016，51（12）：951-955.

[2] Felicia F Chung， Si-Hoey Tan， Vijay J Raja， et al. Abstract 2370：depletion of p21-activated kinase 4，PAK4，inhibits cellular proliferation，motility and clonogenicity in oral squamous cell carcinoma[J].Cancer Research，2017，77（13）：2370.

[3] Senapedis W T，Donovan S，Golan G，et al.Abstract 5404：PAK4 allosteric modulators（PAMs） repress the Wnt/β-catenin signaling pathway and tumor growth[J].Cancer Research，2015，75（15）：5404.

[4]陳強(qiáng)，謝慶吉，岑宏.PAK1蛋白和BRAFV600E突變蛋白在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)及其臨床意義[J].中華普通外科雜志，2016，31（6）：486-489.

[5] Bevers T B，Anderson B O，Bonaccio E，et al.NCCN clinical practice guidelines in oncology：breast cancer screening and diagnosis[J].Journal of the National Comprehensive Cancer Network Jnccn，2009，7（10）：1060-1096.

[6]王成晨，向大鵬，李志宇.甲狀腺乳頭狀癌相關(guān)基因突變與其臨床病理特征的關(guān)系[J].實(shí)用腫瘤雜志，2019，34（3）：239-244.

[7]魏麗君，馬小琴，凌志強(qiáng).早期甲狀腺乳頭狀癌特征性外周血循環(huán)微小RNA表達(dá)譜篩選和鑒定[J].中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2018，35（4）：741-744.

[8]陳秋蘭，周紹榮，焦蘭農(nóng)，等.甲狀腺乳頭狀癌臨床病理特征與中央?yún)^(qū)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性[J].實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志，2017，21（19）：127-128.

[9]張雷，王林，耿智敏，等.肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移與PI3K-Akt-PAK1通路的相關(guān)性研究[J].實(shí)用肝臟病雜志，2017，20（3）：307-311.

[10] Fu Xueqiong，F(xiàn)eng Jiarui，Zeng Duan， et al. PAK4 confers cisplatin resistance in gastric cancer cells via PI3K/Akt and MEK/ERK-dependent pathways[J].Bioscience Reports，2014，34（2）：59-67.

[11]李良輝，吳國洋，盧毅卓，等.p21-激活激酶1誘導(dǎo)結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移機(jī)制的研究[J].中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2013，30（2）：410.

[12]金成玲.PAK1、HIF-1α在結(jié)腸癌組織中侵襲、轉(zhuǎn)移中的表達(dá)研究[J].國際醫(yī)藥衛(wèi)生導(dǎo)報(bào)，2016，22（14）：2064-2066.

[13]黃凱，陳剛，李巖，等.PAK1在膀胱癌中的表達(dá)及其對(duì)膀胱癌細(xì)胞侵襲能力的影響[J].中華醫(yī)學(xué)雜志，2016，96（40）：3227-3231.

（收稿日期：2020-02-28） （本文編輯：何玉勤）