劉憶瀚 藺凌云 尹文林 潘曉藝 姚嘉赟 徐洋 沈錦玉

摘要為了研究3種微生態(tài)制劑不同的組合方案對(duì)凡納濱對(duì)蝦（Litopenaeus vannamei）生長(zhǎng)性能、酶活力和抗氧化能力的影響，根據(jù)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，在飼料中添加不同比例的微生態(tài)制劑，確定3因素添加量的最優(yōu)組合：LK（干酪乳桿菌）107 CFU/mL、NJ（側(cè)孢芽孢桿菌）106 CFU/mL、JXCB-2（地衣芽孢桿菌）107 CFU/mL。通過(guò)向養(yǎng)殖水體定期潑灑不同組合方案的微生態(tài)制劑，確定了3種微生態(tài)制劑添加量的最優(yōu)組合為：LK（干酪乳桿菌）107 CFU/mL、NJ（側(cè)孢芽孢桿菌）107 CFU/mL、JXCB-2（地衣芽孢桿菌）106 CFU/mL。將最優(yōu)組合微生態(tài)制劑全池定期潑灑與普通對(duì)蝦養(yǎng)殖池的水體水質(zhì)及對(duì)蝦養(yǎng)殖情況進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果表明微生態(tài)制劑對(duì)養(yǎng)殖水體水質(zhì)COD平均降解率為8%，氨氮平均降解率24.4%，亞硝酸鹽氮平均降解率31.1%，總氮平均降解率30.1%，總磷平均降解率9.8%，養(yǎng)殖收益較對(duì)照組提高了18.7%。

關(guān)鍵詞凡納濱對(duì)蝦;微生態(tài)制劑;生長(zhǎng)性能;消化酶活力;抗氧化酶活力;水質(zhì)凈化

中圖分類(lèi)號(hào)S968.22文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2020）15-0096-06

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2020.15.027

開(kāi)放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

Effects of Probiotics Preparation on the Growth， Enzyme Activities，Aquatic Water of Litopenaeus vannamei

LIU Yihan， LIN Lingyun， YIN Wenlin et al

（Zhejiang Institute of Freshwater Fisheries， Huzhou，Zhejiang ?313001）

AbstractIn order to study the effects of different combinations of three kinds of probiotics preparation on the growth， enzyme activities and antioxidant capacity of Litopenaeus vannamei， different proportions of three kinds of probiotics preparation were added in the feed according to orthogonal test design. The optimal combination added in the feed was LK （Lactobacillus casei） 107 CFU/mL， NJ （Bacillus laterosporus） 106 CFU/mLand JXCB-2 （Bacillus licheniformis） 107 CFU/mL. Different proportions of three kinds of probiotics preparation were regularly splashed in the culture water body， and the optimal combination added in the culture water was LK 107 CFU/mL， NJ 107 CFU/mL， JXCB-2 106 CFU/mL. In addition， the optimal combination of probiotics was regularly splashed in the culture pond， which was compared with the water quality and shrimp culture in the control pond. The results showed that average COD degradation rate of culture water body was 8%， the ammonia nitrogen decreased by 24.4%， the nitrite nitrogen decreased by 31.1%， the total nitrogen decreased by 30.1%， the total phosphorus decreased by 9.8%， and the economic income of shrimp culture increased by 18.7% compared with control group.

Key wordsLitopenaeus vannamei;Probiotics preparation;Growth performance;Digestive enzyme activity;Antioxidant enzyme activity;Water purification

基金項(xiàng)目“十二五”農(nóng)村領(lǐng)域國(guó)家科技支撐計(jì)劃課題（2015BAD13B04）。

作者簡(jiǎn)介劉憶瀚（1993—），男，浙江湖州人，研究實(shí)習(xí)員，從事水產(chǎn)保護(hù)學(xué)研究。*通信作者，研究員，碩士，碩士生導(dǎo)師，從事水產(chǎn)病害防控研究。

收稿日期2019-10-23;修回日期2019-11-29

凡納濱對(duì)蝦（Litopenaeus vannamei）自1988年引入我國(guó)以來(lái)，憑借其生長(zhǎng)速度快、營(yíng)養(yǎng)要求低、出肉率較高、抗逆性較強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，成為我國(guó)養(yǎng)殖面積最廣、養(yǎng)殖產(chǎn)量最高的對(duì)蝦種類(lèi)[1]。近些年，在市場(chǎng)利益的帶動(dòng)下，高產(chǎn)量高收益的凡納濱對(duì)蝦發(fā)展迅速，養(yǎng)殖戶的熱情也很高，但由于水質(zhì)變差以及蝦病害的暴發(fā)，導(dǎo)致許多養(yǎng)蝦人損失慘重。雖然目前抗生素等藥品能對(duì)對(duì)蝦的部分疾病產(chǎn)生作用[2]，但病原也會(huì)相應(yīng)的產(chǎn)生抗藥性[3]，從而導(dǎo)致藥性的降低，并且藥物的殘留會(huì)污染養(yǎng)殖水體，打破水體中有益微生物平衡，對(duì)對(duì)蝦產(chǎn)生二次污染[4]。微生態(tài)制劑的使用不僅可以穩(wěn)定養(yǎng)殖水體，減少病害的暴發(fā)[5]，而且可以促進(jìn)對(duì)蝦的生長(zhǎng)[6-7]，提高對(duì)蝦機(jī)體的免疫力并且提高養(yǎng)殖產(chǎn)量和效益。

微生態(tài)制劑因其副作用小、無(wú)殘留、成本低、效果顯著、不污染環(huán)境等特點(diǎn)，使其在凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖中應(yīng)用越來(lái)越受到養(yǎng)殖戶的關(guān)注。目前研究較多的是芽孢桿菌、乳酸菌類(lèi)等。尤其是芽孢桿菌屬（Bacillus）自身可以產(chǎn)生大量的胞外酶，在對(duì)蝦中使用可以增加其腸道脂肪酶、蛋白酶和淀粉酶的活力，提高對(duì)蝦對(duì)飼料的消化率[8]。Ziaei-Nejad等[9]評(píng)價(jià)了芽孢桿菌屬的幾種常見(jiàn)有益菌對(duì)對(duì)蝦生長(zhǎng)、存活及消化酶活力的影響，表明芽孢桿菌產(chǎn)生的胞外酶類(lèi)物質(zhì)能有效將脂類(lèi)、蛋白質(zhì)及碳水化合物等有益成分降解成小分子物質(zhì)。乳酸菌可以分泌多種有益物質(zhì)，對(duì)對(duì)蝦本身起到多種功效，如修復(fù)對(duì)蝦腸道損傷、提高對(duì)蝦的非特異免疫機(jī)能、改善對(duì)蝦飼料的消化吸收等，因此乳酸菌能應(yīng)用在對(duì)蝦的養(yǎng)殖過(guò)程中，對(duì)對(duì)蝦的健康生長(zhǎng)起到促進(jìn)作用，進(jìn)而可以提高對(duì)蝦自身的抗病能力。王國(guó)霞等[10]在凡納濱對(duì)蝦飼料中添加了液體嗜酸乳桿菌（L.acidophilus），結(jié)果表明在對(duì)蝦飼料中添加10%的乳酸菌可以在一定程度上提高凡納濱對(duì)蝦的生長(zhǎng)性能和消化酶活性，改善其非特異性免疫力。乳酸菌在對(duì)蝦病害防控上的作用值得肯定，但需要通過(guò)后噴涂、拌料、篩選耐高溫菌株等方式解決乳酸菌抗逆性差的問(wèn)題[11]。

筆者在結(jié)合現(xiàn)有資料的基礎(chǔ)上，將干酪乳桿菌、側(cè)孢芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌3株土著微生物分別制備成發(fā)酵液，并按一定比例拌入對(duì)蝦飼料中，探究其對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)性能、酶活力及抗氧化能力的影響;同時(shí)，選取微生態(tài)制劑為研究對(duì)象，將其潑灑入凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖水體中，評(píng)估其對(duì)水質(zhì)的凈化效果以及對(duì)養(yǎng)殖收益的影響，旨在為微生態(tài)制劑在凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖過(guò)程中的添加和使用提供科學(xué)依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

試驗(yàn)用蝦：凡納濱對(duì)蝦購(gòu)自紹興市上虞區(qū)明誠(chéng)農(nóng)業(yè)養(yǎng)殖開(kāi)發(fā)有限公司對(duì)蝦養(yǎng)殖示范區(qū)，體質(zhì)量（5.0±0.5）g，體質(zhì)健壯。蝦苗購(gòu)自正大集團(tuán)中正苗，體長(zhǎng)為（0.60±0.05）cm。投喂的飼料統(tǒng)一購(gòu)自浙江海大飼料有限公司的對(duì)蝦配合飼料，蛋白質(zhì)含量為43%，不含微生態(tài)制劑成分。

微生態(tài)制劑：3株土著微生物L(fēng)K（干酪乳桿菌）、NJ（側(cè)孢芽孢桿菌）、JXCB-2（地衣芽孢桿菌）由筆者所在實(shí)驗(yàn)室2017年從凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖池塘中分離純化所得。3種微生物活菌量分別達(dá)到5.43×109、7.36×109、5.10×109 CFU/mL。

養(yǎng)殖池塘：選取紹興市上虞區(qū)明誠(chéng)農(nóng)業(yè)養(yǎng)殖開(kāi)發(fā)有限公司養(yǎng)殖示范區(qū)2個(gè)規(guī)格相同的養(yǎng)殖池塘作為監(jiān)測(cè)對(duì)象。每個(gè)養(yǎng)殖池塘面積0.53 hm2，水深2 m，配套獨(dú)立的排污進(jìn)水系統(tǒng)，水面及水底增氧充足，整體養(yǎng)殖條件較完善。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1內(nèi)服微生態(tài)制劑的研究。

采用3因素3水平正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)。根據(jù)L?9（34）正交設(shè)計(jì)表（表1）配制9種試驗(yàn)顆粒飼料。試驗(yàn)的顆粒飼料是在對(duì)蝦配合飼料中，按終濃度為0、106、107 CFU/mL 3個(gè)水平的比例拌入微生物制劑發(fā)酵液，充分混勻吸收，在室內(nèi)晾干制成干顆粒飼料。具體操作方法是將微生態(tài)發(fā)酵液用噴壺均勻的噴灑在顆粒飼料的表面，晾干后制成干顆粒飼料，基本不會(huì)影響顆粒飼料的耐水性，保證飼料投喂過(guò)程中不松散。

取規(guī)格均勻、體質(zhì)健壯的810尾對(duì)蝦分別放入100 cm×80 cm×65 cm的塑料桶進(jìn)行試驗(yàn)，桶內(nèi)水體體積400 L，共分為9組，每組設(shè)置3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)30尾。試驗(yàn)期間，水溫24～30 ℃，鹽度2.5‰～3.5‰，pH 8.5～9.0，連續(xù)充氣。每天投喂3次（06：30、12：30、18：30），投飼量約占蝦體重的5%，持續(xù)投喂至試驗(yàn)結(jié)束。試驗(yàn)持續(xù)28 d。在試驗(yàn)期間，于28 d投飼結(jié)束后停食24 h采集肝胰腺、腸道和血液，血液4 ℃下靜置4 h，以4 000 r/min離心10 min，取上清液-20 ℃下保存。剔除脂肪組織后的肝胰腺和腸道，用4 ℃的去離子水沖洗，然后用濾紙吸干水分，-20 ℃下保存?zhèn)溆?。試?yàn)結(jié)束后，測(cè)量各組凡納濱對(duì)蝦酶活力、抗氧化能力、存活率及增重率。測(cè)定時(shí)，將保存的肝胰腺和腸道解凍，以1∶9的質(zhì)量體積比在冰浴下勻漿，2 500 r/min 4 ℃下離心10 min，取上清液-20 ℃下保存，6 h內(nèi)檢測(cè)完成。

1.2.2外用微生態(tài)制劑的研究。

1.2.2.1

微生態(tài)制劑優(yōu)化試驗(yàn)。試驗(yàn)在紹興市明誠(chéng)農(nóng)業(yè)有限公司養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行。試驗(yàn)塑料桶規(guī)格為100 cm×80 cm×65 cm，桶內(nèi)水體體積400 L，放置于養(yǎng)殖場(chǎng)透光塑料大棚下，按表1中分組共分為9個(gè)組，每個(gè)組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)30尾。凡納濱對(duì)蝦取自公司內(nèi)養(yǎng)殖池塘，規(guī)格為（5.0±0.5）g/尾，每天按對(duì)蝦體重的5%投飼，分3次投喂。試驗(yàn)前分別測(cè)量各組水質(zhì)指標(biāo)，試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)每隔7 d按表1所列組合在各組中潑灑微生態(tài)制劑1次，試驗(yàn)持續(xù)28 d。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)測(cè)量水質(zhì)指標(biāo)，得出微生態(tài)制劑潑灑時(shí)的最優(yōu)組合。試驗(yàn)期間保持桶底吸污，持續(xù)充氣增氧，不大量換水、少量補(bǔ)水以補(bǔ)充自然蒸發(fā)的水量。

1.2.2.2

池塘養(yǎng)殖試驗(yàn)。試驗(yàn)按照表2進(jìn)行，分微生態(tài)制劑組及對(duì)照組，其中微生態(tài)制劑組養(yǎng)殖過(guò)程中全池每周一次潑灑最優(yōu)組合的微生態(tài)制劑，對(duì)照組按養(yǎng)殖場(chǎng)常規(guī)管理水質(zhì)方法進(jìn)行操作。

每隔7 d隨機(jī)取100 mL養(yǎng)殖池塘的水樣，抽濾后進(jìn)行氨氮、亞硝酸鹽氮、總氮、總磷、COD等水質(zhì)指標(biāo)的測(cè)定。養(yǎng)殖3個(gè)月結(jié)束時(shí)，記錄各組凡納濱對(duì)蝦總產(chǎn)量及平均規(guī)格計(jì)算各組的總產(chǎn)值，并根據(jù)成本計(jì)算各組的利潤(rùn)及產(chǎn)出比。

1.3水質(zhì)的測(cè)定

氨氮的含量測(cè)定采用納氏試劑法，亞硝酸氮含量測(cè)定采用鹽酸萘乙二胺分光光度法，鹽度使用鹽度計(jì)測(cè)定，溫度、pH使用美國(guó)哈希HACH水質(zhì)分析儀，型號(hào)HQ30d單路輸入多參數(shù)數(shù)字化分析儀?？偟?、總磷、COD使用美國(guó)哈希HACH試劑盒及美國(guó)哈希HACH分光光度計(jì)DR2000測(cè)定。

1.4相關(guān)酶活性的測(cè)定

對(duì)各處理組凡納濱對(duì)蝦進(jìn)行蛋白酶（protease）、脂肪酶（lipase）、淀粉酶（amylase）、纖維素酶（cellulase）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、酚氧化酶（phenol oxidase，PO）、過(guò)氧化物酶（peroxidase，POD）、堿性磷酸酶（alkaline ?phosphatase，AKP）活力的測(cè)定，均采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒，具體操作過(guò)程參照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.5數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

數(shù)據(jù)和圖表使用Excel軟件處理，方差分析及顯著性差異比較采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，P<005表示差異顯著，結(jié)果均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。

安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)2020年

2結(jié)果與分析

2.1內(nèi)服微生態(tài)制劑對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)的影響

2.1.1微生態(tài)制劑對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)性能的影響。

由表3可知，試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)，各組應(yīng)有凡納濱對(duì)蝦90尾，平均體質(zhì)量均控制在（5.0±0.5）g/尾。28 d試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，對(duì)照組存活率75.6%，其余組成活率均顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。對(duì)照組最終平均體質(zhì)量7.67 g/尾，增重率53.3%，第2、4、6、7、9組增重率顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。試驗(yàn)組攝食率和餌料系數(shù)均顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。

2.1.2微生態(tài)制劑對(duì)凡納濱對(duì)蝦消化酶活力的影響。

由表4可知，各組蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纖維素酶活力差異不顯著（P>0.05）。其中107 CFU/mL LK組蛋白酶和淀粉酶活力最高，極差為12.88和1.61;106 CFU/mL LK組脂肪酶和纖維素酶活力最高，極差為3.21和0.23。106 CFU/mL的NJ組蛋白酶和淀粉酶活力最高，極差為32.5和1.28;107 CFU/mL NJ組脂肪酶和纖維素酶活力最高，極差為5.04和0.27。107 CFU/mLJXCB-2組蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活力最高，極差分別為8.82、3.07和1.34 CFU/mL;0 ?CFU/mL JXCB-2組纖維素酶活力最高，極差為0.33。

2.1.3微生態(tài)制劑對(duì)凡納濱對(duì)蝦抗氧化能力的影響。

由表5可知，各組SOD、PO、POD、AKP活力差異不顯著（P>005）。其中，107 ?CFU/mL LK組SOD、PO、POD、AKP活力最高，極差分別為1.40、0.04、0.04和0.06。107 ??CFU/mL的NJ組SOD和AKP活力最高，極差為0.94和0.01;106 ??CFU/mL NJ組POD活力最高，極差為0.03;0 ??CFU/mL NJ組PO活力最高，極差為0.03。106 ??CFU/mL JXCB-2組SOD活力最高，極差為1.46;各水平JXCB-2組PO、POD、AKP活力無(wú)顯著差異，極差為0、0.01和0.02。

綜合3因素不同水平的作用以及考慮到生產(chǎn)成本，認(rèn)為添加量的最優(yōu)組合：LK 107 CFU/mL、NJ 106 CFU/mL、JXCB-2 107 CFU/mL。

2.2外用微生態(tài)制劑對(duì)養(yǎng)殖水體的影響

2.2.1優(yōu)化微生態(tài)制劑組合。

由表6可知，第3、5、6、7、8、9組COD含量顯著低于對(duì)照組（P<0.05），第2、4、6、7、9組氨氮含量顯著低于對(duì)照組（P<0.05），第4、7、9組亞硝酸鹽氮含

量顯著低于對(duì)照組（P<0.05），第2、3、4、6、7、8、9組總氮含量顯著低于對(duì)照組（P<0.05），第5、6、7、9組總磷含量顯著低于對(duì)照組（P<0.05）。其中，107 CFU/mL的LK組COD、氨氮、亞硝酸鹽氮、總氮、總磷含量最低，極差分別為11.33、0.09、0003、1.16和0.25。107 CFU/mL的NJ組COD、氨氮、亞硝酸鹽氮、總氮、總磷含量最低，極差分別為5.67、0.12、0.003、1.30和0.04。107 CFU/mL的JXCB-2組COD含量最低，極差為0.67;106 CFU/mL的JXCB-2組氨氮、亞硝酸鹽氮、總氮、總磷含量最低，極差為0.18、0.005、1.07和0.07。

綜合3因素不同水平的作用以及考慮到生產(chǎn)成本，認(rèn)為添加量的最優(yōu)組合：LK（干酪乳桿菌）107 CFU/mL、NJ（側(cè)孢芽孢桿菌）107 CFU/mL、JXCB-2（地衣芽孢桿菌）106 CFU/mL。

2.2.2微生態(tài)制劑對(duì)池塘養(yǎng)殖水體水質(zhì)的影響。

通過(guò)全池每周一次定期潑灑“2.2.1”中最優(yōu)組合微生態(tài)制劑，觀察微生態(tài)制劑對(duì)池塘養(yǎng)殖水體水質(zhì)的影響。從圖1～5可知，在養(yǎng)殖期間微生態(tài)制劑組各水質(zhì)指標(biāo)總體上呈下降趨勢(shì)，其中COD平均降解率為8%，氨氮平均降解率24.4%，亞硝酸鹽氮平均降解率31.1%，總氮平均降解率30.1%，總磷平均降解率9.8%。由此可見(jiàn)，微生態(tài)制劑對(duì)養(yǎng)殖水體有明顯的凈化作用。

2.2.3養(yǎng)殖收益分析。

由表7可知，經(jīng)過(guò)3個(gè)月的養(yǎng)殖，微生態(tài)制劑組成品蝦規(guī)格要略高于對(duì)照組，且產(chǎn)量較高，由此帶來(lái)的養(yǎng)殖收益較對(duì)照組提高了18.7%。

3討論

3.1微生態(tài)制劑對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)及消化酶活力的影響

陳曉瑛等[12]認(rèn)為在凡納濱對(duì)蝦日糧中添加芽孢桿菌能夠提高對(duì)蝦機(jī)體腸道內(nèi)消化酶活性的主要原因是芽孢桿菌進(jìn)入機(jī)體腸道后能夠產(chǎn)生大量的胞外酶，如淀粉酶和蛋白酶等，增加了腸道內(nèi)消化酶的數(shù)量，2種不同來(lái)源的消化酶產(chǎn)生的協(xié)同作用，使對(duì)蝦腸道內(nèi)消化酶活性得到了提高。丁賢等[13]研究表明，在凡納濱對(duì)蝦基礎(chǔ)飼料中添加芽孢桿菌，可顯著提高對(duì)蝦消化酶活性和成活率，有助于飼料的消化吸收，促進(jìn)對(duì)蝦生長(zhǎng)。柴俊等[14]發(fā)現(xiàn)乳酸菌的主要代謝產(chǎn)物是乳酸，其次還有一些揮發(fā)性脂肪酸，能夠降低機(jī)體腸道內(nèi)的pH，從而可以達(dá)到抑制致病菌生長(zhǎng)繁殖的作用。同時(shí)，它還具有細(xì)胞表面的蛋白抗原和黏液黏附受體蛋白等生理生化特征，已經(jīng)作為益生菌廣泛應(yīng)用于陸生動(dòng)物和魚(yú)類(lèi)養(yǎng)殖[15]。此外，乳酸菌能使無(wú)菌動(dòng)物和常規(guī)小鼠腸道絨毛膜層細(xì)胞增殖，也能通過(guò)提高腸上皮細(xì)胞的成活率使腸道黏膜層的損傷修復(fù)[16]。該研究比較了在飼料中添加不同水平的側(cè)孢芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌和干酪乳桿菌對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)及消化酶活性的影響。結(jié)果表明，試驗(yàn)組凡納濱對(duì)蝦存活率、增重率、攝食率和餌料系數(shù)顯著高于對(duì)照組（P<005），并且能有效提高對(duì)蝦腸道內(nèi)消化酶的活力，使其能更好的吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，促進(jìn)機(jī)體的生長(zhǎng)。

3.2微生態(tài)制劑對(duì)凡納濱對(duì)蝦抗氧化能力的影響

凡納濱對(duì)蝦主要依靠非特異性免疫系統(tǒng)來(lái)抵抗外界的病原菌和疾病的侵染，維護(hù)機(jī)體的正常生長(zhǎng)[17]。其中，體內(nèi)所含的超氧化物歧化酶、酚氧化酶、堿性磷酸酶等活性是主要的評(píng)價(jià)指標(biāo)[18]。胡毅等[19]研究表明，益生菌及其代謝產(chǎn)物能夠提供良好的免疫激活劑，并通過(guò)激發(fā)機(jī)體的非特異性免疫來(lái)增強(qiáng)機(jī)體的抗病能力。其作用機(jī)理可能是通過(guò)細(xì)菌本身或細(xì)胞壁成分刺激非特異性免疫系統(tǒng)使其發(fā)揮作用，從而提高動(dòng)物免疫力[20]。該研究通過(guò)正交試驗(yàn)比較了不同微生態(tài)制劑對(duì)凡納濱對(duì)蝦抗氧化能力的影響，綜合3因素不同水平的結(jié)果，篩選出添加量的最優(yōu)組合方案，即LK（干酪乳桿菌）107 CFU/mL、NJ（側(cè)孢芽孢桿菌）106 CFU/mL、JXCB-2（地衣芽孢桿菌）107 CFU/mL。

3.3微生態(tài)制劑對(duì)水質(zhì)的影響

養(yǎng)殖水體環(huán)境惡化是目前水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)面臨的主要問(wèn)題之一，高密度養(yǎng)殖凡納濱對(duì)蝦，導(dǎo)致養(yǎng)殖后期水質(zhì)污染嚴(yán)重，大量殘余餌料以及動(dòng)物的糞便和尸體成為了主要污染源，而其主要成分是蛋白質(zhì)和淀粉。謝航等[21]、杭小英等[22]研究表明，地衣芽孢桿菌能在適宜的養(yǎng)殖水體水質(zhì)條件下降解蛋白質(zhì)與淀粉。同時(shí)芽孢桿菌本身也具有良好的脫氮去磷效果，如枯草芽孢桿菌和巨大芽孢桿菌具有明顯去除氨氮和亞硝酸氮的功能[23]，在養(yǎng)殖水體中使用芽孢桿菌能有效降低水體中化學(xué)需氧量、氨氮和亞硝酸鹽等有害物質(zhì)，并將其轉(zhuǎn)化為二氧化碳、硝酸鹽和磷酸鹽等[24-26]，從而為大量藻類(lèi)生長(zhǎng)繁殖提供其必需的營(yíng)養(yǎng)，而這些藻類(lèi)又能通過(guò)光合作用為水體提供氧氣，從而形成一個(gè)良好的生態(tài)循環(huán)。干酪乳桿菌菌體能產(chǎn)生乳酸、抗菌肽等物質(zhì)，能夠抑制病原菌的生長(zhǎng)，且能在養(yǎng)殖水體中直接或間接分解有機(jī)質(zhì)和亞硝酸鹽等物質(zhì)。宋蓉等[27]研究表明干酪乳桿菌去除亞硝酸鹽的機(jī)理包括胞內(nèi)酶作用、代謝產(chǎn)物乳酸的直接化學(xué)反應(yīng)作用和間接促進(jìn)微生物反硝化作用3種作用機(jī)理，并闡述了其在養(yǎng)殖水體中主要以間接作用方式發(fā)揮作用，認(rèn)為乳酸促進(jìn)反硝化作用的原因在于為反硝化微生物提供了易于利用的有機(jī)碳源。該研究在凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖水體中潑灑不同水平的側(cè)孢芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌和干酪乳桿菌。結(jié)果表明，盡管不同水平的3種微生物制劑對(duì)水體的凈化程度不同，但整體上均優(yōu)于對(duì)照組。經(jīng)過(guò)正交試驗(yàn)優(yōu)化了組合方案后潑灑于養(yǎng)殖池塘中，發(fā)現(xiàn)其對(duì)COD、氨氮、亞硝酸鹽氮、總氮和總磷等均有不同的降解效果，并能有效提高凡納濱對(duì)蝦的養(yǎng)殖效益。

3.4微生態(tài)制劑的發(fā)展前景

目前，國(guó)內(nèi)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中運(yùn)用較廣泛的有光合細(xì)菌、芽孢桿菌、乳酸菌、EM制劑等，這些微生態(tài)制劑在改善水質(zhì)和作為飼料添加劑等方面已取得較好的效果。齊欣等[28]提出運(yùn)用基因工程相關(guān)技術(shù)對(duì)優(yōu)良菌種進(jìn)行遺傳改造，導(dǎo)入有效基因如必需氨基酸合成酶基因、疫苗基因等，并通過(guò)微膠囊技術(shù)對(duì)其進(jìn)行包埋，使其在對(duì)蝦養(yǎng)殖過(guò)程中發(fā)揮更好的作用。徐升[29]指出細(xì)菌和酵母菌是主要對(duì)養(yǎng)殖廢水具有降解活性的微生物，而酵母菌是一種環(huán)境友好菌群，對(duì)環(huán)境更具安全性，且對(duì)有機(jī)污染物具有更強(qiáng)的耐受性，酵母菌作為將來(lái)的微生態(tài)制劑、飼料中的微生物添加劑和養(yǎng)殖水體的微生物調(diào)控劑都具有廣闊前景。總而言之，微生態(tài)制劑在凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖中被廣泛地運(yùn)用并用來(lái)替代抗生素將成為必然的發(fā)展趨勢(shì)，且為凡納濱對(duì)蝦的綠色養(yǎng)殖提供了更為廣闊的發(fā)展空間。

參考文獻(xiàn)

[1] 索建杰，王玉瑋，姜玉聲，等.三種凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖模式的水質(zhì)特征及養(yǎng)殖效果[J].水產(chǎn)學(xué)雜志，2015，28（5）：12-17.

[2] LI J Q，TAN B P，MAI K S，et al.Comparative study between probiotic bacterium Arthrobacter?XE7 and chloramphenicol on protection of Penaeus chinensis postlarvae from pathogenic vibrios [J].Aquaculture，2006，253（1/2/3/4）：140-147.

[3] NOMOTO K.Prevention of infections probiotics[J].Journal of bioscience and bioengineering，2005，100（6）：583-592.

[4] SUZER C，OBAN D，KAMACI H O，et al.Lactobacillus spp.bacteria as probiotics in gilthead sea bream（Sparus aurata，L.）larvae：Effects on growth performance and digestive enzyme activities[J].Aquaculture，2008，280（1/2/3/4）：140-145.

[5] VASEEHARAN B，RAMASAMY P.Control of pathogenic Vibrio spp. by Bacillus subtilis?BT23，a possible probiotic treatment for black tiger shrimp Penaeus monodon[J].Lett Appl Microbiol，2003，36（2）：83-87.

[6] RENGPIPAT S，PHIANPHAK W，PIYATIRATITIVORAKUL S，et al.Effects of a probiotic bacterium on black tiger shrimp Penaeus monodon survival and growth[J].Aquaculture，1998，167（3/4）：301-313.

[7] LIU K F，CHIU C H，SHIU Y L，et al.Effects of the probiotic，Bacillus subtilis E20，on the survival，development，stress tolerance，and immune status of white shrimp，Litopenaeus vannamei?larvae[J].Fish & shellfish immunology，2010，28（5/6）：837-844.

[8] ZOKAEIFAR H，BALCZAR J L，SAAD C R，et al.Effects of Bacillus subtilis on the growth performance，digestive enzymes，immune gene expression and disease resistance of white shrimp，Litopenaeus vannamei[J].Fish & shellfish immunology，2012，33（4）：683-689.

[9] ZIAEINEJAD S，REZAEI M H，TAKAMI G A，et al.The effect of Bacillus spp.bacteria used as probiotics on digestive enzyme activity，survival and growth in the Indian white shrimp Fenneropenaeus indicus[J].Aquaculture，2006，252（2/4）：516-524.

[10] 王國(guó)霞，黃燕華，周曄，等.乳酸菌對(duì)凡納濱對(duì)蝦幼蝦生長(zhǎng)性能、消化酶活性和非特異性免疫的影響[J].動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2010，22（1）：228-234.

[11] 高鵬飛，張善亭，趙樹(shù)平，等.乳酸菌在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中的應(yīng)用[J].家畜生態(tài)學(xué)報(bào)，2014，35（7）：82-86.

[12] 陳曉瑛，曹俊明，王國(guó)霞，等.芽孢桿菌和低聚木糖對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)和消化酶活力的影響[J].飼料工業(yè)，2011，32（20）：18-22.

[13] 丁賢，李卓佳，陳永青，等.芽孢桿菌對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)和消化酶活性的影響[J].中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)，2004，11（6）：580-584.

[14] 柴俊，郤翠仙，張以芳.乳酸桿菌主要代謝產(chǎn)物種類(lèi)及其特性[J].食品工業(yè)科技，2007，28（8）：257-260，264.

[15] 任大勇，李昌，秦艷青，等.乳酸菌益生功能及作用機(jī)制研究進(jìn)展[J].中國(guó)獸藥雜志，2011，45（2）：47-50.

[16] LEE D J，DRONGOWSKI R A，CORAN A G，et al.Evaluation of probiotic treatment in a neonatal animal model[J].Pediatric surgery international，2000，16（4）：237-242.

[17] DUAN Y F，LIU P，LI J T，et al.Molecular responses of calreticulin gene to Vibrio anguillarum and WSSV challenge in the ridgetail white prawn Exopalaemon carinicauda[J].Fish & shellfish immunology，2014，36（1）：164-171.

[18] RENGPIPAT S，RUKPRATANPORN S，PIYATIRATITIVORAKUL S，et al.Immunity enhancement in black tiger shrimp（Penaeus monodon）by a probiont bacterium（Bacillus?S11）[J].Aquaculture，2000，191（4）：271-288.

[19] 胡毅，譚北平，麥康森，等.飼料中益生菌對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)、腸道菌群及部分免疫指標(biāo)的影響[J].中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)，2008，15（2）：244-251.

[20] ZANELLA I，SAKOMURA N K，SILVERSIDES F G，et al.Effect of enzyme supplementation of broiler diets based on corn and soybeans[J].Poultry science，1999，78（4）：561-568.

[21] 謝航，邱宏端，王秀彬，等.地衣芽孢桿菌降解水產(chǎn)養(yǎng)殖中殘余餌料的特性研究[J].福建水產(chǎn)，2008（3）：31-35.

[22] 杭小英，周冬仁，羅毅志，等.地衣芽孢桿菌的生長(zhǎng)及對(duì)養(yǎng)殖水體中殘餌的降解特性[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，43（3）：206-208.

[23] 楊宇嘉，陳營(yíng).幾株水產(chǎn)用芽孢桿菌的功能分析[J].天津農(nóng)業(yè)科學(xué)，2016，22（5）：54-57.

[24] 施偉達(dá)，章文敏，周冬仁，等.芽孢桿菌研究進(jìn)展及其在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2012（2）：310-311，317.

[25] 徐亞飛，胡浩，周計(jì)丹，等.凝結(jié)芽孢桿菌的生物學(xué)特性及其在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用[J].鹽城工學(xué)院學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2017，30（1）：52-55，74.

[26] FROM C，PUKALL R，SCHUMANN P，et al.Toxinproducing ability among Bacillus spp.outside the Bacillus cereus group[J].Apillied and environmental microbiology，2005，71（3）：1178-1183.

[27] 宋蓉，許春蘋(píng)，梁運(yùn)祥.一株干酪乳桿菌對(duì)養(yǎng)殖水體亞硝酸鹽去除機(jī)理的研究[J].淡水漁業(yè)，2013，43（1）：3-8.

[28] 齊欣，張峻.益生菌在對(duì)蝦養(yǎng)殖中的應(yīng)用[J].中國(guó)飼料，2006（14）：32-34.

[29] 徐升.對(duì)蝦養(yǎng)殖水環(huán)境生物修復(fù)研究進(jìn)展[J].河北漁業(yè)，2006（12）：1-4，39.