彭冬冬,董珂,厲巧,周志敏,肖灑,姜德建

(湖南省藥物安全評(píng)價(jià)研究中心,新藥藥效與安全性評(píng)價(jià)湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,長(zhǎng)沙 410331)

陰道炎是目前婦科門(mén)診中常見(jiàn)疾病,是引導(dǎo)粘膜及粘膜下結(jié)締組織發(fā)生的炎癥,其主要包括細(xì)菌性陰道炎、霉菌性陰道炎、滴蟲(chóng)性陰道炎以及細(xì)菌和真菌混合性陰道炎。 臨床上陰道炎病例大多是由多種菌(包括細(xì)菌和真菌) 混合感染所致,以陰道黏膜易充血、腫脹,有顆粒狀膿皰和小出血點(diǎn)等為主要臨床表現(xiàn)。 根據(jù)病原學(xué)流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示,亞洲婦女陰道炎發(fā)病率如下：陰道毛滴蟲(chóng)2% ～5%,念珠菌屬 3% ～ 14%,細(xì)菌性陰道病 0% ～16%,細(xì)菌和真菌混合感染50%以上,混合性陰道炎占比逐年上升[1]。 混合性陰道炎不僅會(huì)影響女性患者的生活質(zhì)量,而且會(huì)導(dǎo)致女性不孕癥,故此類(lèi)動(dòng)物模型建立對(duì)該病的治療和發(fā)病機(jī)制研究具有重要意義。 因此,本研究采用SD 大鼠通過(guò)混合菌(加德納菌GV10-1 菌,白色念珠菌,B 族鏈球菌懸液)誘導(dǎo)建立混合性陰道炎模型,并對(duì)其臨床表現(xiàn)和病理生理改變進(jìn)行觀察,為混合性陰道炎的藥物開(kāi)發(fā)和評(píng)價(jià)提供新模型。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF 級(jí)約7 周齡雌性 SD 大鼠30 只,體重210 g,購(gòu)于湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司【SCXK(湘)2019-0004】;飼養(yǎng)于湖南省藥物安全評(píng)價(jià)研究中心 ABSL-II 生物安全實(shí)驗(yàn)室 IVC 系統(tǒng)【SYXK(湘)2015-0016】。 飼養(yǎng)期間各組大鼠自由飲水,飼喂SPF 鼠料(Co60消毒)由北京科澳協(xié)力飼料有限公司【SCXK(京)2019-0003】提供。 飼養(yǎng)環(huán)境：晝夜各半循環(huán)照明,溫度20.9 ～25.9℃,濕度42.5% ～64%。 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均按照湖南省藥物安全評(píng)價(jià)研究中心動(dòng)物倫理與福利委員會(huì)的指導(dǎo)方針和批準(zhǔn)進(jìn)行(審批號(hào)：IACUC-2019(3)051)。

1.1.2 受試物

復(fù)方甲硝唑陰道栓,組份為：甲硝唑0.45 g、四環(huán)素50 mg、制霉菌素30 mg。 規(guī)格：每粒3 g,批號(hào)：09191001,失效日期：2021.09。 主要適應(yīng)癥：用于治療滴蟲(chóng)性陰道炎、霉菌性陰道炎、細(xì)菌性陰道炎和老年性陰道炎、非特異性陰道炎及支原體感染、淋病雙球菌感染等病癥。 生產(chǎn)單位：河北金牛原大藥業(yè)科技有限公司。

1.1.3 試劑與儀器

苯甲酸雌二醇注射液,批號(hào)：20180101,規(guī)格：2 mL：4 mg,10 支/盒,失效日期：2020.01.05,生產(chǎn)廠家：四川金科藥業(yè)有限責(zé)任公司;注射用硫酸鏈霉素,批號(hào)：17053101,規(guī)格：1 g(100 萬(wàn)單位)/瓶,失效日期：2020.04,生產(chǎn)廠家：瑞陽(yáng)制藥有限公司。 革蘭氏染色液試劑盒,貨號(hào)：HB8278,批號(hào)：20190511,生產(chǎn)單位：青島海博生物技術(shù)有限公司。

DFC 420C 型病理成像系統(tǒng)(德國(guó) Leica);DM2500 型熒光顯微鏡(德國(guó)Leica);3111 型二氧化碳培養(yǎng)箱(美國(guó)Thermo);SPL-250 型生化培養(yǎng)箱(天津市萊伯特瑞);TP1020 型全自動(dòng)脫水機(jī)(德國(guó)Leica);EG1150H+C 型組織包埋機(jī)(德國(guó) Leica);RM2235 型石蠟切片機(jī)(德國(guó) Leica)、CX31 型生物顯微鏡(日本奧林巴斯公司);CV5030+HV 型全自動(dòng)封染一體機(jī)(德國(guó)Leica);BX43+MD50 型生物顯微鏡+數(shù)碼成像系統(tǒng)(日本奧林巴斯公司)。

1.1.4 試驗(yàn)菌株

陰道加德納氏菌(BNCC 337545)和白色念珠菌(17015177)由杭州先端生物科技有限公司提供,B族鏈球菌(ATCC 12386)由北納創(chuàng)聯(lián)生物科技有限公司提供,均來(lái)源于陰道炎患者的白帶樣本。 所有菌株均在本中心進(jìn)行培養(yǎng)及傳代,并擴(kuò)增至108CFU/mL 以上。

1.2 方法[2-8]

1.2.1 菌株的復(fù)蘇、傳代/純化

陰道加德納氏菌：取陰道加德納氏菌甘油凍存液,于37℃水浴中輕輕搖晃,加速解凍,用一次性無(wú)菌接種環(huán)劃線接種于哥倫比亞血平板(成品,購(gòu)于廣東環(huán)凱微生物科技有限公司)上復(fù)蘇,(36 ± 1)℃厭氧培養(yǎng)48 h,形成灰白色、半透明、光滑、針尖樣大小的菌落。 用一次性無(wú)菌接種環(huán)于一生長(zhǎng)良好的陰道加德納氏菌的哥倫比亞血平板上挑取單個(gè)菌落,采用劃線法轉(zhuǎn)接于另一無(wú)菌哥倫比亞血平板上,(36 ± 1)℃培養(yǎng)48 h,2 ～ 8℃暫存,備用。

B 族鏈球菌：取 B 族鏈球菌甘油凍存液,于37℃水浴中輕輕搖晃,加速解凍,用一次性無(wú)菌接種環(huán)劃線接種于血平板(成品,購(gòu)于廣東環(huán)凱微生物科技有限公司)上復(fù)蘇,(36 ± 1)℃培養(yǎng)24 h 后,形成灰白色、表面光滑、圓形、β 溶血的菌落,部分菌株無(wú)明顯β 溶血環(huán)。 用一次性無(wú)菌接種環(huán)于一生長(zhǎng)良好的B 族鏈球菌的血平板上挑取單個(gè)菌落,采用劃線法轉(zhuǎn)接于另一無(wú)菌血平板上,(36 ± 1)℃培養(yǎng)24 h,2 ～ 8℃暫存,備用。

白色念珠菌：取白色念珠菌甘油凍存液,于37℃水浴中輕輕搖晃,加速解凍,用一次性無(wú)菌接種環(huán)劃線接種于沙氏葡萄糖瓊脂(成品,購(gòu)于廣東環(huán)凱微生物科技有限公司。 121℃,30 min 高溫高壓滅菌,待冷卻至50℃左右,注入20 ～25 mL 于90 mm無(wú)菌培養(yǎng)皿中,待凝固后方可使用)平板上復(fù)蘇,25～28℃培養(yǎng)48 h 后,生成灰白乳酪樣菌落。 用一次性無(wú)菌接種環(huán)于一生長(zhǎng)良好的白色念珠菌的沙氏葡萄糖瓊脂平板上挑取單個(gè)菌落,采用劃線法轉(zhuǎn)接于另一無(wú)菌沙氏葡萄糖瓊脂平板上,25 ～28℃培養(yǎng)48 h,2 ～ 8℃暫存,備用。

1.2.2 形態(tài)觀察及革蘭氏染色觀察

光學(xué)顯微鏡下觀察陰道灌洗液菌株形態(tài)和數(shù)量等。 用接種環(huán)挑取1 環(huán)蒸餾水至潔凈載玻片上,挑取1 個(gè)單菌落,與蒸餾水混合均勻;涂布經(jīng)火焰固定,加結(jié)晶紫溶液和碘液,各染1 min 水洗,脫色液,不時(shí)搖動(dòng)載玻片約10 ～30 s,至無(wú)紫色脫落為止水洗,再加復(fù)染色染1 min 水洗。 干后油鏡觀察菌株形態(tài)。

1.2.3 大鼠混合性陰道炎模型建立

30 只大鼠分別于給藥前第1 ～3 天每只皮下注射0.5 mg 的苯甲酸雌二醇注射液(每日上午進(jìn)行),其中20 只模型大鼠陰道內(nèi)注入鏈霉素每只每次50 μg(上午進(jìn)行),然后向陰道內(nèi)注入混合菌(加德納菌GV10-1 菌,白色念珠菌,B 族鏈球菌懸液)(1 × 108CFU/mL)每只每次 50 μL(下午進(jìn)行),每天1 次,連續(xù)3 d,復(fù)制混合性陰道炎模型,空白組大鼠陰道接種 50 μL 不含菌株的半固體培養(yǎng)基。 模型組和空白組大鼠分別于分組前向大鼠陰道內(nèi)注入50 μL 無(wú)菌 PBS,移液槍輕輕吹打5 次后吸出沖洗液(約250 μL),取50 μL 用于顯微鏡下觀察是否存在陰道混合菌感染。 選取感染成功20 只大鼠按體重和菌株負(fù)荷量隨機(jī)分為模型組和藥物驗(yàn)證組(復(fù)方甲硝唑陰道栓每只54 mg,每天1 次,連續(xù)5 d),每組10 只動(dòng)物。 正常組和模型組大鼠經(jīng)陰道給予等量的0.9%氯化鈉注射液。

1.2.4 觀察指標(biāo)

(1)分別于分組前及給藥第5 天后用棉簽蘸取SD 大鼠外陰或陰道分泌物,涂于病理載玻片上,酒精固定,常規(guī)瑞氏染色和革蘭氏染色鏡檢,并在顯微鏡(× 200 倍)下觀察菌體和線索細(xì)胞情況。 治愈(轉(zhuǎn)陰)：顯微鏡下觀察不到菌絲和(或)芽孢(或)線索細(xì)胞;未愈：顯微鏡下觀察可見(jiàn)菌絲和(或)芽孢(或)線索細(xì)胞。 計(jì)算轉(zhuǎn)陰率(轉(zhuǎn)陰率=治愈例數(shù)/動(dòng)物總例數(shù))(2)分別于分組前及給藥第5 天后取大鼠陰道分泌物進(jìn)行清潔度檢查。 陰道清潔度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：I 度：鏡下以陰道桿菌為主,并可見(jiàn)大量上皮細(xì)胞,計(jì)為1 分;II 度：有部分陰道桿菌,上皮細(xì)胞亦可見(jiàn),也有部分膿細(xì)胞和雜菌,計(jì)為2 分;III度：只見(jiàn)少量陰道桿菌和上皮細(xì)胞,但有大量的膿細(xì)胞和其他雜菌,計(jì)為3 分;IV 度：鏡下無(wú)陰道桿菌,幾乎全是膿細(xì)胞和大量雜菌,計(jì)為4 分。 (3)于末次給藥后處死大鼠,取出、吸干表面液體后稱量陰道重量,計(jì)算陰道指數(shù)(陰道指數(shù)=陰道重量/動(dòng)物體重),同時(shí)測(cè)量陰道pH。 (4)收集分組前、治療5 d 的陰道灌洗液,按照梯度稀釋后進(jìn)行培養(yǎng),計(jì)數(shù)100 μL 灌洗液中的菌落數(shù)。 (5)取陰道組織置于10%中性福爾馬林溶液中固定,石蠟包埋、切片、HE 染色進(jìn)行組織病理學(xué)觀察。 根據(jù)充血、水腫、出血、浸潤(rùn)4 項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行評(píng)分,具體評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：黏膜上皮光滑,無(wú)壞死脫落,黏膜下無(wú)充血、水腫、出血、炎細(xì)胞浸潤(rùn),陰道內(nèi)無(wú)炎性滲出物,計(jì)為0 分;黏膜上皮無(wú)壞死脫落,黏膜下充血,陰道內(nèi)無(wú)炎性滲出物,計(jì)為1 分;黏膜上皮有灶性壞死脫落,黏膜下充血、水腫,無(wú)炎細(xì)胞浸潤(rùn),計(jì)為2 分;黏膜上皮有灶性壞死脫落,黏膜下充血、水腫、點(diǎn)狀出血、少量炎細(xì)胞浸潤(rùn),計(jì)為3 分;黏膜上皮壞死脫落,黏膜下充血、水腫、點(diǎn)狀出血、炎細(xì)胞浸潤(rùn),陰道內(nèi)有大量炎性滲出物,計(jì)為4 分。 記錄炎癥分值并統(tǒng)計(jì)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 16.0 進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì),計(jì)量資料采用平均值± 標(biāo)準(zhǔn)差( ˉx ± s)表示。 Leven’s test 方法檢驗(yàn)方差齊性,單因素方差分析(One-Way ANOVA)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,LSD test(參數(shù)法)進(jìn)行兩兩比較分析。 計(jì)數(shù)資料以百分率表示,采用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法,以P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 陰道分泌物涂片轉(zhuǎn)陰率

如圖1 和圖2 所示,正常組10/10 例動(dòng)物陰道涂片未染色和染色鏡檢可見(jiàn)少量卵圓形白色念珠菌,但均未見(jiàn)菌絲和線索細(xì)胞,感染率為0;模型組9/10 例動(dòng)物陰道涂片未染色和染色鏡檢可見(jiàn)大量菌絲和球狀的線索細(xì)胞,感染率90%;復(fù)方甲硝唑陰道栓組9/10 例動(dòng)物陰道涂片未染色和染色鏡檢未見(jiàn)菌絲和線索細(xì)胞,1/10 例動(dòng)物陰道涂片未染色和染色鏡檢可見(jiàn)菌絲,但不未見(jiàn)線索細(xì)胞,治愈率90%。

2.2 陰道灌洗液混合菌計(jì)數(shù)

如圖3 及圖4 所示,革蘭氏染色鏡檢,陰道加德納氏菌染色鏡檢,呈革蘭陰性細(xì)小桿菌,常呈球桿狀;B 族鏈球菌呈革蘭陽(yáng)性球菌,單個(gè)、成雙或鏈狀排列、長(zhǎng)短不一;白色念珠菌表層卵圓形芽生細(xì)胞,革蘭染色呈陽(yáng)性。 如表1 所示,與正常組比較,給藥第5 天后模型組陰道灌洗液混合菌計(jì)數(shù)顯著增加(P ＜0.01);與模型組比較,給藥第5 天后復(fù)方甲硝唑陰道栓組陰道灌洗液混合菌計(jì)數(shù)顯著降低(P ＜0.01)。

圖1 陰道涂片(× 40,標(biāo)尺 = 50 μm)Figure 1 Vaginal smear(× 40,Bar = 50 μm)

圖 2 陰道涂片(Wright’s staining,× 10,標(biāo)尺 = 100 μm)Figure 2 Vaginal smear (Wright’s staining, × 10,Bar = 100 μm)

圖3 接種前菌株培養(yǎng)鏡檢(革蘭氏染色, × 100,標(biāo)尺 = 100 μm)Figure 3 Microscopic examination of strain culture before inoculation (Gram’s staining, × 100, Bar = 100 μm)

注：A： 革蘭氏染色(陰道加德納氏菌;B 族鏈球菌);B：陰道涂片(白色念珠菌)。圖4 陰道灌洗液鏡檢(× 40,標(biāo)尺 = 50 μm)Note. A, Gram staining (gardnerella vaginalis; group B streptococcus). B, Vaginal smear (candida albicans).Figure 4 Transvaginal lavage(× 40,Bar = 50 μm)

表1 混合性陰道炎對(duì)大鼠陰道灌洗液菌落數(shù)的影響( ˉx ±s,n = 10)Table 1 Effects of mixed vaginitis on colony count of vaginal lavage in rats ( ˉx ±s,n =10)

2.3 陰道清潔度檢查

正常組動(dòng)物陰道涂片有部分陰道桿菌,同時(shí)可見(jiàn)大量的上皮細(xì)胞,清潔度為II 度,評(píng)分為2.0 ±0.0;模型組動(dòng)物陰道涂片僅少見(jiàn)上皮細(xì)胞,無(wú)陰道桿菌,可見(jiàn)大量的雜菌,清潔度為III ～I(xiàn)V 度,評(píng)分為3.7 ± 1.2;復(fù)方甲硝唑陰道栓組動(dòng)物陰道涂片僅少量的陰道桿菌,可見(jiàn)部分的上皮細(xì)胞,清潔度為II～ IIII 度,評(píng)分為 2.3 ± 0.2。 提示模型組動(dòng)物連續(xù)接種混合菌3 d,致病菌經(jīng)5 d 在大鼠陰道體內(nèi)不斷繁殖,優(yōu)勢(shì)菌逐漸減少,清潔度明顯增加(P ＜0.05);經(jīng)陰道給予復(fù)方甲硝唑陰道栓治療5 d 后,清潔度較模型組明顯降低(P ＜0.05)。

2.4 陰道pH

給藥前各組動(dòng)物陰道分泌物經(jīng)0.1 級(jí)pH 試紙檢測(cè),正常組、模型組及復(fù)方甲硝唑陰道栓組陰道分泌物 pH 值分別為 4.1 ± 0.9、4.0 ± 1.2、3.9 ±1.4;給藥第5 天,正常組、模型組及復(fù)方甲硝唑陰道栓組陰道分泌物 pH 值分別為 4.2 ± 1.1、7.7 ±2.1、4.5 ± 0.6。 提示模型組動(dòng)物連續(xù)接種混合菌3 d,致病菌經(jīng)5 d 在大鼠陰道體內(nèi)不斷繁殖,優(yōu)勢(shì)菌逐漸減少,pH 值明顯增加(P ＜0.01);經(jīng)陰道給予復(fù)方甲硝唑陰道栓治療5 d 后,動(dòng)物陰道pH 值與給藥前變化不大,與同期模型組比較,pH 值明顯降低(P ＜ 0.01)。

2.5 陰道組織指數(shù)

正常組、模型組及復(fù)方甲硝唑陰道栓組陰道體質(zhì)量分別為 1.02 ± 0.23、0.98 ± 0.45 及 1.13 ±0.17,模型組大鼠陰道指數(shù)與正常組比較,差異不具有顯著性;混合性陰道炎大鼠經(jīng)復(fù)方甲硝唑陰道栓治療5 d 后,復(fù)方甲硝唑陰道栓組陰道指數(shù)與模型組比較,差異不具有顯著性。

2.6 陰道組織病理檢查

2.6.1 一般鏡下觀察

如圖5 所示,正常組：陰道黏膜上皮細(xì)胞未見(jiàn)壞死,固有層為致密結(jié)締組織,未見(jiàn)充血水腫及炎細(xì)胞浸潤(rùn)。 模型組：陰道壁變厚,上皮細(xì)胞壞死,固有層出現(xiàn)充血和水腫,以中性粒細(xì)胞為主,淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞炎細(xì)胞浸潤(rùn),纖維細(xì)胞增生明顯。 復(fù)方甲硝唑陰道栓組陰道分泌物減少,鏡下觀察上皮連續(xù)性好,少見(jiàn)淺表糜爛,炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)減少。

2.6.2 陰道組織病變?cè)u(píng)分

正常組陰道組織未見(jiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)或水腫及充血,病變?cè)u(píng)分為0.0 ± 0.0;模型組陰道組織可見(jiàn)大量的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),同時(shí)伴有炎性滲出物,病變?cè)u(píng)分為3.5 ± 0.4;復(fù)方甲硝唑陰道栓組陰道組織可見(jiàn)充血,但未見(jiàn)水腫和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),病變?cè)u(píng)分為1.0 ± 0.1。 結(jié)果顯示模型組動(dòng)物連續(xù)接種混合菌3 d,大鼠陰道組織病變程度加重(P ＜0.01);經(jīng)陰道給予復(fù)方甲硝唑陰道栓治療5 d 后,動(dòng)物陰道組織病變程度有所減輕(P ＜0.01)。 提示復(fù)方甲硝唑陰道栓能顯著改善混合性陰道炎大鼠陰道組織病變程度。

3 討論

混合性陰道炎是指陰道受多種病菌(如霉菌、細(xì)菌、滴蟲(chóng)等)、原蟲(chóng)感染而引起的炎癥性病變,也就是陰道菌群失調(diào)的局部表現(xiàn)。 臨床實(shí)踐上多數(shù)是混合感染,如真菌感染多繼發(fā)于細(xì)菌感染或治療之后。 臨床上婦科診斷主要通過(guò)陰道分泌物培養(yǎng)、清潔度、pH 以及胺臭味試驗(yàn)檢查,篩選出可能性疾病。 陰道炎治療原則主要是消除誘因,根據(jù)患者情況選擇局部或全身應(yīng)用抗真菌藥物,應(yīng)將抗真菌藥與抗細(xì)菌藥聯(lián)合應(yīng)用。 但這些藥物在殺死致病菌的同時(shí),也殺死了起自潔作用的乳桿菌,所以只能取得暫時(shí)緩解,由于失去優(yōu)勢(shì)乳桿菌的保護(hù),新一輪感染很快出現(xiàn),導(dǎo)致遷延反復(fù)。 由此可見(jiàn),陰道炎方面疾病對(duì)人類(lèi)健康的危害依然嚴(yán)重,其治療任務(wù)依然艱巨,因此建立符合臨床陰道炎表現(xiàn)的模型對(duì)陰道炎的治療都有著重要的意義。 目前文獻(xiàn)報(bào)道的模型有細(xì)菌性、真菌性、滴蟲(chóng)性和衣原體性陰道炎模型,其中真菌性陰道炎模型研究較多,而真菌和細(xì)菌混合感染模型報(bào)道甚少,因此本研究主要通過(guò)大鼠經(jīng)皮下注射給予苯甲酸雌二醇,建立假動(dòng)情期,同時(shí)經(jīng)陰道給予注射用硫酸鏈霉素處理,能夠破壞正常大鼠的陰道菌群, 再注入致病性混合菌(加德納菌GV10-1 菌,白色念珠菌,B 族鏈球菌懸液)更容易定植到大鼠陰道內(nèi),有利于混合菌的生長(zhǎng)和繁殖,從而復(fù)制混合性陰道炎模型。

圖5 SD 大鼠陰道組織病理切片(× 100,HE 染色)Figure 5 Vaginal histopathological sections of SD rats (× 100, HE staining)

研究顯示,混合性陰道炎模型組大鼠給藥第5天混合感染率為90%,致病性菌落數(shù)顯著增加,陰道分泌物涂片轉(zhuǎn)陰率顯著減少,清潔度評(píng)分顯著增加,同時(shí)陰道pH 顯著增加,其異常癥狀與臨床上陰道炎的臨床表現(xiàn)相似。 顯微鏡下觀察到陰道壁變厚,上皮細(xì)胞壞死,固有層出現(xiàn)充血和水腫,以中性粒細(xì)胞為主,淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞炎細(xì)胞浸潤(rùn),纖維細(xì)胞增生明顯,其病理改變與臨床基本一致。 復(fù)方甲硝唑陰道栓含有甲硝唑、制霉菌素、四環(huán)素等多種成分,可以同時(shí)殺死細(xì)菌、霉菌和滴蟲(chóng),用于治療滴蟲(chóng)性陰道炎、細(xì)菌性陰道炎和霉菌性陰道炎等多種類(lèi)型的陰道炎。 甲硝唑的抗菌譜包括消化鏈球菌、韋榮球菌、梭形桿菌、真桿菌等,其中甲硝唑的硝基在特定條件下還原成一種細(xì)胞毒性物質(zhì),并參與細(xì)菌的基因代謝過(guò)程致細(xì)菌的死亡[9-11]。 制霉菌素栓劑是一種多烯型抗真菌藥物,對(duì)念珠菌屬的抗菌活性高,可與真菌細(xì)胞膜上甾醇結(jié)合,改變細(xì)胞膜通透性進(jìn)而發(fā)揮抗菌功能[12]。 故本次研究選用復(fù)方甲硝唑陰道栓作為混合性陰道炎模型的陽(yáng)性藥進(jìn)行驗(yàn)證,結(jié)果顯示復(fù)方甲硝唑陰道栓能顯著減輕陰道黏膜的炎癥浸潤(rùn),顯著減少陰道分泌物和陰道灌洗液的致病菌群數(shù)目,同時(shí)降低陰道pH 值和清潔度評(píng)分。

綜上所述,對(duì)大鼠進(jìn)行雌激素和注射用硫酸鏈霉素預(yù)處理后,接種混合菌可成功建立大鼠混合性陰道炎模型,為女性生殖系統(tǒng)的藥物篩選與評(píng)價(jià)提供有效的動(dòng)物模型。