陸武　陳思敏　張艷

摘 要：通過3種不同的樣品前處理方法，利用液相色譜儀分別對染色砂糖橘的果皮和果肉進行合成著色劑的檢測，從而比較出最優(yōu)的樣品前處理方法。同時得出染色砂糖橘的果皮和果肉中是否含有合成著色劑。

關(guān)鍵詞：染色砂糖橘;液相色譜儀;合成著色劑;前處理

最近市面上發(fā)現(xiàn)了有商家對砂糖橘進行染色的情況，國家標(biāo)準(zhǔn)中沒有相關(guān)產(chǎn)品的檢驗方法，為了檢測出染色成分是否為合成著色劑，最終通過討論確定了3種樣品前處理方法，分別對染色橘子的皮和肉進行檢驗，最終再選擇出最優(yōu)的檢驗方法。采用皮和肉分開處理的方法確認(rèn)染色橘子果皮和果肉是否都有合成著色劑。

1 實驗樣品

市面上市民發(fā)現(xiàn)的有染色情況的砂糖橘。

2 實驗原理

食品中人工合成著色劑用聚酰胺吸附法或液-液分配法提取，制成水溶液，注入高效液相色譜儀，經(jīng)色譜分離，根據(jù)保留時間定性和與峰面積比較進行定量。

3 實驗試劑

甲醇（色譜級）、乙腈（色譜級）、正己烷、鹽酸、冰醋酸、甲酸、乙酸銨、檸檬酸、無水硫酸鈉、正丁醇、無水乙醇、氨水、聚酰胺粉、乙酸乙酯、環(huán)己烷、合成著色劑標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)等。

4 儀器和設(shè)備

高效液相色譜儀（帶二極管陣列或紫外檢測器）、天平、水浴鍋、G3垂融漏斗、凝膠色譜儀、組織搗碎機、離心機、漩渦混合器、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、氮吹儀等。

5 樣品前處理方法

5.1 參考GB 5009.35-2016標(biāo)準(zhǔn)方法

參考GB 5009.35-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中合成著色劑的測定。

1.試樣制備。稱取5～10 g（精確至0.001 g）經(jīng)粉碎混勻的樣品，放入100 mL小燒杯中，用水反復(fù)洗滌色素，到砂糖橘無色素為止，合并色素漂洗液為樣品溶液。

2.色素提取。聚酰胺吸附法：向樣品溶液中加檸檬酸溶液，調(diào)pH到6，加熱至60 ℃，將1 g聚酰胺粉加少許水調(diào)成粥狀，倒入樣品溶液中，攪拌片刻，以G3垂融漏斗抽濾，用60 ℃ pH為4的水洗滌3～5次，然后用甲醇-甲酸混合溶液洗滌3～5次，再用水洗至中性，用乙醇-氨水-水混合溶液解吸3～5次，直至色素完全解吸，收集解吸液，加乙酸中和，蒸發(fā)至近干，加水溶解，定容至5 mL。經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，進高效液相色譜儀分析。

3.測定。將樣品提取液和合成著色劑標(biāo)準(zhǔn)使用液分別注入高效液相色譜儀，根據(jù)保留時間定性，外標(biāo)峰面積法定量。

5.2 參考GB5009.35-2016標(biāo)準(zhǔn)方法

參考GB5009.35-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中合成著色劑的測定。

1.試樣制備。稱取5～10 g（精確至0.001 g）經(jīng)粉碎混勻的樣品，放入離心管中。

2.色素提取。加無水乙醇-氨水-水溶液（7+2+1，體積比）至25 mL，將離心管放到水浴中10～15 min，離心10 min（此步驟重復(fù)3-5次），提取上清液，樣品溶液加檸檬酸溶液調(diào)pH到6，加熱至60 ℃，將1 g聚酰胺粉加少許水調(diào)成粥狀，倒入樣品溶液中，攪拌片刻，以G3垂融漏斗抽濾，用60 ℃pH為4的水洗滌3～5次，然后用甲醇-甲酸混合溶液洗滌3～5次，再用水洗至中性，用乙醇-氨水-水混合溶液解吸3～5次，直至色素完全解吸，收集解吸液，加乙酸中和，蒸發(fā)至近干，加水溶解，定容至5 mL。經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，進高效液相色譜儀分析。

3.測定。將樣品提取液和合成著色劑標(biāo)準(zhǔn)使用液分別注入高效液相色譜儀，根據(jù)保留時間定性，外標(biāo)峰面積法定量。

5.3 參考SN/T 3638-2013 出口食品中脂溶性著色劑的測定

1.試樣制備：稱取5～10 g（精確至0.001 g）經(jīng)粉碎混勻的樣品于50 mL離心管中，準(zhǔn)確加入20 mL乙酸乙酯，均質(zhì)2 min， 以4 000 r/min的速度離心8 min，將上清液過濾到雞心瓶中。再用20 mL乙酸乙酯重復(fù)提取一次，過濾后用5 mL乙酸乙酯沖洗濾紙，用同一雞心瓶收集濾液，將濾液在40 ℃下蒸發(fā)至近干，用乙酸乙酯-環(huán)己烷定容至10 mL的玻璃管中，待凈化。

2.色素提取凈化。將10 mL溶液按條件凈化，凈化后樣液經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，進高效液相色譜儀分析。

3.測定。將樣品提取液和合成著色劑標(biāo)準(zhǔn)使用液分別注入高效液相色譜儀，根據(jù)保留時間定性，外標(biāo)峰面積法定量。

6 儀器條件

色譜柱：C18柱。柱溫：35 ℃。進樣量：10 μL。

二極管陣列檢測范圍400～800 nm，紫外檢測器波長：254 nm。

7 結(jié)果分析

分別利用3種前處理方法對染色砂糖橘的果皮和果肉進行前處理，然后利用高效液相色譜儀對合成著色劑進行檢測，通過實驗比較，3種方法都可以很好的檢測出樣品中的合成著色劑。但第一種前處理方法相對于其他兩種操作簡單，而且可以大大的節(jié)約前處理時間，所以最終選用第一種前處理方法作為本實驗的最終方法。通過本次實驗得出，染色砂糖橘的表皮確實含有合成著色劑，但是果肉中并沒有檢測出合成著色劑，最終給市民一個滿意的答復(fù)。