不同提取方法對(duì)益氣復(fù)脈膠囊中五味子醇甲和五味子乙素含量的影響

王立鵬

摘要：目的 考察不同溶媒對(duì)益氣復(fù)脈膠囊中五味子醇甲和五味子乙素含量的影響。方法 用水提-乙醚萃取、乙酸乙酯超聲、甲醇超聲提取。結(jié)果? 五味子醇甲在0.2084μg～2.084μg范圍內(nèi)峰面積值與進(jìn)樣量呈良好的線性關(guān)系（r=0.9998）其平均回收率為100.24%，RSD為0.91%;五味子乙素在0.1996μg～1.996μg范圍內(nèi)峰面積值與進(jìn)樣量呈良好的線性關(guān)系（r=0.9997）其平均回收率為99.77%，RSD為0.69%。結(jié)論 其中用甲醇超聲提取效率最高，該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，分離效果好。

關(guān)鍵詞：益氣復(fù)脈膠囊;五味子醇甲;五味子乙素;HPLC

益氣復(fù)脈膠囊由紅參、麥冬、北五味子等藥味加工而成。具有益氣復(fù)脈、養(yǎng)陰生津;改善冠狀動(dòng)脈循環(huán)、降低心肌耗氧量之功效。用于氣陰兩虧，心悸氣短，脈微自汗，冠心病、心絞痛和衰老等癥[1]。北五味子具收斂固澀、益氣生津、補(bǔ)腎寧心之功效[2]，采用不同提取溶媒，用HPLC法測(cè)定益氣復(fù)脈膠囊中五味子醇甲和五味子乙素的含量。

一、 儀器與試藥

（一）儀器

高效液相色譜儀LC-20AT，SPD-20A紫外檢測(cè)器;電子分析天平（北京賽多利斯天平有限公司，型號(hào)BS224S，d=0.1mg）微量分析天平（湘儀天平儀器廠，型號(hào)TG332A，d=0.01mg）

（二）試藥

五味子醇甲對(duì)照品（110857-200709）、五味子乙素對(duì)照品（110765-200804）均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，供含量測(cè)定用;甲醇為色譜純（SIGMA公司）;其余試劑為分析純，水為超純水;益氣復(fù)脈膠囊為安康正大制藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)（批號(hào) 20130104，20130306，20130512）

二、 方法與結(jié)果

（一）色譜條件

色譜柱： Inertsil ODS-SP（4.6x150mm，5μm），柱溫： 30℃，流動(dòng)相：甲醇-水（63：37），流速：1.0mL.min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm。精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液10μL注入色譜儀。理論板數(shù)按五味子醇甲峰計(jì)，不得低于3000。圖譜如下：

（二）對(duì)照品溶液的制備

分別精密稱取五味子醇甲和五味子乙素對(duì)照品適量，加甲醇溶解并稀釋至刻度，制成每1mL含五味子醇甲20.84μg，含五味子乙素19.96μg的混合對(duì)照品液。

（三） 供試品溶液的制備

1.提取溶劑及提取方法的考察? 分別用乙酸乙酯加熱回流1h、乙酸乙酯超聲處理30min、乙醚超聲處理30min及甲醇超聲處理30min，結(jié)果發(fā)現(xiàn)甲醇超聲提取最為完全，故選擇甲醇作為提取溶劑。

2. 制備方法? ?取本品20粒，傾出內(nèi)容物，稱取約0.75g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20mL，超聲處理30min，濾過(guò)，取續(xù)濾液，微孔濾膜濾過(guò)，即得。

（四） 線性關(guān)系的考察

精密稱取五味子醇甲對(duì)照品10.42mg、五味子乙素對(duì)照品9.98mg，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取2、4、6、8、10和20μL，在上述色譜條件下測(cè)得峰面積。以濃度為橫坐標(biāo)（X）以峰面積為縱坐標(biāo)（Y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并對(duì)測(cè)得數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析，得回歸方程：五味子乙素? Y=266091.7X+1469.1，r=0.9997。結(jié)果表明五味子乙素在0.1996～1.996μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。五味子醇甲 Y=110171.6X+77.33，r=0.9998。結(jié)果表明五味子醇甲在0.2084～2.084μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

（五）精密度試驗(yàn)

精密吸取同一混合對(duì)照品溶液10μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，分別以五味子醇甲和五味子乙素峰面積計(jì)算，RSD分別為0.51%和0.78%。

（六） 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液分別在0、4、8、12、16、20、24h進(jìn)樣，五味子醇甲和五味子乙素峰面積RSD分別為0.21%和0.46%，表明樣品在24h內(nèi)穩(wěn)定。

（七）加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的益氣復(fù)脈膠囊樣品（20130104），研細(xì)，精密稱取約0.38g，平行稱樣6份，分別精密加入五味子醇甲和五味子乙素混合對(duì)照品溶液適量，精密加入甲醇適量，使加入液體總量為20mL，超聲處理30min，濾過(guò)，取續(xù)濾液，微孔濾膜濾過(guò)，即得。按供試品溶液方法進(jìn)樣，測(cè)定含量，計(jì)算回收率。

（八） 樣品測(cè)定

取益氣復(fù)脈膠囊3批（批號(hào) 20130104，20130308，20130612），按2.3項(xiàng)下方法處理，進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表3。根據(jù)測(cè)定結(jié)果，暫定其每粒含五味子醇甲及五味子乙素分別不得低于0.3mg和0.04mg。

三、討論

原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為水溶解后取續(xù)濾液，用乙醚萃取5次，萃取液用水洗滌2次，水洗液再用乙醚萃取1次，揮干乙醚液，60～80℃減壓干燥，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移定容至10mL量瓶。該方法操作步驟多，易造成目標(biāo)成分損失，故在制備供試品溶液時(shí)，我們對(duì)提取方法及提取溶媒分別進(jìn)行了考察，分別對(duì)乙酸乙酯回流1h，甲醇超聲30min，乙酸乙酯超聲30min，乙醚超聲30min進(jìn)行了對(duì)比。結(jié)果表明：甲醇超聲30min提取率較高，五味子醇甲及五味子乙素的提取率比其他提取方法分別高30%和100%以上。且有較好的分離度;乙醚超聲提取30min次之;乙酸乙酯回流1h和乙酸乙酯超聲30min提取率較低，而且二者結(jié)果接近，故選擇甲醇超聲30min的提取方法最為合理。

參考文獻(xiàn)：

[1]《國(guó)家藥品監(jiān)督管理局 藥品標(biāo)準(zhǔn) 新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)》[S].第18冊(cè).194-195

[2]中國(guó)藥典2010年版一部[S].一部.2010：61-62