2015～2019年湖北省臨床實(shí)驗(yàn)室抗甲型肝炎病毒抗體IgM能力驗(yàn)證（EQA）結(jié)果回顧分析

俞 斌(湖北省臨床檢驗(yàn)中心，武漢 430064)

甲肝病毒（HAV）是甲型肝炎的傳染源，于1973年由Feinstone 等應(yīng)用免疫電鏡方法在急性肝炎患者的糞便中發(fā)現(xiàn)。根據(jù)疾病預(yù)防控制局?jǐn)?shù)據(jù)顯示，2019年1 ～7月中國(guó)甲型肝炎發(fā)病人數(shù)為12 734 例，死亡人數(shù)為3 例,中國(guó)甲肝疫情呈現(xiàn)上升態(tài)勢(shì)[1]。甲型肝炎的實(shí)驗(yàn)室診斷主要依賴(lài)血清中特異性抗體的檢測(cè)，抗原檢測(cè)、病毒分離及分子診斷技術(shù)常作為常規(guī)診斷方法。通常用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）和化學(xué)發(fā)光技術(shù)對(duì)抗甲型肝炎病毒抗體IgM（HAV-IgM）進(jìn)行檢測(cè)，HAV-IgM 在急性感染時(shí)出現(xiàn)較早，上升快，高峰效價(jià)高，持續(xù)時(shí)間短，是急性HAV 感染或復(fù)發(fā)的可靠指標(biāo)，并且有助于區(qū)分現(xiàn)癥感染和既往感染[2]。為了解湖北省二級(jí)以上臨床實(shí)驗(yàn)室HAV-IgM 檢測(cè)能力，進(jìn)一步加強(qiáng)HAV-IgM 檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理，提高HAV-IgM 檢測(cè)水平，對(duì)全省2015 ～2019年二級(jí)以上臨床實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展HAV-IgM 項(xiàng)目血清學(xué)能力驗(yàn)證活動(dòng)進(jìn)行回顧總結(jié)，現(xiàn)將結(jié)果分析如下：

1.材料和方法

1.1 參控實(shí)驗(yàn)室2015 ～2019年分別有260，266，265，274 和263 家二級(jí)以上臨床實(shí)驗(yàn)室單位參加HAV-IgM 項(xiàng)目能力驗(yàn)證活動(dòng)，參加實(shí)驗(yàn)室類(lèi)型包括綜合醫(yī)院、中醫(yī)院、婦幼保健院、民營(yíng)醫(yī)院、專(zhuān)科醫(yī)院及儀器試劑生產(chǎn)公司（不在此次統(tǒng)計(jì)范圍），每年度合格率及不同類(lèi)型實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)統(tǒng)計(jì)情況見(jiàn)表1，表2。

1.2 參控樣本 HAV-IgM 的能力驗(yàn)證物品購(gòu)自康徹斯坦公司，批號(hào)201511～201515， 201611～201615，201711～201715，201811～201815，201911 ～201915，規(guī)格為1.0ml/支，儲(chǔ)存于-15℃，冷鏈運(yùn)輸分發(fā)，分發(fā)前均由通過(guò)了CNAS 認(rèn)可的均穩(wěn)檢測(cè)分包方實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行了均穩(wěn)檢測(cè)，達(dá)到質(zhì)量要求。

1.3 評(píng)價(jià)方法 每個(gè)參評(píng)單位每年發(fā)放1 套5 個(gè)批號(hào)高中低不同濃度能力驗(yàn)證物品，附有能力驗(yàn)證活動(dòng)指導(dǎo)書(shū)和結(jié)果回報(bào)表各1 份。在建議的測(cè)定日期，用本實(shí)驗(yàn)室采用平時(shí)提供檢測(cè)服務(wù)時(shí)使用的檢測(cè)系統(tǒng)做HAV-IgM 血清學(xué)試驗(yàn)，能力驗(yàn)證物品檢測(cè)須與常規(guī)標(biāo)本的處理方法一致。檢測(cè)完成后，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)將檢測(cè)結(jié)果、檢測(cè)方法和所用試劑名稱(chēng)等信息填寫(xiě)在回報(bào)表中，通過(guò)網(wǎng)絡(luò)上報(bào)至湖北省臨床檢驗(yàn)中心匯總分析，中心統(tǒng)計(jì)完畢后將評(píng)價(jià)結(jié)果反饋至各參評(píng)單位。

1.4 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)采用美國(guó)PT 評(píng)分法進(jìn)行評(píng)價(jià) ①針對(duì)某項(xiàng)目：本次某項(xiàng)目測(cè)定得分= (某項(xiàng)目測(cè)定結(jié)果可接受樣本數(shù)／某項(xiàng)目樣本總數(shù))×100%；②針對(duì)本計(jì)劃：本次計(jì)劃測(cè)定得分= (所有項(xiàng)目測(cè)定結(jié)果可接受樣本總數(shù)／所有項(xiàng)目樣本總數(shù))×100%。PT ≥80%為合格，PT ＜80%為不合格。

2 結(jié)果

2.1 2015 ～2019年檢測(cè)合格率 見(jiàn)表1。合格率均在95%以上。

表1 2015～2019年HAV-IgM 檢測(cè)EQA 合格率統(tǒng)計(jì)表

2.2 不同類(lèi)型實(shí)驗(yàn)室HAV-IgM 項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果 見(jiàn)表2。中醫(yī)院檢測(cè)平均合格率相對(duì)較低，為93.5%（其中二級(jí)中醫(yī)院占84.6%）。

表2 2015～2019年不同類(lèi)型實(shí)驗(yàn)室HAV-IgM 檢測(cè)合格率統(tǒng)計(jì)表

2.3 不同濃度HAV-IgM 項(xiàng)目能力驗(yàn)證物品檢測(cè)合格率 近5年，中心采用不同濃度的HAV-IgM 能力驗(yàn)證物品評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)能力，從低到高分別為4，15，20，50，80，150 NCU/ml，對(duì)應(yīng)的平均檢測(cè)合格率分別為94.7%，96.3%，97.3%，97.8%，97.7%和97.4%?？梢钥闯?，中高值濃度能力驗(yàn)證物品測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確度高，而低濃度能力驗(yàn)證物品則較易出現(xiàn)測(cè)定誤差。

2.4 方法學(xué)比較 實(shí)驗(yàn)室采用不同檢測(cè)方法的合格率結(jié)果，見(jiàn)表3。選用不同的方法，其結(jié)果存在差異。HAV-IgM 的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法有ELISA,放射免疫法（RIA）、化學(xué)發(fā)光法（CLIA）、化學(xué)發(fā)光微粒子免疫法（CMIA）、微粒子酶免疫分析法（MEIA）、斑點(diǎn)金免疫結(jié)合試驗(yàn)（DIGFA）、間接免疫熒光技術(shù)等。表3 對(duì)采用使用單位數(shù)≥3 家的ELISA,免疫滲濾層析試驗(yàn)、CLIA,磁微粒化學(xué)發(fā)光法四種方法進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)比較，可以看到，采用免疫滲濾層析法檢測(cè)的合格率較低，近5年的平均合格率為74.6%。

表3 2015 ～2019年不同方法檢測(cè)HAV-IgM 合格率統(tǒng)計(jì)表（n ≥3）

3 討論

通過(guò)以上對(duì)近五年來(lái)全省二級(jí)以上臨床實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展HAV-IgM 項(xiàng)目血清學(xué)EQA 進(jìn)行回顧總結(jié)發(fā)現(xiàn)不同類(lèi)型實(shí)驗(yàn)室、不同檢測(cè)方法的檢測(cè)結(jié)果存在差異。我們建議：一是基層中醫(yī)院應(yīng)充分利用能力驗(yàn)證評(píng)價(jià)結(jié)果，從能力驗(yàn)證評(píng)價(jià)報(bào)告中得出有關(guān)自身能力的結(jié)論，當(dāng)?shù)玫讲缓细竦哪芰︱?yàn)證評(píng)價(jià)成績(jī)時(shí)，應(yīng)對(duì)相關(guān)人員進(jìn)行適當(dāng)?shù)呐嘤?xùn)，對(duì)導(dǎo)致能力驗(yàn)證評(píng)價(jià)失敗的原因進(jìn)行分析并采取糾正或預(yù)防措施；實(shí)驗(yàn)室應(yīng)監(jiān)控結(jié)果趨勢(shì)，這些結(jié)果可能為問(wèn)題正在形成信號(hào)[3]；二是要選擇適當(dāng)?shù)臋z測(cè)方法。采用ELISA 法簡(jiǎn)單方便、經(jīng)濟(jì)實(shí)惠，不需要特殊設(shè)備，適用于大批量人群抗原抗體篩查，但在測(cè)定中影響因素很多，樣本處理時(shí)稀釋倍數(shù)較高會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。免疫滲濾試驗(yàn)優(yōu)點(diǎn)是操作快捷，結(jié)果直觀可靠，但只能做定性檢測(cè)，且容易造成弱陽(yáng)性標(biāo)本的漏讀和誤讀，性?xún)r(jià)比和準(zhǔn)確度方面都遜于ELISA 法。實(shí)驗(yàn)室在采用該方法時(shí)，須注意其檢測(cè)程序的質(zhì)量控制，除了檢測(cè)裝置的內(nèi)對(duì)照外，每檢測(cè)日或分析批，應(yīng)使用弱陽(yáng)性和陰性質(zhì)控物進(jìn)行質(zhì)控。陰、陽(yáng)性質(zhì)控品的檢測(cè)結(jié)果分別為陰性和陽(yáng)性即表明在控，相反則為失控【4】?；瘜W(xué)發(fā)光法被譽(yù)為目前免疫檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)【5-6】。磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法是將磁性分離技術(shù)、化學(xué)發(fā)光技術(shù)、免疫分析技術(shù)三者結(jié)合起來(lái)的一種新興分析方法，該技術(shù)充分利用了磁性分離的快速易自動(dòng)化、化學(xué)發(fā)光技術(shù)的高靈敏度以及免疫分析的特異性。實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)自身情況加以選擇使用。三是要不斷加強(qiáng)自身實(shí)驗(yàn)室建設(shè)，制定規(guī)范的操作規(guī)程，樹(shù)立全程質(zhì)量控制觀念，要把質(zhì)量控制理念貫穿到檢測(cè)的分析前、分析中、分析后的整個(gè)過(guò)程。

能力驗(yàn)證是利用實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)，按照預(yù)先制定的準(zhǔn)則評(píng)價(jià)參加者的能力。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)充分利用這個(gè)工具，將不合格的成績(jī)從方法問(wèn)題、設(shè)備問(wèn)題、技術(shù)問(wèn)題、材料問(wèn)題等方面查找失控原因【7】，及時(shí)改進(jìn)分析能力和實(shí)驗(yàn)方法；能力驗(yàn)證提供者也應(yīng)該不斷從評(píng)估方面進(jìn)行改進(jìn)，共同提高實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)水平和綜合能力，更好地為臨床服務(wù)。