蒲宇辰，向海軍，黃 斌，侯有明*

(1. 福建農(nóng)林大學閩臺作物有害生物生態(tài)防控國家重點實驗室，福州 350002；2. 福建農(nóng)林大學植物保護學院福建省昆蟲生態(tài)學重點實驗室，福州 350002；3. 閩南師范大學生物科學與技術(shù)學院，福建漳州 363000；4. 菲鵬生物股份有限公司，廣東東莞 523808)

水椰八角鐵甲Octodontanipae(Maulik)隸屬于鞘翅目Coleoptera、葉甲科Chrysomelidae、潛甲亞科Anisoderinae、隱爪族Cryptonichini，最早起源于馬來西亞(Maulik, 1921)，我國于2001年在海南省東方市江南苗圃內(nèi)的華盛頓棕櫚Washingtoniafilifera上首次發(fā)現(xiàn)該蟲的蹤跡(孫江華等, 2003)，并已于2013年將其列入全國林業(yè)危險性有害生物名錄(國家林業(yè)局, 2013)。目前，該蟲已入侵擴散至我國福建、海南、廣東、廣西、云南等南方的多個省份，并成功定殖(孫江華等, 2003; Hou and Weng, 2010)。其幼蟲和成蟲主要取食為害加拿利海棗Phoenixcanariensis、銀海棗P.sylvestris、刺葵P.hancea、椰子Cocosnucifera、蒲葵Livistonachinensis、檳榔Arecacatechu、假檳榔Archontophoenixalexandrae等多種棕櫚科植物未完全展開的心葉，使葉片呈現(xiàn)褐色的條斑、皺縮或卷曲，嚴重影響了入侵地的棕櫚產(chǎn)業(yè)和園林景觀，造成顯著經(jīng)濟和觀賞價值損失(Hou and Weng, 2010; 張秩勇, 2010; 張翔, 2015)。

昆蟲表皮碳氫化合物(cuticular hydrocarbons, CHCs)是穩(wěn)定存在于昆蟲上表皮蠟質(zhì)層中的含碳數(shù)一般為20～50不等的長鏈烴類混合物，包括直鏈飽和烴、直鏈不飽和烴、支鏈飽和烴和支鏈不飽和烴(Blomquist and Dillwith, 1985; Lockey, 1988)?，F(xiàn)有研究表明，昆蟲表皮碳氫化合物的組分和含量具有物種特異性，因此它們已被廣泛應用于蜜蜂、螞蟻、白蟻、棉鈴蟲Helicoverpaarmigera、煙青蟲Heliothisassulla等多種昆蟲的分類研究中(高明媛等, 1999; 張紅兵等, 2005; 梁小松等, 2009)。然而表皮碳氫化合物在近緣種、乃至同一物種不同個體之間也可能存在差異(Blomquistetal., 1979)。據(jù)楊錦錦等(2015)報道，黑翅土白蟻Odontotermesformosanus的表皮碳氫化合物具有品級特征，工蟻、兵蟻、幼蟻和生殖蟻的表皮碳氫化合物的種類相同，但含量存在差異。Xue等(2016)還發(fā)現(xiàn)，葉甲科跳甲屬Altica個體表皮碳氫化合物的種類和含量依性別、蟲齡、交配與否、性成熟與否等自身因素而異。此外，昆蟲表皮碳氫化合物的組分和含量也會受外界環(huán)境因子的影響，例如已有報道表明食物因素可以引起桔小實蠅Bactroceradorsalis的種內(nèi)表皮碳氫化合物組分的改變(雷妍圓等, 2017)。

在許多昆蟲中，表皮碳氫化合物還是一類重要的信息化合物，可以充當化學信號線索，參與生物個體之間的親系識別和配偶選擇(Martin and Drijfhout, 2009; Steigeretal., 2015; Laneetal., 2016)。Kirchner和Minkley(2003)研究表明，草白蟻Hodotermesmossambicus可以通過交哺表皮碳氫化合物來區(qū)分同巢幼蟻和異巢幼蟻。這進一步說明表皮碳氫化合物是巢間識別中可以相互傳遞的一類重要信息物質(zhì)。而在蟋蟀雄雄競爭和雌性配偶選擇中的研究表明，昆蟲在配偶選擇過程中，相同環(huán)境下不同個體之間表皮碳氫化合物通常具有不同的表觀遺傳，配偶之間可以利用這種差異評估遺傳相似性(Kortet and Hedrick, 2005; Thomas and Simmons, 2008; Steigeretal., 2015)。因此，雌性可以依賴于自身表皮碳氫化合物作為化學模板去感知潛在配偶的化學模板，然后評估配偶質(zhì)量來決定是否交配，一旦交配則會引起配偶雙方表皮碳氫化合物的變化，這樣就可以避免近親交配或多次交配(Capodeanu-N?gleretal., 2014)。在蟋蟀Teleogryllusoceanics中，雌性個體更傾向于與那些擁有相異表皮碳氫化合物譜的個體進行交配，而且配偶之間的表皮碳氫化合物譜相似性與遺傳相似性呈正相關(guān)(Thomas and Simmons, 2011)，這說明個體的表皮碳氫化合物譜能夠反映它們的遺傳質(zhì)量，從而作為配偶選擇的信號來影響交配雙方的吸引力(Steiger and Stokl, 2014)。

水椰八角鐵甲作為一種入侵害蟲，具有聚集為害和世代重疊等生物學特性(Hou and Weng, 2010)，而昆蟲表皮碳氫化合物能夠提供與日齡、性別和物種分化相關(guān)的重要信息(張紅兵等, 2005; Xueetal., 2016)。然而國內(nèi)外對該蟲表皮碳氫化合物的研究尚未見報道。為此，本研究基于化學生態(tài)學，應用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(gas chromatography-mass spectrometry, GC-MS)技術(shù)，利用整體化學浸提(萃取)法和液體進樣法，對不同日齡和不同性別的水椰八角鐵甲成蟲個體的表皮碳氫化合物進行檢測，在確定表皮碳氫化合物組分的基礎(chǔ)上，分析不同日齡和不同性別間個體表皮碳氫化合物的差異，旨在明確個體因素對該蟲表皮碳氫化合物組分與含量的影響，以期為近緣種的種類識別及該蟲的日齡、性別和性成熟與否的快速鑒定及其檢驗檢疫監(jiān)測提供新的技術(shù)手段和詳實可靠的數(shù)據(jù)支持。同時，本文也為進一步研究昆蟲的配偶選擇機制奠定理論基礎(chǔ)，從而可為開發(fā)以昆蟲表皮碳氫化合物為靶標的新型害蟲抑制劑或行為干擾劑提供新的思路和途徑。

1 材料與方法

1.1 供試昆蟲的采集及飼養(yǎng)

供試水椰八角鐵甲蟲源采自福建省漳州市漳浦縣臺灣農(nóng)民創(chuàng)業(yè)園(24.18°N，117.40°E)，寄主為加拿利海棗。在實驗室內(nèi)，將采集到的野外種群飼養(yǎng)于瓶底墊有濾紙的組織培養(yǎng)瓶(直徑6 cm，高9 cm)中。從福建省福州市城市綠化帶采集加拿利海棗葉片用于飼養(yǎng)水椰八角鐵甲，每3 d更換一次新鮮的葉片。幼蟲化蛹后，挑取單頭蛹置于單個指形管(直徑1.5 cm，高7 cm)內(nèi)，直至羽化為成蟲，并用于后續(xù)試驗。該蟲的飼養(yǎng)條件為溫度25±1℃，RH 50%±10%，光暗周期L ∶D=12 ∶12。所有試驗均在可精確控溫控濕的人工氣候箱中進行。

1.2 試驗試劑和儀器

主要儀器和耗材：7890A-5975B氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國Agilent公司)；N2低溫吹填蒸發(fā)濃縮裝置(長沙自動化儀表廠)；石英毛細管色譜柱HP-5MS(0.25 mm×30 m×0.25 μm)(美國Agilent公司)；2 mL棕色色譜進樣瓶(美國Agilent公司)；5 mL一次性塑料醫(yī)用注射器(康友牌)；0.22 μL微孔濾膜(PALL)等。

主要試劑：99.8%色譜純正已烷(Aladdin)；C7-C40正構(gòu)烷烴混合標樣(Sigma-Aldrich)；C18正構(gòu)烷烴標樣(Dr. Ehrenstorfer)等。

1.3 水椰八角鐵甲成蟲表皮浸提物樣品的制備

分別選取5頭羽化1 d、5 d、10 d和15 d的水椰八角鐵甲雌成蟲或雄成蟲，先用液氮迅速冷凍2 min致死，然后用超純水清洗3遍，再用濾紙吸干水分。其中，15日齡為該蟲的性成熟階段(張翔, 2015)。將處理過的5頭試蟲作為一個樣品放入2 mL色譜進樣瓶內(nèi)，加入1 mL色譜純正己烷浸泡10 min。將提取液轉(zhuǎn)移至另一個2 mL進樣瓶中，再用套上0.22 μL微孔濾膜的5 mL一次性塑料醫(yī)用注射器過濾至第3個2 mL進樣瓶中。最后將含有表皮浸提物的2 mL進樣瓶置于通風櫥內(nèi)，用純N2低溫蒸發(fā)2 min，待正己烷蒸發(fā)完全后再加入200 μL含有正十八烷(100 ppm)內(nèi)參的正己烷，定量后清洗瓶壁，置于-20℃中保存?zhèn)溆谩６筮M行氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測，以定性鑒定和定量分析水椰八角鐵甲成蟲表皮碳氫化合物的組成成分及其含量。每種處理進行5次生物學重復。

1.4 儀器分析條件

GC-MS升溫條件如下：起始溫度50℃，保持2 min，然后以23℃/min的速率升至280℃，再以2 ℃/min的速率升至310℃，保持10 min，整個程序共37 min。以高純氦氣作為載氣，流速為1 mL/min，柱壓為7.652 psi。電子轟擊離子源(EI)的電子能量70 eV，離子源溫度230℃，四級桿溫度為150℃。進樣口溫度290℃，采取不分流模式。質(zhì)譜掃描范圍為m/z 40～650。GC與MS之間連接溫度為300℃，溶劑延遲2 min。

1.5 數(shù)據(jù)分析

1.5.1表皮碳氫化合物的定性分析

首先通過氣相色譜的分離，得到水椰八角鐵甲成蟲表皮碳氫化合物的總色譜圖和各分離組分的出峰保留時間，然后按照Kovts(1965)的方法計算各組分的科瓦茨保留指數(shù)(Kovts Index, KI)。將獲得的質(zhì)譜圖離子碎片和各組分的保留時間與C7-C40標準品的保留時間進行比對，在NIST11數(shù)據(jù)庫中檢索，初步確認表皮碳氫化合物的結(jié)構(gòu)。同時也將保留指數(shù)、特征離子峰和荷質(zhì)比等參數(shù)信息與已發(fā)表文獻所提供的表皮碳氫化合物進行比對(Gohetal., 1993; 雷妍圓等, 2017)，從而確定水椰八角鐵甲表皮碳氫化合物的種類。

1.5.2表皮碳氫化合物的定量分析

根據(jù)水椰八角鐵甲成蟲表皮碳氫化合物的總色譜圖，分別對每一種表皮碳氫化合物的出峰面積進行積分，獲得相應的各組分峰的面積(峰面積或峰高與組分的含量成正比)，再除以同條件下正十八烷內(nèi)參的積分面積來得到相對面積比率。將所有相對面積比率乘以內(nèi)參正十八烷的含量即得每種碳氫化合物的絕對含量，以此作為試蟲表皮碳氫化合物混合物中各組分的定量指標。其中，正十八烷絕對含量減去內(nèi)參含量等于水椰八角鐵甲自身的含量。

1.5.3不同日齡和不同性別的水椰八角鐵甲成蟲表皮碳氫化合物的組成比較

所有試驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析利用SPSS 21.0軟件(SPSS Inc., Chicago, IL, USA)進行。其中，相同性別不同日齡的水椰八角鐵甲成蟲表皮碳氫化合物絕對含量間的差異顯著性檢驗采用單因素方差分析(One-way ANOVA)和Tukey HSD多重比較的方法，而對相同日齡的水椰八角鐵甲雌成蟲和雄成蟲之間表皮碳氫化合物絕對含量的差異性比較則采用獨立樣本t檢驗(independent-samplettest)進行。顯著性水平α均為0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 水椰八角鐵甲成蟲表皮碳氫化合物的種類

不同日齡和不同性別的水椰八角鐵甲成蟲的表皮碳氫化合物在組分上不存在差異，皆含有相同種類的正構(gòu)烷烴、單甲基烷烴、多甲基烷烴、正構(gòu)烯烴、單甲基烯烴和環(huán)烷烴等共6大類21種碳氫化合物，它們的碳鏈長度從18到30不等(表1)。其中，正構(gòu)烷烴的種類在所有碳氫化合物中的占比最大，為52.38%。其次是正構(gòu)烯烴和環(huán)烷烴，皆占所有碳氫化合物種類的14.29%。種類最少的為單甲基烷烴(9.52%)、多甲基烷烴(4.76%)和單甲基烯烴(4.76%)等支鏈碳氫化合物。這一結(jié)果表明，水椰八角鐵甲成蟲的表皮碳氫化合物以正構(gòu)烷烴等含碳數(shù)為20～30不等的直鏈飽和烴為主。

表1 水椰八角鐵甲成蟲表皮碳氫化合物的組成成分Table 1 Components of cuticular hydrocarbons in Octodonta nipae adults

續(xù)表1 Continued table 1

2.2 不同日齡的水椰八角鐵甲成蟲表皮碳氫化合物含量的動態(tài)變化

在21種水椰八角鐵甲成蟲表皮碳氫化合物中，不同日齡的雄蟲只有5種化合物的含量發(fā)生了顯著變化，分別是正二十四烷(F3,16=5.573，P<0.05)、正二十六烷(F3,16=13.336，P<0.01)、2-甲基十九烷(F3,16=6.902，P<0.05)、10-甲基二十烷(F3,16=6.245，P<0.05)和1-二十烯(F3,16=12.019，P<0.01)(圖1)。其中，正二十四烷(最高156.89 ng/5頭)、正二十六烷(最高878.69 ng/5頭)和1-二十烯(最高832.19 ng/5頭)的平均絕對含量于10日齡前皆不存在顯著差異，10日齡后開始顯著上升，在15日齡性成熟時達到最大，此時相對含量分別為1.15%、6.42%和6.08%。而2-甲基十九烷和10-甲基二十烷在不同日齡間的動態(tài)變化規(guī)律一致，它們的含量在剛羽化時(1日齡)最高，平均絕對含量分別為2 189.64 ng/5頭和2 668.15 ng/5頭，相對含量分別為15.35%和18.70%，隨后開始顯著下降，5日齡、10日齡和15日齡之間沒有顯著差異。

圖1 水椰八角鐵甲雄性成蟲存在差異的表皮碳氫化合物的絕對含量在不同日齡之間的變化Fig.1 Changes of the absolute content of cuticular hydrocarbons with significant difference in different ages of Octodonta nipae male adults注：圖中數(shù)據(jù)為平均值±標準誤。不同的小寫字母表示相同的表皮碳氫化合物在不同日齡的成蟲中的絕對含量存在顯著差異(P<0.05)。下圖同。Note: Data are shown as mean±standard error (SE). Different small letters indicate that there are significant differences to absolute contents among adults of different ages with the same cuticular hydrocarbons. The same below.

然而，不同日齡的水椰八角鐵甲雌性成蟲之間含量發(fā)生顯著變化的表皮碳氫化合物共有12種，分別是正二十烷(F3,16=19.149，P<0.001)、正二十一烷(F3,16=5.391，P<0.05)、正二十三烷(F3,16=6.222，P<0.05)、正二十四烷(F3,16=7.274，P<0.05)、正二十六烷(F3,16=7.274，P<0.05)、正二十八烷(F3,16=6.758，P<0.05)、正三十烷(F3,16=4.799，P<0.05)、2-甲基十九烷(F3,16=5.391，P<0.05)、2,6,10,15-四甲基二十一烷(F3,16=12.350，P<0.01)、1-二十烯(F3,16=90.392，P<0.001)、反式-10-二十一烯(F3,16=8.388，P<0.01)和5-甲基-5-順式-二十二烯(F3,16=4.769，P<0.05)(圖2)。其中，在剛羽化(1 d)至性成熟(15 d)期間，正二十烷、正二十一烷、正二十三烷、正二十六烷、2-甲基十九烷、2,6,10,15-四甲基二十一烷、1-二十烯和反式-10-二十一烯的含量的動態(tài)變化趨勢基本相似，雖然這些化合物的含量在羽化5 d、10 d和15 d的雌成蟲之間不存在顯著差異，但是皆顯著低于1日齡時的含量，即它們的平均絕對含量和相對含量在剛羽化時最高，分別是854.09 ng/5頭(6.15%)、1 282.67 ng/5頭(9.24%)、824.91 ng/5頭(5.94%)、831.68 ng/5頭(5.99%)、1 455.24 ng/5頭(10.48%)、1 560.58 ng/5頭(11.24%)、846.09 ng/5頭(6.09%)和888.06 ng/5頭(6.40%)。 與1日齡(137.15 ng/5頭)相比，5日齡(21.69 ng/5頭)和15日齡(13.64 ng/5頭) 表皮正二十四烷的平均絕對含量皆顯著降低。而正二十八烷的含量在10日齡時才開始顯著低于1日齡時的含量，平均絕對含量分別是75.75 ng/5頭和456.17 ng/5頭，相對含量分別為2.11%和3.29%。此外，正三十烷和5-甲基-5-順式-二十二烯的絕對含量只有在羽化1 d(分別是100.83 ng/5頭和185.60 ng/5頭)和羽化10 d(分別是21.91 ng/5頭和26.58 ng/5頭)之間存在差異。

圖2 水椰八角鐵甲雌性成蟲存在差異的表皮碳氫化合物的絕對含量在不同日齡之間的變化Fig.2 Changes of the absolute content of cuticular hydrocarbons with significant difference in different ages of Octodonta nipae female adults

2.3 不同性別的水椰八角鐵甲成蟲表皮碳氫化合物含量的差異

雖然性成熟的水椰八角鐵甲雌雄成蟲之間表皮正二十二烷(t8=-2.259，P>0.05)、正二十三烷(t8=-2.649，P>0.05)、正二十五烷(t8=-1.041，P>0.05)、正二十七烷(t8=-0.411，P>0.05)、正二十八烷(t8=-0.758，P>0.05)、正二十九烷(t8=-1.218，P>0.05)、正三十烷(t8=-2.007，P>0.05)、2,6,10,15-四甲基二十一烷(t8=-1.596，P>0.05)、反式-10-二十一烯(t8=-0.847，P>0.05)、5-甲基-5-順式-二十二烯(t8=-1.911，P>0.05)、環(huán)二十四烷(t8=-1.105，P>0.05)、環(huán)十八烷(t8=-1.034，P>0.05)和環(huán)三十烷(t8=-1.920，P>0.05)的含量不存在顯著差異，但是正二十烷(t8=-3.608，P<0.05)、正二十一烷(t8=-4.996，P<0.05)、正二十四烷(t8=-6.418，P<0.01)、正二十六烷(t8=-4.113，P<0.05)、2-甲基十九烷(t8=-3.130，P<0.05)、10-甲基二十烷(t8=-2.660，P<0.05)、1-二十烯(t8=-8.152，P<0.01)和1-二十二烯(t8=-4.745，P<0.05)等8種化合物的含量皆差異顯著(圖3)。與性成熟的雌蟲相比，性成熟的雄蟲表皮正二十烷、正二十一烷、正二十四烷、正二十六烷、2-甲基十九烷、10-甲基二十烷、1-二十烯和1-二十二烯的平均絕對含量分別顯著升高1.31、2.62、10.50、2.97、1.35、1.35、5.66和4.32倍。這些結(jié)果表明，水椰八角鐵甲成蟲表皮碳氫化合物的含量具有性別二態(tài)性。

圖3 性成熟的水椰八角鐵甲雌雄成蟲的表皮碳氫化合物的絕對含量Fig.3 Absolute content of cuticular hydrocarbons in mature male and female of Octodonta nipae adults注：圖中數(shù)據(jù)為平均值±標準誤。星號表示雌雄成蟲之間差異顯著(*，P<0.05；**，P<0.01)。Note: Data are shown as mean±standard error (SE). Asterisks indicate significant difference between male and female (*, P<0.05; **, P<0.01).

3 結(jié)論與討論

據(jù)前人報道，不僅黑腹果蠅Drosophilamelanogaster表皮7-二十三烯等直鏈烯烴(Scott, 1986)、刺舌蠅Glossinamorsitans表皮19,23-二甲基-1-三十三烯等甲基烯烴(Carlson and Schlein, 1991)、隱翅蟲Aleocharacurtula表皮15,19-二甲基三十七烷等甲基烷烴及順式-9-二十一烯等直鏈烯烴(Peschke and Metzler, 1987)和意大利蜜蜂Apismellifera表皮正十六烷等直鏈烷烴(Breed and Stiller, 1992)等多種碳氫化合物的含量均在雌性和雄性之間存在顯著差異，而且昆蟲也可以通過調(diào)控這些特異性表皮碳氫化合物的合成影響個體的交配行為，從而有利于個體的種群識別和配偶選擇(Peschke, 1987)。而本文研究結(jié)果表明，雖然日齡、性別和性成熟與否等昆蟲個體因素對水椰八角鐵甲成蟲表皮碳氫化合物的種類沒有影響，但是會影響正二十烷、正二十一烷、正二十三烷、正二十四烷、正二十六烷、正二十八烷、正三十烷、2-甲基十九烷、10-甲基二十烷、2,6,10,15-四甲基二十一烷、1-二十烯、反式-10-二十一烯、1-二十二烯和5-甲基-5-順式-二十二烯等多種化合物的含量。因此，不同日齡的水椰八角鐵甲成蟲表皮碳氫化合物的動態(tài)變化及性別差異可以為該蟲個體的種內(nèi)識別和配偶選擇提供化學信號和線索。然而這些絕對含量和相對含量發(fā)生顯著改變的表皮碳氫化合物的種類是否是誘導水椰八角鐵甲性成熟個體產(chǎn)生性選擇行為的關(guān)鍵因子目前還不清楚，有待進一步證實。由于日齡和性別等個體因素引起該蟲的表皮碳氫化合物的差異主要體現(xiàn)在物質(zhì)的含量上，而種類穩(wěn)定，說明個體因素不影響利用表皮碳氫化合物進行近緣種的識別，可以提取種內(nèi)共有物質(zhì)作為種的特征峰，同時它們可以作為標記性化合物，通過建立不同個體條件下水椰八角鐵甲的指紋圖譜，為在檢驗檢疫監(jiān)測與防控工作中快速鑒定該蟲的日齡、性別及其性成熟狀態(tài)提供數(shù)據(jù)支持，從而明確該蟲的發(fā)生情況。

昆蟲剛羽化時為成蟲表皮碳氫化合物的合成初期，此時這些化合物的碳鏈長度偏短且以結(jié)構(gòu)簡單的烷烴為主，而羽化后24 h才進入主要合成期(Lockey, 1988)。隨著昆蟲的生長發(fā)育，表皮碳氫化合物會經(jīng)過一系列脫羧反應從而延長碳鏈，并且在去飽和酶的作用下迅速增加不飽和烴類的含量(Flaven-Pouchonetal., 2016)。由本研究可知，水椰八角鐵甲雄性成蟲各類表皮碳氫化合物的含量基本與這一合成規(guī)律相吻合，但是雌性成蟲表皮碳氫化合物在不同日齡間的動態(tài)變化似乎比雄性更為復雜，據(jù)此猜測雌性成蟲對于表皮碳氫化合物具有更加精細的合成調(diào)控機制，這可能在雌性的配偶選擇或生殖過程中發(fā)揮重要作用。同時，Weddle等(2012)發(fā)現(xiàn)，短翅灶蟋Gryllodessigillatus表皮碳氫化合物的種類和含量存在明顯的性別二態(tài)性，這與本文在水椰八角鐵甲上的研究結(jié)果相一致。此外，環(huán)境因素和遺傳因素都可能影響到雌雄成蟲表皮碳氫化合物的種類和含量(Weddleetal., 2012)。所以，水椰八角鐵甲雌雄成蟲表皮碳氫化合物含量及其差異是否是環(huán)境因素和遺傳因素共同作用的結(jié)果有待進一步確定，它們對表皮碳氫化合物合成的影響權(quán)重也有待進一步研究。然而，雌雄兩性表皮碳氫化合物的表觀遺傳差異所引起的行為偏好可以作為未來研究的熱點，這可以為水椰八角鐵甲的交配策略提供科學依據(jù)。