黃茂 蔡莎莎 李小波 張?zhí)硗?/p>

[摘要] 目的 探討哮喘患者病程嚴(yán)重程度與嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、血漿硫化氫（H2S）的相關(guān)性。 方法 選取我院2017年4月～2019年3月收治的急性發(fā)作期哮喘患者70例作為研究組，根據(jù)疾病診斷指南進(jìn)行分度，輕度、中度和重度患者分別18、23、29例，選取同期進(jìn)行體檢的健康人70例作為對照組，所有受試對象均進(jìn)行誘導(dǎo)痰計數(shù)，計算嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞占比，并抽取血液測定血漿H2S水平，比較對照組和研究組以及研究組不同嚴(yán)重程度患者的誘導(dǎo)痰嗜酸性粒細(xì)胞和中性粒細(xì)胞占比及血漿H2S水平，對三個指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析。 結(jié)果 研究組患者誘導(dǎo)痰嗜酸性粒細(xì)胞和中性粒細(xì)胞占比顯著高于對照組，血漿H2S水平顯著低于對照組;隨著疾病程度加重，哮喘患者誘導(dǎo)痰嗜酸性粒細(xì)胞和中性粒細(xì)胞占比逐漸升高，而血漿H2S水平逐漸降低;哮喘患者血漿H2S與誘導(dǎo)痰嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞占比之間呈負(fù)相關(guān);血漿H2S水平和疾病嚴(yán)重程度呈負(fù)相關(guān)，誘導(dǎo)痰嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞占比和疾病嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。以上差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。 結(jié)論 哮喘患者誘導(dǎo)痰嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞占比升高，血漿H2S水平降低，隨著病程的逐漸加重，哮喘患者嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞占比會逐漸升高，血漿H2S水平將逐漸降低。

[關(guān)鍵詞] 哮喘;嗜酸性粒細(xì)胞;中性粒細(xì)胞;血漿硫化氫

[中圖分類號] R562? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2020）19-0010-04

Analysis on the correlation between severity of asthma disease course and eosinophils， neutrophils and plasma hydrogen sulfide in the patients with asthma

HUANG Mao1? ?CAI Shasha2? ?LI Xiaobo1? ?ZHANG Tianwei1

1.Department of Respiratory and Critical Care Medicine， Taizhou First People's Hospital in Zhejiang Province， Taizhou 318020， China; 2.Department of Clinical Laboratory， Taizhou First People's Hospital in Zhejiang Province， Taizhou 318020， China

[Abstract] Objective To investigate the correlation between the severity of asthma disease course and eosinophils， neutrophils and plasma hydrogen sulfide（H2S） in the patients with asthma. Methods 70 patients with acute attack of asthma who were admitted to our hospital from April 2017 to March 2019 were selected as study group. According to the disease diagnosis guide， the patients were divided into mild， moderate， and severe conditions， with 18， 23， and 29 patients， respectively. 70 healthy people who were selected for physical examination at the same time were selected as the control group. All subjects were given induced sputum counts to calculate the ratios of eosinophils and neutrophils， and the blood was collected to measure plasma H2S levels. The ratios of induced sputum eosinophils and neutrophils and plasma H2S levels were compared between the control group and between patients with different disease severity in the study group. Correlation analysis was performed on the three indices. Results The ratio of eosinophils and neutrophils induced by sputum in the study group was significantly higher than that in the control group， and the plasma H2S level was significantly lower than that in the control group; as the degree of disease worsened， the ratio of eosinophils and neutrophils induced by sputum in the patients with asthma was gradually increased， while the level of plasma H2S was gradually decreased;there was a negative correlation between plasma H2S level and the ratio of eosinophils and neutrophils induced by sputum in the patients with asthma; there was a negative correlation between plasma H2S level and disease severity. There was a positive correlation between the ratio of eosinophils and neutrophils induced by sputum and disease severity（P<0.05 for all）. Conclusion The ratio of eosinophils and neutrophils induced by sputum in the patients with asthma is increased， and plasma H2S level is decreased. As the course of disease worsens， the ratio of eosinophils and neutrophils in the patients with asthma will gradually increase， and plasma H2S level will gradually decrease.

[Key words] Asthma; Eosinophils; Neutrophils; Plasma H2S

支氣管哮喘，即哮喘，是臨床中常見的慢性氣道炎癥疾病，有多種細(xì)胞參與，包括嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、肥大細(xì)胞等，其中，嗜酸性粒細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的增加會導(dǎo)致患者氣道微血管通透性增加，進(jìn)一步刺激上皮細(xì)胞釋放炎性因子，加重炎癥反應(yīng)，同時會使得炎性細(xì)胞的募集進(jìn)一步增加[1-3]。硫化氫（H2S）是體內(nèi)含硫氨基酸代謝產(chǎn)生的氣體產(chǎn)物，近年來發(fā)現(xiàn)，其作為氣體信號分子，具有明顯的抑制炎癥作用，同時研究發(fā)現(xiàn)，通過外源性的H2S刺激能夠減輕哮喘患者的炎癥反應(yīng)[4-5]。目前，關(guān)于血漿H2S和哮喘患者的各項炎癥指標(biāo)的研究較多，但并未有明確研究對哮喘患者病程嚴(yán)重程度與炎性細(xì)胞、H2S之間的相關(guān)性進(jìn)行探究，本研究旨在通過分析不同病程的哮喘患者以及正常人的三項指標(biāo)，對哮喘患者病程嚴(yán)重程度與嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、H2S之間的相關(guān)性進(jìn)行分析，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2017年4月～2019年3月收治的急性發(fā)作期哮喘患者70例作為研究組，根據(jù)《支氣管哮喘防治指南（2016年版）》[6]中的分度標(biāo)準(zhǔn)，將研究組患者按照急性發(fā)作期病情不同程度分為輕度、中度和重度，分別18、23、29例。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）患者符合《支氣管哮喘防治指南（2016年版）》關(guān)于急性發(fā)作期的診斷標(biāo)準(zhǔn)，且根據(jù)患者氣短情況、精神狀態(tài)、呼吸頻率等癥狀體征，將患者進(jìn)行分度;（2）臨床資料完整的患者;（3）簽署研究知情同意書的患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）心、腎、肝、血液等系統(tǒng)存在嚴(yán)重疾病的患者;（2）合并存在呼吸道感染或其他免疫系統(tǒng)疾病的患者;（3）隨訪困難或失訪的患者。同時，選取于我院進(jìn)行體檢的健康人70例作為對照組，簽署研究知情同意書。對照組和研究組以及研究組不同分度患者之間的一般臨床資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，具有可比性。見表1、2。

1.2 方法

1.2.1 誘導(dǎo)痰細(xì)胞計數(shù)? 以0.9%氯化鈉7 mL+10%氯化鈉3 mL配置高滲鹽水，使受試對象霧化吸入，咳出誘導(dǎo)痰，每組標(biāo)本均涂片8張，自然干燥后使用甲醇固定，每張涂片經(jīng)1 mL Giemsa稀釋染液染色，后沖洗，自然干燥后在高倍鏡下進(jìn)行計數(shù)，每張涂片至少計數(shù)4個視野中400個有核細(xì)胞，并計算其中嗜酸性粒細(xì)胞和中性粒細(xì)胞占比。

1.2.2 血漿H2S水平檢測? 在入組后抽取受試對象晨起空腹靜脈血4.0 mL，使用肝素抗凝，以4000 r/min離心10 min，存于-20℃冰箱保存，后進(jìn)行統(tǒng)一的檢測。采用不同濃度的硫氫化鈉繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，將反應(yīng)液SAPBⅡ與標(biāo)準(zhǔn)血液樣本以1：1的比例充分混勻，使用紫外可見分光光度法測定血漿H2S水平。

1.3 觀察指標(biāo)

（1）比較研究組和對照組之間誘導(dǎo)痰中嗜酸性粒細(xì)胞和中性粒細(xì)胞占比及血漿H2S水平。（2）比較研究組中不同程度急性發(fā)作期患者之間誘導(dǎo)痰中嗜酸性粒細(xì)胞和中性粒細(xì)胞占比及血漿H2S水平。（3）血漿H2S與嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞占比之間的相關(guān)性分析，使用Pearson積矩相關(guān)分析。（4）對影響患者疾病嚴(yán)重程度的因素進(jìn)行相關(guān)性分析，使用Pearson積矩相關(guān)分析。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS25.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料以（x±s）表示，兩組計量資料比較采用獨立樣本t檢驗，多組計量資料比較采用單因素方差分析。使用Pearson積矩相關(guān)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 研究組和對照組之間誘導(dǎo)痰嗜酸性粒細(xì)胞和中性粒細(xì)胞占比及血漿H2S水平比較

研究組患者誘導(dǎo)痰嗜酸性粒細(xì)胞和中性粒細(xì)胞占比顯著高于對照組，血漿H2S水平顯著低于對照組（P<0.05）。見表3。

2.2 研究組中不同程度急性發(fā)作期患者之間誘導(dǎo)痰嗜酸性粒細(xì)胞和中性粒細(xì)胞占比及血漿H2S水平比較

隨著疾病程度加重，哮喘患者誘導(dǎo)痰嗜酸性粒細(xì)胞和中性粒細(xì)胞占比逐漸升高，而血漿H2S水平逐漸降低（P<0.05）。見表4。

2.3 影響患者疾病嚴(yán)重程度因素的相關(guān)性分析

血漿H2S水平和疾病嚴(yán)重程度呈負(fù)相關(guān)，誘導(dǎo)痰嗜酸性粒細(xì)胞占比、中性粒細(xì)胞占比和疾病嚴(yán)重程度呈正相關(guān)（P<0.01）。見表5。

2.4 血漿H2S與嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞占比之間的相關(guān)性分析

哮喘患者血漿H2S與誘導(dǎo)痰嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞占比之間呈負(fù)相關(guān)（P<0.05）。見表6。

3 討論

哮喘是一種多種細(xì)胞組分參與的氣道慢性疾病，其發(fā)病機(jī)制尚不清楚，臨床中多通過肺功能檢查等常規(guī)手段監(jiān)測疾病進(jìn)展情況，但此類指標(biāo)對氣道炎性反應(yīng)水平反映較差，無法及時對病情作出評估[7-8]。H2S是一類內(nèi)源性的氣體信號分子，在肺組織內(nèi)表達(dá)較多，能夠舒張氣管和血管平滑肌，參與多種病理生理表現(xiàn)[9-10]。目前，關(guān)于血漿H2S和哮喘患者的各項炎癥指標(biāo)相關(guān)性的研究較多，但并未有明確研究對哮喘患者病程嚴(yán)重程度與炎性細(xì)胞、H2S之間的相關(guān)性進(jìn)行探究，本研究旨在通過分析不同病程的哮喘患者以及正常人的三項指標(biāo)，對哮喘患者病程嚴(yán)重程度與嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、H2S之間的相關(guān)性進(jìn)行分析。

研究結(jié)果顯示，研究組患者誘導(dǎo)痰嗜酸性粒細(xì)胞和中性粒細(xì)胞占比顯著高于對照組，血漿H2S水平顯著低于對照組（P<0.05），且隨著疾病程度加重，哮喘患者誘導(dǎo)痰嗜酸性粒細(xì)胞和中性粒細(xì)胞占比逐漸升高，而血漿H2S水平逐漸降低（P<0.05）。誘導(dǎo)痰嗜酸性粒細(xì)胞和中性粒細(xì)胞占比及血漿H2S水平的變化趨勢和既往研究一致[11-12]。研究指出，H2S在炎癥反應(yīng)中的作用是較為復(fù)雜的，作為炎癥抑制因子，H2S能夠抑制中性白細(xì)胞的聚集，減輕由于炎癥介質(zhì)導(dǎo)致的肺水腫和肺毛細(xì)血管通透性增高，具有明顯的抑制炎癥反應(yīng)的作用，同時通過較少丙二醛的生成，H2S具有一定的抗氧化作用，減輕機(jī)體氧化應(yīng)激反應(yīng)的發(fā)生[13-14]。本次研究中對H2S水平和誘導(dǎo)痰嗜酸性粒細(xì)胞和中性粒細(xì)胞占比進(jìn)行了相關(guān)性分析，結(jié)果顯示，哮喘患者血漿H2S與誘導(dǎo)痰嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞占比之間呈負(fù)相關(guān)（r=-0.614、-0.873，P<0.05），與既往的研究結(jié)果一致[15-18]，同時也說明H2S在哮喘的發(fā)生發(fā)展中存在明顯的抗炎作用。同時結(jié)果顯示，血漿H2S水平和疾病嚴(yán)重程度呈負(fù)相關(guān)，誘導(dǎo)痰嗜酸性粒細(xì)胞占比、中性粒細(xì)胞占比和疾病嚴(yán)重程度呈正相關(guān)（P<0.05）。隨著哮喘的逐漸加重，中性粒細(xì)胞的募集明顯增加，這可能是由于H2S水平降低等多種因素導(dǎo)致的，進(jìn)而使得各類促炎因子分泌不斷增加，加重氣道的炎癥反應(yīng)，同時哮喘發(fā)作加重時，氣道內(nèi)的胱硫醚-γ-裂解酶活性會明顯下降，進(jìn)而導(dǎo)致H2S水平降低，發(fā)生上述反應(yīng)[19-20]。因此，哮喘患者病程嚴(yán)重程度不僅受到H2S水平的影響，同時隨著病程的加重，H2S水平也會隨之發(fā)生改變，而嗜酸性粒細(xì)胞和中性粒細(xì)胞作為哮喘發(fā)作的標(biāo)志性炎性細(xì)胞，會隨著病情的加重，占比逐漸升高，這可能和氣道重塑以及高反應(yīng)性相關(guān)，同時H2S也對細(xì)胞活性有著重要的影響。

綜上所述，和正常人相比，哮喘患者誘導(dǎo)痰嗜酸性粒細(xì)胞占比、中性粒細(xì)胞占比升高，血漿H2S水平將降低，同時隨著疾病病程的逐漸加重，哮喘患者的嗜酸性粒細(xì)胞占比、中性粒細(xì)胞占比會逐漸升高，血漿H2S水平將逐漸降低，且三個指標(biāo)間存在相關(guān)性。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 雒志明，高賞，任魁，等.支氣管哮喘控制測試評分與外周血嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)的相關(guān)性研究[J].中國病案，2018， 19（1）：91-94.

[2] 黃海英，何慶娟，孫寶蘭，等.支氣管哮喘患兒血漿H2S水平變化及意義[J].山東醫(yī)藥，2017，57（37）：27-30.

[3] CH L，HD W，JJ L，et al. Functional phenotype and its correlation with therapeutic response and inflammatory type of bronchoalveolar lavage fluid in feline lower airway disease[J].Journal of Veterinary Internal Medicine，2015，29（1）：88-96.

[4] 唐丹.支氣管哮喘患兒血漿內(nèi)源性硫化氫水平與小氣道功能相關(guān)性探討[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2016，43（23）：4405-4408.

[5] 楊宏寬，張艷，張佳穎，等.哮喘-慢性阻塞性肺疾病重疊患者中痰髓過氧化物酶、嗜酸粒細(xì)胞陽離子蛋白與臨床特征的相關(guān)性[J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2018，38（10）：71-77.

[6] 中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)分會哮喘學(xué)組.支氣管哮喘防治指南（2016年版）[J].中華結(jié)核和呼吸雜志，2016，39（9）：675-697.

[7] Chowdhury CS，Giaglis S，Walker UA，et al. Enhanced neutrophil extracellular trap generation in rheumatoid arthritis：Analysis of underlying signal transduction pathways and potential diagnostic utility[J].Arthritis Research & Therapy，2014，16（3）：R122.

[8] 梁聯(lián)哨，鄧靜敏，鄒小英，等.中性粒細(xì)胞性慢性持續(xù)期哮喘患者治療前后外周血和誘導(dǎo)痰中嗜酸性粒細(xì)胞陽離子蛋白水平及其臨床意義[J].廣西醫(yī)學(xué)，2016，38（3）：324-327.

[9] 曾山，熊彬.激素抵抗型哮喘與炎性因子相關(guān)性的研究進(jìn)展[J].廣東醫(yī)學(xué)，2017，38（3）：478-480.

[10] 陳建輝，徐莉，鄭玉龍，等.不同體型肥胖與哮喘患者肺功能、氣管和全身炎癥及病情控制的相關(guān)性[J].中華臨床營養(yǎng)雜志，2014，22（4）：209-212.

[11] 孫俊生，黃震，劉文鳳.慢性持續(xù)期哮喘患者誘導(dǎo)痰嗜酸性粒細(xì)胞比例變化及與肺功能的關(guān)系[J].寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2015，37（5）：588-590.

[12] Heinisch IVWM，Daigle I，Kn？觟pfli B，et al.CD137 activation abrogates granulocyte-macrophage colony-stimulating factor-mediated anti-apoptosis in neutrophils[J].European Journal of Immunology，2015，30（12）：3441-3446.

[13] 程澤君，梁玉清.孟魯司特鈉對哮喘急性發(fā)作期患者免疫調(diào)節(jié)功能及炎癥因子的影響探究[J].山西醫(yī)藥雜志，2015，44（22）：2646-2648.

[14] Yugandhar P，Rao KM，Sengupta K.A novel herbal composition containing extracts of Boswellia serrata gum resin and aegle marmelos fruit alleviates symptoms of asthma in a placebo controlled double-blind clinical study[J].Phytotherapy Research，2018，32（1）：140-150.

[15] 劉元珍，朱正華，劉遠(yuǎn)勝，等.鼻分泌物嗜酸性粒細(xì)胞增多與心電圖改變在心臟早期病變中的意義[J].中國現(xiàn)代醫(yī)生，2017，55（33）：30-32.

[16] 周四芳，丁英平，吳新龍，等.誘導(dǎo)痰中性粒細(xì)胞S100A8/A9在支氣管哮喘患兒中的表達(dá)及其臨床意義[J].天津醫(yī)藥，2017，45（3）：267-270.

[17] 陳曉麗，鄧靜敏.中性粒細(xì)胞哮喘的研究進(jìn)展[J].重慶醫(yī)學(xué)，2016，45（17）：2411-2413.

[18] 張星慧，常曉悅.中性粒細(xì)胞性哮喘與其相關(guān)細(xì)胞因子[J].國際呼吸雜志，2017，37（23）：1815-1818.

[19] 肖緒夏，柯斌，鄭漢友.沙丁胺醇聯(lián)合布地奈德治療小兒支氣管哮喘及對外周血嗜酸性粒細(xì)胞的影響[J].中國婦幼保健，2018，33（1）：115-117.

[20] 戚利那，斯明強(qiáng).順爾寧聯(lián)合糖皮質(zhì)激素吸入在治療兒童哮喘中的療效比較[J].中國婦幼健康研究，2017，28（2）：205-207.

（收稿日期：2020-05-27）