王雪妮 林蔚 王晶晶 李菁 范正陽(yáng) 葉曉潔 何碧珠

摘要?以鐵皮石斛原球莖為供試材料，通過(guò)誘導(dǎo)原球莖增殖、分化得到培養(yǎng)苗，采用單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)探究光照因子（光照時(shí)間、光質(zhì)及光照強(qiáng)度）對(duì)鐵皮石斛培養(yǎng)苗再生體系建立、生長(zhǎng)情況的影響。結(jié)果表明，當(dāng)培養(yǎng)條件一定時(shí)，光照時(shí)間為10 h/d鐵皮石斛培養(yǎng)苗的生長(zhǎng)情況最好;紅藍(lán)光的光質(zhì)比為1∶1是鐵皮石斛培養(yǎng)苗生長(zhǎng)健壯的光質(zhì)，光照強(qiáng)度2 500 lx為鐵皮石斛培養(yǎng)苗生長(zhǎng)適宜強(qiáng)度。

關(guān)鍵詞?鐵皮石斛;光照時(shí)間;光質(zhì);光照強(qiáng)度

中圖分類(lèi)號(hào)?S123文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼?A文章編號(hào)?0517-6611（2020）17-0049-04

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2020.17.015

開(kāi)放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

Effects of Light Treatment on the Growth of Dendrobium officinale

WANG Xueni1， LIN Wei2，WANG Jingjing1 et al

（1.College of Horticulture， Fujian Agriculture and Forestry University， Fuzhou，F(xiàn)ujian 350002;2.Forestry College， Fujian Agriculture and Forestry University， Fuzhou， Fujian 350002）

Abstract?Using the protocorm of Dendrobium officinale as the test material， the culture seedlings were obtained by inducing the proliferation and differentiation of the protocorm， and the effects of light factors on the establishment and growth of the regeneration system of Dendrobium officinale culture seedlings were investigated by single factor experiment design. The results showed that 10 h/d was the optimum illumination time and that light quality that composed by red light and blue light whose proportion was 1∶1 was the optimum light quality and that 2 500 lx was the optimum illumination intensity.

Key words?Dendrobium officinale;Illumination time;Light quality;Illumination intensity

鐵皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo）為蘭科（Orchidaceae）石斛屬（Dendrobium）多年生附生型草本植物，是我國(guó)特有的一種名貴藥材[1]，具生津益胃、滋陰清熱、潤(rùn)肺止咳等功效[2]，以及抗衰老、抗腫瘤、提高人體免疫力的作用[3]。鐵皮石斛多分布于海拔近千米山地的半陰濕巖石上，對(duì)生長(zhǎng)環(huán)境敏感，因其種子小、無(wú)胚乳，在自然條件下發(fā)芽率極低（低于5%）[4]，即使進(jìn)行人工授粉成功率也只有30%[5]，加上長(zhǎng)期人為采挖，野生鐵皮石斛資源日漸枯竭[6-7]。筆者以鐵皮石斛原球莖為材料，通過(guò)原球莖增殖與分化得到所需培養(yǎng)苗，研究不同光照時(shí)間、不同光質(zhì)、不同光照強(qiáng)度對(duì)鐵皮石斛培養(yǎng)苗生長(zhǎng)的影響，從而為通過(guò)控制光照時(shí)間、光質(zhì)、光照強(qiáng)度快速繁育鐵皮石斛進(jìn)行規(guī)?；a(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)提供理論支持。

1?材料與方法

1.1?試驗(yàn)材料

試驗(yàn)材料為鐵皮石斛原球莖，由福建農(nóng)林大學(xué)園藝學(xué)院設(shè)施農(nóng)業(yè)科學(xué)與工程實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2?試驗(yàn)方法

1.2.1?原球莖增殖。

將供試的原球莖在無(wú)菌條件下切割成直徑0.5 cm的接種團(tuán)，并轉(zhuǎn)接到表1的培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，每種培養(yǎng)基接種20瓶，每瓶接種4團(tuán)，40 d后對(duì)原球莖的增殖情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

1.2.2?原球莖的分化培養(yǎng)。

將增殖培養(yǎng)基中增殖的原球莖在無(wú)菌條件下切割成直徑0.5 cm的接種團(tuán)，轉(zhuǎn)接到表2的培養(yǎng)基中進(jìn)行分化培養(yǎng)，每種培養(yǎng)基接種20瓶，每瓶接種4團(tuán)，40 d后對(duì)原球莖的分化情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)[8-9]。

1.2.3?生根培養(yǎng)。

在分化培養(yǎng)出的無(wú)根叢生苗中選取長(zhǎng)勢(shì)良好、生長(zhǎng)狀況相同的小苗，在無(wú)菌條件下轉(zhuǎn)接到表3的培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，每種培養(yǎng)基接種20瓶，每瓶接種3棵，60 d后對(duì)生根情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

1.2.4?移栽。

移栽前要進(jìn)行煉苗，即將培養(yǎng)瓶放在溫室條件下7～10 d，打開(kāi)瓶蓋放置1～2 d，從瓶中將根系發(fā)達(dá)、莖粗壯、株高5 cm的生根苗取出，用清水將根部表面的培養(yǎng)基洗凈，瀝干小苗上的水分至不滴水為止，用1%多菌靈浸泡1 min，移入進(jìn)口水苔、刨花、進(jìn)口泥炭土∶珍珠巖為3∶1的3種基質(zhì)中，每種基質(zhì)移栽10盆，每盆移栽2株，30 d后對(duì)鐵皮石斛移栽成活率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

1.2.5?不同光照時(shí)間對(duì)鐵皮石斛培養(yǎng)苗生長(zhǎng)的影響。

采用以1/2 MS為基本培養(yǎng)基，添加KT 1.5 mg/L、蛋白胨1 g/L、馬鈴薯60 g/L、花寶2號(hào)0.5 g/L、瓊脂粉6.5 g/L、蔗糖25 g/L、活性炭1.0 g/L、pH 5.7的培養(yǎng)基，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的培養(yǎng)后，將長(zhǎng)勢(shì)良好一致的培養(yǎng)苗接種于增殖培養(yǎng)基中，培養(yǎng)室溫度為（23±2）℃，通風(fēng)良好，光照強(qiáng)度為2 500 lx，在光照時(shí)間為2、6、10、14、18 h條件下進(jìn)行培養(yǎng)，比較不同光照時(shí)間對(duì)培養(yǎng)苗生長(zhǎng)的影響。將原球莖分化的鐵皮石斛培養(yǎng)苗分成單株，然后選取長(zhǎng)勢(shì)良好、生長(zhǎng)狀況相同的小苗，并將其接種于培養(yǎng)苗生長(zhǎng)最適培養(yǎng)基中，每瓶接6株，每個(gè)處理接種5瓶，進(jìn)行培養(yǎng)，60 d后對(duì)小苗的生長(zhǎng)情況進(jìn)行觀察，并統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)。

1.2.6?不同光質(zhì)對(duì)鐵皮石斛培養(yǎng)苗生長(zhǎng)的影響。

采用以1/2MS為基本培養(yǎng)基，添加KT 1.5 mg/L、蛋白胨1 g/L、馬鈴薯60 g/L、花寶2號(hào)0.5 g/L、瓊脂粉6.5 g/L、蔗糖25 g/L、活性炭1.0 g/L、pH 5.7的培養(yǎng)基，進(jìn)行一段時(shí)間的培養(yǎng)后將長(zhǎng)勢(shì)良好一致的培養(yǎng)苗接種于培養(yǎng)基中，培養(yǎng)室溫度為（23±2）℃，通風(fēng)良好，光照強(qiáng)度為2 500 lx，在光質(zhì)為紅光、藍(lán)光、50%紅光+50%藍(lán)光、白光條件下進(jìn)行培養(yǎng)，比較不同光質(zhì)對(duì)培養(yǎng)苗生長(zhǎng)的影響。將原球莖分化的鐵皮石斛培養(yǎng)苗分成單株，然后選取長(zhǎng)勢(shì)良好、生長(zhǎng)狀況相同的小苗，并將其接種于培養(yǎng)苗生長(zhǎng)最適培養(yǎng)基中，每瓶接6株，每個(gè)處理接種5瓶，進(jìn)行培養(yǎng)，60 d后對(duì)小苗的生長(zhǎng)情況進(jìn)行觀察，并統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)。

1.2.7?不同光照強(qiáng)度對(duì)鐵皮石斛培養(yǎng)苗生長(zhǎng)的影響。

采用以1/2 MS為基本培養(yǎng)基，添加KT 1.5 mg/L、蛋白胨1 g/L、馬鈴薯60 g/L、花寶2號(hào)0.5 g/L、瓊脂粉6.5 g/L、蔗糖25 g/L、活性炭1.0 g/L、pH 5.7的培養(yǎng)基，進(jìn)行一段時(shí)間的培養(yǎng)后將長(zhǎng)勢(shì)良好一致的培養(yǎng)苗接種于培養(yǎng)基中，培養(yǎng)室溫度為（23±2）℃，通風(fēng)良好，在光照強(qiáng)度為500、1 500、2 500、3 500、4 500 lx條件下進(jìn)行培養(yǎng)，比較不同光照強(qiáng)度對(duì)培養(yǎng)苗生長(zhǎng)的影響。將原球莖分化的鐵皮石斛培養(yǎng)苗分成單株，然后選取長(zhǎng)勢(shì)良好、生長(zhǎng)狀況大致相同的小苗，并將其接種于培養(yǎng)苗生長(zhǎng)最適培養(yǎng)基中，每瓶接6株，每個(gè)處理接種5瓶，進(jìn)行培養(yǎng)，60 d后對(duì)小苗的生長(zhǎng)情況進(jìn)行觀察，并統(tǒng)計(jì)分析。

2?結(jié)果與分析

2.1?不同培養(yǎng)基對(duì)鐵皮石斛原球莖增殖的影響

鐵皮石斛接種于不同培養(yǎng)基中，40 d后的觀察結(jié)果見(jiàn)表4。由表4可知，在原球莖的增殖過(guò)程中，各個(gè)培養(yǎng)基中原球莖增殖速度不同，且在相同培養(yǎng)基中，不同時(shí)段原球莖增殖速度也不同。4組培養(yǎng)基中原球莖均有不同程度的增殖，其中2組增殖程度與原球莖增殖質(zhì)量最好，表現(xiàn)為3>1>4，因此，培養(yǎng)基為MS+BA 1.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L+KT 0.5 mg/L+蛋白胨1 g/L+瓊脂粉6.5 g/L+蔗糖25 g/L+活性炭1.0 g/L時(shí)原球莖增殖程度與質(zhì)量最好;另外，添加附加物如馬鈴薯、香蕉等也能使原球莖有明顯的增大，但添加附加物使得培養(yǎng)過(guò)程中污染現(xiàn)象加重。

2.2?不同培養(yǎng)基對(duì)鐵皮石斛原球莖分化的影響

將鐵皮石斛接種于不同培養(yǎng)基中，40 d后結(jié)果見(jiàn)表5。由表5可知，在原球莖分化過(guò)程中，原球莖顏色淡綠色開(kāi)始加深，基部則為白色透明狀，而后出現(xiàn)膨大，在原球莖頂端有抽生新芽的現(xiàn)象，最后分化成叢生芽。4組培養(yǎng)基中原球莖均有不同程度的分化，其中8組分化程度最高，形成叢生芽狀態(tài)最好，其余分化程度為6>7>5，因此，培養(yǎng)基為1/2MS+ BA 3.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+IBA 0.1 mg/L+馬鈴薯60 g/L +瓊脂粉6.5 g/L+蔗糖25 g/L+活性炭1.0 g/L時(shí)分化程度最高長(zhǎng)勢(shì)也最好;另外，適當(dāng)添加附加物馬鈴薯也在一定程度上促進(jìn)了原球莖的分化，但不同激素如BA、NAA等也會(huì)影響原球莖的分化，濃度過(guò)高會(huì)使其在分化過(guò)程中受到抑制，甚至出現(xiàn)畸形。

2.3?不同培養(yǎng)基對(duì)鐵皮石斛誘導(dǎo)生根的影響

將無(wú)根叢生苗接種于不同培養(yǎng)基中，60 d后結(jié)果見(jiàn)表6。由表6可知，4組培養(yǎng)基均能誘導(dǎo)生根，只是誘導(dǎo)生根程度不同，其中11組誘導(dǎo)生根程度最高，根系狀態(tài)最佳，其余誘導(dǎo)生根程度為12>10>9，因此，培養(yǎng)基為1/2MS+IBA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+馬鈴薯60 g/L +瓊脂粉6.5 g/L+蔗糖25 g/L+活性炭1.0 g/L時(shí)誘導(dǎo)生根效果最好;另外，添加有機(jī)添加物能有效促進(jìn)生根，其中以馬鈴薯效果最好。

2.4?不同基質(zhì)對(duì)鐵皮石斛移栽成活率的影響

選用的基質(zhì)為進(jìn)口水苔、刨花、進(jìn)口泥炭∶珍珠巖=3∶1，移栽30 d后結(jié)果見(jiàn)表7。由表7可知，不同基質(zhì)對(duì)移栽成活率具有很大影響，其中基質(zhì)為刨花時(shí)更利于鐵皮石斛移栽，泥炭∶珍珠巖=3∶1次之，水苔則最低。因此，當(dāng)基質(zhì)為刨花時(shí)更有利于鐵皮石斛移栽成活。

2.5?不同光照時(shí)間對(duì)鐵皮石斛培養(yǎng)苗生長(zhǎng)的影響

將原球莖分化后長(zhǎng)成的試管苗接種在培養(yǎng)苗最適培養(yǎng)基中，分別置于不同光照時(shí)間下進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)60 d后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果見(jiàn)表8。由表8可知，各處理組鐵皮石斛培養(yǎng)苗的植株形態(tài)表現(xiàn)出明顯的差異，通過(guò)觀察并統(tǒng)計(jì)植株的長(zhǎng)勢(shì)、叢生苗數(shù)、株高及莖粗，并根據(jù)其綜合長(zhǎng)勢(shì)情況，比較不同光照時(shí)間對(duì)鐵皮石斛培養(yǎng)苗生長(zhǎng)的影響。

從表8可以看出，5個(gè)處理的培養(yǎng)苗均有不同程度的生長(zhǎng)變化，其中A3處理培養(yǎng)苗總體長(zhǎng)勢(shì)、株高、莖粗及叢生苗數(shù)均優(yōu)于其他處理，A4組處理次之，其余組的生長(zhǎng)變化為A2>A5>A1，因此，綜合比較可以看出光照時(shí)間對(duì)鐵皮石斛培養(yǎng)苗的植株長(zhǎng)勢(shì)、叢生苗數(shù)、株高有較大的影響。由此可知，當(dāng)光照時(shí)間少于10 h/d時(shí)，植物進(jìn)行光合作用時(shí)間較短，所產(chǎn)生的有機(jī)物及能量不足以支持正常生命活動(dòng)，導(dǎo)致植株生長(zhǎng)緩慢，顏色變淺，長(zhǎng)勢(shì)不良;由于植物生長(zhǎng)有最適光照時(shí)間，當(dāng)光照時(shí)間超過(guò)10 h/d時(shí)，植物并不會(huì)按照理想的軌跡不停地進(jìn)行光合作用而提高產(chǎn)量，反而會(huì)因?yàn)檫^(guò)度光照而使植物生長(zhǎng)出現(xiàn)一些被抑制的現(xiàn)象，說(shuō)明光照時(shí)間過(guò)長(zhǎng)不利于植株的生長(zhǎng)發(fā)育;因此，當(dāng)光照時(shí)間為10 h/d時(shí)，鐵皮石斛的植株長(zhǎng)勢(shì)、叢生苗數(shù)、株高、莖粗等綜合指標(biāo)表現(xiàn)出較好的生長(zhǎng)發(fā)育狀況。

2.6?不同光質(zhì)對(duì)鐵皮石斛培養(yǎng)苗生長(zhǎng)的影響

將原球莖分化后長(zhǎng)成的培養(yǎng)苗接種在試管苗最適培養(yǎng)基中，分別置于不同光質(zhì)條件下進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)60 d后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，發(fā)現(xiàn)各處理組鐵皮石斛培養(yǎng)苗的植株形態(tài)表現(xiàn)出明顯的差異，通過(guò)觀察并統(tǒng)計(jì)植株的長(zhǎng)勢(shì)、叢生苗數(shù)、株高及莖粗，并根據(jù)其綜合長(zhǎng)勢(shì)情況，比較不同光質(zhì)對(duì)鐵皮石斛培養(yǎng)苗生長(zhǎng)的影響。

從表9可以看出，不同光質(zhì)對(duì)鐵皮石斛培養(yǎng)苗的植株長(zhǎng)勢(shì)、叢生苗數(shù)、株高、莖粗有較大影響。B1處理的鐵皮石斛培養(yǎng)苗在單一紅光照射下植株的株高能達(dá)到最大值;之后隨著藍(lán)光比例的逐漸增加，培養(yǎng)苗的株高也隨之減小，然而莖粗隨之增大，植株相對(duì)于在單一紅光照射下粗壯一些;B2處理鐵皮石斛培養(yǎng)苗在單一藍(lán)光照射下植株株高最小，比B4處理在白光照射下培養(yǎng)苗的株高低;B3處理即紅藍(lán)光的光質(zhì)比為1∶1時(shí)，鐵皮石斛培養(yǎng)苗的生長(zhǎng)情況最好，植株的綜合指標(biāo)最高。

2.7?不同光照強(qiáng)度對(duì)鐵皮石斛培養(yǎng)苗生長(zhǎng)的影響

將原球莖分化后長(zhǎng)成的培養(yǎng)苗接種在試管苗最適培養(yǎng)基中，分別置于不同光照強(qiáng)度條件下進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)60 d后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，發(fā)現(xiàn)各處理鐵皮石斛培養(yǎng)苗的植株形態(tài)表現(xiàn)出明顯的差異，通過(guò)觀察并統(tǒng)計(jì)植株的長(zhǎng)勢(shì)、叢生苗數(shù)及株高，并根據(jù)其綜合長(zhǎng)勢(shì)情況，比較不同光照強(qiáng)度對(duì)鐵皮石斛培養(yǎng)苗生長(zhǎng)的影響。

從表10可以看出，C3處理的植株除株高與莖粗比C4組高外，其余生長(zhǎng)情況均與C4組處理中的植株差異不明顯，但明顯高于其他3組;C2處理的鐵皮石斛試管苗生長(zhǎng)情況與C5處理的植株差異不明顯;C1處理的鐵皮石斛試管苗生長(zhǎng)情況最差，因此不同光照強(qiáng)度對(duì)鐵皮石斛培養(yǎng)苗的植株長(zhǎng)勢(shì)、叢生苗數(shù)、株高、莖粗有較大影響。當(dāng)光照強(qiáng)度為500 lx時(shí)，植株的生長(zhǎng)情況較差，說(shuō)明光照強(qiáng)度弱時(shí)，植株的生長(zhǎng)速度緩慢;隨著光照強(qiáng)度的增強(qiáng)，植株生長(zhǎng)發(fā)育情況逐漸變好，但當(dāng)光照強(qiáng)度過(guò)強(qiáng)時(shí)，植株的生長(zhǎng)反而受到抑制，說(shuō)明光照強(qiáng)度過(guò)強(qiáng)不利于植株的生長(zhǎng)發(fā)育;當(dāng)光照強(qiáng)度為2 500 lx時(shí)，鐵皮石斛培養(yǎng)苗的植株長(zhǎng)勢(shì)、叢生苗數(shù)、株高、莖粗等綜合指標(biāo)表現(xiàn)出較好的生長(zhǎng)發(fā)育狀況。

3?討論

3.1?不同附加物在鐵皮石斛組織培養(yǎng)中的作用

添加適量的馬鈴薯、香蕉等附加物來(lái)促進(jìn)鐵皮石斛的生長(zhǎng)，但并不是所有附加物都能很好地促進(jìn)其生長(zhǎng)。該試驗(yàn)研究了馬鈴薯、香蕉及蛋白胨對(duì)其原球莖增殖與分化的影響，結(jié)果表明，蛋白胨與馬鈴薯對(duì)原球莖的增殖及分化均有明顯的促進(jìn)作用，香蕉則對(duì)原球莖的生長(zhǎng)沒(méi)有很明顯的作用，反而會(huì)使原球莖產(chǎn)生黃化現(xiàn)象。因此，附加物的種類(lèi)與附加物的濃度對(duì)原球莖生長(zhǎng)的影響也不同。

3.2?不同光照條件在鐵皮石斛組織培養(yǎng)中的作用

植物在生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中受到很多外界環(huán)境因子的影響，包括溫度、濕度、光照、通風(fēng)情況、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)等，而在這些環(huán)境影響因子中，光照具有重要的地位[10-11]，在光照對(duì)植物具體的影響因子中，包括光照時(shí)間、光質(zhì)與光照強(qiáng)度3個(gè)因素。該試驗(yàn)研究了鐵皮石斛培養(yǎng)苗在不同光照時(shí)間、光質(zhì)及光照強(qiáng)度的生長(zhǎng)發(fā)育情況。由于光照時(shí)間影響植物進(jìn)行光合作用時(shí)間，因此光照時(shí)間能直接影響植物光合作用，并影響植物生理代謝等生命活動(dòng)，長(zhǎng)時(shí)間的光線照射可以對(duì)光敏色素進(jìn)行刺激從而進(jìn)行信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，通過(guò)調(diào)節(jié)植物相關(guān)生理反應(yīng)對(duì)植物生長(zhǎng)的影響[12];不同光質(zhì)對(duì)鐵皮石斛培養(yǎng)苗的株高、莖粗、生根、活力狀況等有顯著影響，紅光有利于鐵皮石斛培養(yǎng)苗的生長(zhǎng)，當(dāng)進(jìn)行單一紅光處理時(shí)鐵皮石斛培養(yǎng)苗的株高能達(dá)到最大值，藍(lán)光有抑制鐵皮石斛培養(yǎng)苗高度生長(zhǎng)的作用，但能促進(jìn)其莖的增粗;光照強(qiáng)度對(duì)植株生長(zhǎng)情況有較大的影響，包含植株在培養(yǎng)過(guò)程中的增殖、器官分化及胚狀體形成等[13]，研究表明，適宜的光照強(qiáng)度可以促進(jìn)植株在培養(yǎng)過(guò)程中的快速生長(zhǎng)，并能使其避免受到強(qiáng)光的抑制作用[14];而光照強(qiáng)度過(guò)大往往導(dǎo)致鐵皮石斛葉色濃綠，植株矮壯且幼苗的增殖率大[15]。因此，適宜的光照時(shí)間、光質(zhì)、光照強(qiáng)度在鐵皮石斛生長(zhǎng)、培養(yǎng)中具有較大的影響。

3.3?污染的原因及解決方法

該試驗(yàn)中引起污染的主要原因是添加了有機(jī)添加物，如馬鈴薯、香蕉、蛋白胨等。在試驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，添加有機(jī)添加物的培養(yǎng)苗比未添加有機(jī)物的培養(yǎng)苗易污染，這是因?yàn)榧尤脒@些物質(zhì)后使得培養(yǎng)基在高溫滅菌時(shí)不徹底，導(dǎo)致在培養(yǎng)過(guò)程中易滋生細(xì)菌或是在還沒(méi)接種前已經(jīng)被污染。因此，添加附加物的培養(yǎng)基在進(jìn)行高溫滅菌時(shí)應(yīng)適當(dāng)延長(zhǎng)高溫滅菌時(shí)間，以達(dá)到徹底滅菌的效果。另外，在培養(yǎng)過(guò)程中一旦發(fā)現(xiàn)已被污染的培養(yǎng)瓶應(yīng)及時(shí)撤掉，避免培養(yǎng)瓶間相互污染。

3.4?黃化現(xiàn)象及解決方法

在進(jìn)行植物組織培養(yǎng)過(guò)程中，經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)黃化現(xiàn)象，在該試驗(yàn)中黃化主要發(fā)生在原球莖增殖階段，原因是在該階段如果環(huán)境通氣不良、光照不足、長(zhǎng)時(shí)間沒(méi)有轉(zhuǎn)接都會(huì)使原球莖發(fā)生黃化，另外培養(yǎng)基中的激素配比不當(dāng)也會(huì)使原球莖出現(xiàn)黃化現(xiàn)象。因此，在配制培養(yǎng)基的過(guò)程中要準(zhǔn)確稱量各種添加物，及時(shí)對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行轉(zhuǎn)接，給予適當(dāng)光照，加強(qiáng)培養(yǎng)環(huán)境的通風(fēng)狀況，必要時(shí)可使用透氣的封口膜代替瓶蓋以改善瓶?jī)?nèi)的通氣狀況。

參考文獻(xiàn)

[1] 張紅梅，劉建東，王巖花，等.鐵皮石斛莖段快繁技術(shù)研究[J].山西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2010，30（6）：495-499.

[2] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：2010年版一部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：265-266.

[3] 李桂鋒，李進(jìn)進(jìn)，許繼勇，等.鐵皮石斛研究綜述[J].中藥材，2010，33（1）：150-153.

[4] VELLUPILLAI M，SWARUP S，GOH C J.Histological and protein changes during early stages of seed germination in the orchid，Dendrobium crumenatum[J].The journal of horticultural science，1997，72（6）：941-948.

[5] 金銀兵.鐵皮石斛的生物學(xué)特性與開(kāi)花授粉技術(shù)研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，37（11）：5280-5282.

[6] 傅立國(guó)，金鑒明.中國(guó)植物紅皮書(shū)——稀有瀕危植物[M].北京：科學(xué)出版社，1992：492-493.

[7] 趙天榜，陳志秀，陳占寬，等.石斛組織培養(yǎng)與栽培技術(shù)的研究[J].河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1994，28（2）：128-133.

[8] 莫昭展，貝學(xué)軍，覃貴畢，等.鐵皮石斛叢生芽增殖研究[J].西北林學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，23（6）：104-107.

[9] 張書(shū)萍，白石，陳麗靜.鐵皮石斛的組織培養(yǎng)與快速繁殖[J].遼寧農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008（6）：12-15.

[10] 施豐華，王海波，張瑞西，等.LED對(duì)植物生長(zhǎng)促進(jìn)作用的研究進(jìn)展[J].中國(guó)照明電器，2011（3）：1-4.

[11] 張勤，陳衛(wèi)軍，唐文林，等.靈武長(zhǎng)棗日光溫室環(huán)境因子變化規(guī)律研究[J].寧夏農(nóng)林科技，2010（1）：13-14.

[12] 惠婕，杜靜，黃叢林，等.植物光敏色素的研究進(jìn)展[J].北方園藝，2010（7）：203-205.

[13] 王蒂，陳勁楓.植物組織培養(yǎng)[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2013：54-55.

[14] 鮑順淑.密閉式植物工廠中藥用鐵皮石斛組培生產(chǎn)的適宜光照環(huán)境[D].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)，2007：1-79.

[15] 白美發(fā)，黃敏.鐵皮石斛組培技術(shù)研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，36（36）：15802-15803.