姜仁禹，梁麗麗，馬思提，梁偉玲

（山東中醫(yī)藥高等?？茖W校，山東 煙臺 264100）

四季青又被稱之為紅冬青，除此之外，它還有很多別稱，如油葉樹等，屬于冬青科植物，主要生長在長江流域以及秦嶺南坡等地域。四季青在我國多被用作觀察樹種，另外，由于其樹木質(zhì)地堅韌，因此可用于制作雕刻品、工具柄等用，除此之外，它還有清熱解毒、涼血止血和消腫去淤等功效，能夠有效治療肺熱咳嗽、濕疹、瘡瘍、風熱感冒和急性咽喉炎等，是一種實用價值較高的植物[1]。在四季青中，原兒茶酸和原兒茶醛兩種酚酸類成分為主要的抗炎和抗菌活性成分。據(jù)調(diào)查，我國對于四季青的提取工藝研究資料較為匱乏，因此本文對其指標成分中的原兒茶酸以及原兒茶醛，通過乙醇提取方式進行研究，同時使用大孔樹脂對其進行工藝優(yōu)化，如下文所述。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

本次實驗所用儀器選取APS-80-16plus高效液相色譜儀（迪慶開發(fā)區(qū)三江生物開發(fā)有限公司）、TG-332A微量分析天平（上海精科天美-上海天平儀器廠）、FA-2004實驗室電子分析天平（上海良平儀器儀表有限公司）以及SG7200HDT超聲波清洗器（杭州億捷科技有限公司）。

1.2 試劑與樣品

本次實驗所選取對照品為原兒茶酸以及原兒茶醛，兩種對照品均從中國藥品生物制品檢定所購買，其中雙蒸水為實驗室自制，甲酸為分析純，乙腈為色譜純。

2 實驗方法與結果

2.1 實驗方法

將原兒茶酸與原兒茶醛制作成曲線方程，其中橫坐標X為二者濃度，縱坐標Y為二者鋒面積所得積分值，最后得出回歸方程式。經(jīng)計算后，原兒茶酸含量在范圍內(nèi)線性關系較好，原兒茶醛含量在范圍內(nèi)線性關系較好。

2.2 不同提取工藝比較

本次研究評價指標為原兒茶酸與原兒茶醇含量中的提取率，不同提取工藝比較方法分別為水煎提取方法與乙醇回流提取方法。

（1）乙醇回流提取方法：選取200單位的四季青藥材放置于燒瓶中，燒瓶容量為3000 mL（實驗所用燒瓶為圓底），隨后使用30與70的乙醇經(jīng)過1600 mL回流（回流微沸即可）提取60 min，用紗布進行過濾，過濾所得藥物殘渣需再經(jīng)過1200 mL溶劑進行回流（同樣微沸）提取30 min，用紗布進行濾過，最后將兩次所得濾液進行合并，即得。

（2）水煎提取法：首先選取200單位的四季青藥材置于燒杯中，燒杯容量為1000 mL，隨后向燒杯中加入500 mL純凈水，使四季青在燒杯中浸泡30 min，然后對其進行煮沸操作，待其完全沸騰后需保溫60 min，使用紗布進行過濾，過濾所得藥物殘渣需使用1500 mL純凈水再次進行煮沸操作，操作過程如上述一致，最后將兩次所得的濾過液體進行合并，即得。

2.3 實驗結果

將上文所述中兩種提取方法的供試品進行相應的稀釋后所得結果發(fā)現(xiàn)，原兒茶酸中乙醇70提取率最高（99.2%），詳見表1。

表1 不同提取方法中四季青原兒茶酸提取率對比（n，%）

原兒茶醛提取中，以乙醇70提取率為最高（91.6%），詳見表2。

表2 不同提取方法中四季青原兒茶醛提取率對比（n，%）

2.4 大孔樹脂純化工藝應用

作為一種結構為大孔的有機高分子共聚體，大孔吸附樹脂能夠作為吸附劑，憑借其具有的不同成分進行選擇性的吸附和篩選操作，以實現(xiàn)對某一類化合物的分離純化?，F(xiàn)階段，在我國市面上較為常見的大孔吸附樹脂有十多種類型，每一種大孔吸附樹脂的適用范圍也不盡相同，本文研究對NKA—8極性樹脂對四季青酚酸類成分的洗脫效果進行研究。

在選擇NKA—8乙醇洗脫液的濃度時，先將容量為50 mL的NKA—8樹脂進行預處理后，置于吸附柱，同時在樹脂床上倒入12.5 mL四季青提取液，然后用蒸餾水對樹脂床中含有的非吸附性雜質(zhì)進行清洗，以30、60、90的乙醇作為解吸劑，然后計算和檢測洗脫液中的藥物濃度和洗脫量。結果顯示，濃度為60的乙醇洗脫液洗脫效果更好。詳細情況見表3。

表3 NKA—8乙醇洗脫液濃度的選擇

3 討 論

四季青作為一種中藥，有清熱解毒、活血化瘀、消腫止痛等功效，其功效的實現(xiàn)與發(fā)揮主要依賴原兒茶酸、茶醛等酚酸類成分。四季青性寒。味道苦澀，能夠用于治療上呼吸道感染、慢性支氣管炎以及慢性哮喘等，由于這類病情常見癥狀為咳嗽、咳痰等，在治療上需進行鎮(zhèn)咳祛痰方式，而四季青中所含的原兒茶酸、原兒茶醛等酚酸類成分能夠清熱化痰，達到宣肺止咳的作用[2-3]。

現(xiàn)階段，在醫(yī)學領域中，常用水煎提取法來實現(xiàn)對四季青酚酸類成分的提取，因而本文即對四季青提取純化工藝進行了分析，以期有針對性的改進工藝，去除四季青中含有的雜質(zhì)，實現(xiàn)優(yōu)秀的藥物制劑目標。

本次研究通過水煎法與乙醇回流法對四季青酚酸類成分進行提取后發(fā)現(xiàn)，原兒茶酸中以乙醇70提取率最高；原兒茶醛中以乙醇70提取率最高。應用大孔樹脂純化工藝時，選擇濃度為60的NKA—8乙醇洗脫液效果更理想。

綜上所述，在進行四季青酚酸類成分提取中，乙醇回流提取和大孔樹脂純化工藝均能夠有效去除雜質(zhì)，同時最大化保留酚酸類成分，因此可基于實際情況，選擇適當?shù)墓に噷崿F(xiàn)對四季青酚酸類成分的提取。