國蘭的組織培養(yǎng)技術(shù)

符紅艷 李衛(wèi)東

蘭花是我國的十大傳統(tǒng)名花之一，在我國有兩千多年的栽培歷史。蘭花以它特有的葉、花、香獨(dú)具四清（氣清、色清、神清、韻清），具有高潔、清雅的特點(diǎn)。蘭科植物多數(shù)生長在溫暖、濕潤、通風(fēng)、排水良好、有散射陽光的環(huán)境。中國是蘭屬分布中心之一，已知的蘭屬植物有31種，占全球蘭屬的一半以上，以地生蘭為主。國蘭是蘭屬中觀賞價(jià)值較高的地生蘭，其品種十分豐富，多達(dá)上千種，包括春蘭、蕙蘭、建蘭、墨蘭、寒蘭等。

在20世紀(jì)以前，中國蘭花主要是靠無性繁殖和到原產(chǎn)地采集野生種植物來供應(yīng)市場。目前我國產(chǎn)蘭山區(qū)的蘭花資源受到很大破壞，容易到達(dá)的地方蘭花基本絕跡，只有在人跡罕到之處的深山才有零星分布。蘭花的繁殖可分為無性繁殖和有性繁殖兩類。無性繁殖又稱營養(yǎng)繁殖，包括分株繁殖、扦插繁殖等傳統(tǒng)的繁殖方法，其特點(diǎn)是繁殖速度慢，周期長，很難實(shí)現(xiàn)快速繁殖，不能滿足蘭花實(shí)際生產(chǎn)的需要。有性繁殖又稱種子繁殖，蘭花的種子非常細(xì)小，呈粉末狀，每個(gè)蒴果中常有數(shù)萬粒甚至幾百萬粒的種子，種胚通常發(fā)育不完全，沒有胚乳，只有一個(gè)弱小的胚，胚內(nèi)含有很少的營養(yǎng)物質(zhì)，絕大部分為脂類物質(zhì)，外面覆蓋一層不透水不透氣的膜狀物質(zhì)，在自然條件下萌發(fā)率極低。蘭花種子以隨采收隨播種為好。蘭花種子的播種繁殖可分為有菌播種法和無菌播種法兩種。有菌播種法是指蘭花種子在自然環(huán)境中與蘭菌共生也稱共生萌發(fā)。真菌能促進(jìn)種子的萌發(fā)，是由于菌絲為種子內(nèi)的胚和基質(zhì)構(gòu)建了一個(gè)通道，菌絲吸收營養(yǎng)輸送給種子，促進(jìn)了種子的糖異生及營養(yǎng)物質(zhì)的積累。無菌播種法是利用組織培養(yǎng)的方法，為蘭花種子提供所需要的營養(yǎng)和適宜的環(huán)境，促使其萌發(fā)的一種方法。大部分蘭花種子可通過無菌萌發(fā)方式發(fā)芽，在特定培養(yǎng)基上種子萌發(fā)生長。

蘭花的組織培養(yǎng)始于20世紀(jì)60年代。1960年， 法國人莫雷爾就利用大花蕙蘭的莖尖，將其分生組織誘導(dǎo)形成原球莖并分化成植株，為實(shí)現(xiàn)蘭花生產(chǎn)的工廠化奠定了基礎(chǔ)。我國在蘭花組織培養(yǎng)方面起步較晚，但發(fā)展快，不少研究者都有研究組織培養(yǎng)，取得了很多成果。目前常用組織培養(yǎng)方法批量生產(chǎn)小苗，特別是熱帶蘭花的組織培養(yǎng)快速繁殖比較成功。植物組織培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用和推廣對(duì)其快速繁殖、品種復(fù)壯、加快優(yōu)良品種的培育、挽救珍稀瀕危種類等方面起到了重要作用，對(duì)國蘭的快速繁殖和資源保存均具有重要意義。下面介紹一下國蘭的組織培養(yǎng)技術(shù)：

外植體的處理。一般而言，凡是生長健壯、具有活性的細(xì)胞組織都可以作為外植體。蘭花的莖尖、根尖、側(cè)芽、花器官、種子等均可作為組織培養(yǎng)的外植體，其中新芽的莖尖是細(xì)胞分裂最旺盛、活性最強(qiáng)的部位，新芽和種子是利用最多的器官。將蘭株上的新芽從基部切下剝?nèi)ネ饷娴?～2層葉片，用紗布包好后置于流水下加洗潔精沖洗30分鐘，在超凈臺(tái)中用75%濃度酒精處理2分鐘，無菌水沖洗3次，0.1%升汞或1%的次氯酸鈉溶液消毒10分鐘，無菌水沖洗5次，在無菌濾紙層上剝?nèi)ネ鈱尤~片，將基部傷口重新切去一點(diǎn)，將剝好的4～6毫米莖尖接入培養(yǎng)基，基部稍按于培養(yǎng)基中。種子為外植體時(shí)，選擇剛成熟的未開裂的蒴果，將果實(shí)置于流水下加洗潔精沖洗30分鐘，然后在超凈臺(tái)中取75%濃度酒精處理3～5分鐘，接著用1%的次氯酸鈉溶液消毒20分鐘，無菌水沖洗3～5遍，最后用無菌紙將其表面水分吸干。用解剖刀將果莢縱向剖開，取出種子后將其均勻撒播在培養(yǎng)基上。

原球莖的誘導(dǎo)和增殖。原球莖是指蘭花種子形成的一種具有再生能力的小球狀體，而通過蘭花植物其他部位形成的類似于原球莖的球狀體稱為類原球莖。萌發(fā)培養(yǎng)基可采用MS培養(yǎng)基+奈乙酸1.0 mg/L+6-芐氨基嘌呤 1.0 mg/L+胰蛋白胨 2.0 g/L +活性炭2.0 g/L，接種后在26℃，弱光或暗光下培養(yǎng)。3～8個(gè)月開始萌發(fā)，先萌發(fā)形成原假鱗莖。當(dāng)種子萌發(fā)形成的原假鱗莖伸長超過1厘米時(shí)，其上常有多個(gè)小原假鱗莖，將原假鱗莖從分支處掰開，移植到增殖培養(yǎng)基上培養(yǎng)。國蘭的增殖培養(yǎng)基以MS基本培養(yǎng)基+奈乙酸0.5 mg/L +6-芐氨基嘌呤 1.0 mg/L+胰蛋白胨 2.0 g/L +活性炭3.0 g/L為好，對(duì)原假鱗莖生長效果好，一般都可以大量增殖。

分化培養(yǎng)。當(dāng)增殖達(dá)到一定的量時(shí)進(jìn)行分化培養(yǎng)，將粗壯的根狀莖切割成1厘米的小段轉(zhuǎn)入到分化培養(yǎng)基上，每瓶10個(gè)左右，以MS為基本培養(yǎng)基，添加奈乙酸 0.1～0.5 mg/L、6-芐氨基嘌呤 2.0～3.0 mg/L、胰蛋白胨 2.0 g/L和活性炭2.0 g/L。接種后在26℃的光照培養(yǎng)下。約經(jīng)過1個(gè)月其頂端便開始芽的分化，隨后長成瘦小的幼芽，呈綠色，幼芽伸長繼而分化出2片幼葉，有些原假鱗莖基部長出白色突起。

壯苗與生根。蘭花組培苗本身的生命力強(qiáng)弱對(duì)移栽能否成活有很大的影響。凡生命力強(qiáng)，小苗健壯，有較發(fā)達(dá)根系的易于移栽和成活;反之，則不易移栽或移栽后成活率較低。當(dāng)幼苗高3～4厘米時(shí)轉(zhuǎn)入壯苗生根培養(yǎng)基，讓芽、葉與根按比例生長。生根培養(yǎng)基采用MS培養(yǎng)基+奈乙酸 2.0～3.0 mg/L +活性炭3.0 g/L。在生根培養(yǎng)基上約20天即可生根。

馴化與移栽。當(dāng)每株幼苗有3～5條發(fā)育較好的肉質(zhì)根時(shí)，可將幼苗移出培養(yǎng)瓶，栽植到盆中。小苗從培養(yǎng)瓶中取出后用水洗去根部的培養(yǎng)基。用切碎的苔蘚、泥炭、碎木炭和少量沙配成栽培基質(zhì)，將小苗栽在小盆中。而后放在25℃左右的溫室中，保持較高的空氣濕度和較強(qiáng)的散射光。每周施1次液體肥料，并噴灑抗菌劑，1個(gè)月后可移植到光線較強(qiáng)的地方，隨植株長大及時(shí)換盆。