王玉婷　許成盛　宋晶晶　教郁

【摘 要】目的：本次實(shí)驗(yàn)將采用針對(duì)精液放置時(shí)間的差異性，其對(duì)精子冷凍復(fù)蘇率所產(chǎn)生的影響。方法：本次實(shí)驗(yàn)選取了2018年7月-2018年12月前來本院生殖科助孕剩余精子為研究樣本，患者均簽署剩余配子處理知情同意書，選擇用于科研目的。對(duì)標(biāo)本進(jìn)行儲(chǔ)存，分別放置不同時(shí)間后進(jìn)行冷凍實(shí)驗(yàn)，并在冷凍24小時(shí)后實(shí)施復(fù)蘇實(shí)驗(yàn)，對(duì)比精子放置時(shí)間對(duì)精子冷凍復(fù)蘇的影響。結(jié)果：從放置時(shí)間的長短上看，在5小時(shí)內(nèi)，精子的復(fù)蘇率較好，而放置超過5小時(shí)，其復(fù)蘇率較低，也就是說，隨著精子放置時(shí)間的延長，其復(fù)蘇率越來越低，具有反比例關(guān)系。結(jié)論：在收集到精液樣本后，我們建議在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行冷凍處理，如果由于其他因素需要放置，則建議放置時(shí)間不超過5小時(shí)，確保精子冷凍后具有良好的復(fù)蘇率。

【關(guān)鍵詞】精液;放置時(shí)間;精子;冷凍復(fù)蘇率

【中圖分類號(hào)】R814 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】1005-0019（2020）10-201-01

隨著醫(yī)療技術(shù)的進(jìn)步，精子冷凍技術(shù)也從常規(guī)方案發(fā)展為單精子冷凍，并日益成熟。而精子冷凍技術(shù)指的是，對(duì)精子加入保護(hù)液并放置在-196℃的液氮內(nèi)，在低溫條件下促使其保存活性，并在需要使用時(shí)采用復(fù)蘇技術(shù)喚醒[1]。而各個(gè)國家更是建立了精子庫，其主要提供精子保存、外供精子兩個(gè)部分的內(nèi)容，能夠?yàn)橛?jì)劃生育、不育患者等提供臨床服務(wù)。本次實(shí)驗(yàn)選取了2018年7月-2018年12月前來本院生殖科助孕剩余精子為研究樣本，在其取精之后將液體標(biāo)本進(jìn)行分類儲(chǔ)存，放置不同時(shí)間后進(jìn)行冷凍實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步分析冷凍后的復(fù)蘇率，更好地指導(dǎo)精子冷凍工作，提高質(zhì)量控制。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本次實(shí)驗(yàn)選取了2018年7月-2018年12月前來本院生殖科助孕剩余精子為研究樣本，患者均簽署剩余配子處理知情同意書，選擇用于科研目的。在其取精之后將液體標(biāo)本進(jìn)行分別儲(chǔ)存，放置不同時(shí)間后進(jìn)行冷凍實(shí)驗(yàn)。其中，精子捐獻(xiàn)者的年齡在20-35歲之間，將年齡偏大，以及患有遺傳性疾病的人群剔除，能夠確保精子本身質(zhì)量得到保障。此外，尚未排除不孕癥、血液傳染性疾病、以及慢性疾病患者，助孕患者均在3-7天內(nèi)禁欲，精液體積超過3ml。本次實(shí)驗(yàn)得到了本院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

在助孕患者取得精液之后對(duì)剩余精液進(jìn)行標(biāo)本的回收，并在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行精液提及、顏色、粘稠度以及密度等方向的分析。在將每份精液樣本進(jìn)行平均分配后，放在37℃的恒溫板上，其收取時(shí)間為每隔1小時(shí)，對(duì)其進(jìn)行精子冷凍實(shí)驗(yàn)，并在6小時(shí)內(nèi)完成。在冷凍上，則需要將保護(hù)劑和精液原液進(jìn)行成分的混勻，并采用人工降溫液氮熏蒸法將其冷凍[2]。隨后，精子在冷凍后24小時(shí)，可以將其從液氮罐中取出，并放在37℃的溫水中進(jìn)行復(fù)蘇，記錄精子密度。

1.3 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

本次實(shí)驗(yàn)可以進(jìn)行手工計(jì)數(shù)和計(jì)算機(jī)計(jì)數(shù)兩種方式，對(duì)冷凍前后的精子密度等數(shù)據(jù)進(jìn)行記錄，以便完成復(fù)蘇后的對(duì)比分析。在手工計(jì)數(shù)上，則需要吸取10ul的精液放置在精子計(jì)數(shù)板上，在顯微鏡下觀察精子密度;而計(jì)算機(jī)計(jì)數(shù)則是將同等的精液放置在精子計(jì)數(shù)板上，并采用計(jì)算機(jī)系統(tǒng)分析精子密度以及向前精子百分率。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

在本研究中對(duì)精子冷凍復(fù)蘇率結(jié)果進(jìn)行討論，在統(tǒng)計(jì)的過程中，以SPSS19.0專業(yè)計(jì)算軟件為基礎(chǔ)，確保實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性、可靠性。在臨床數(shù)據(jù)的對(duì)比中，首先要對(duì)不同冷凍時(shí)間下精子復(fù)蘇情況做好記錄，在本次實(shí)驗(yàn)中在復(fù)蘇率上則為計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)，以P<0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

從放置時(shí)間的長短上看，在5小時(shí)內(nèi)，精子的復(fù)蘇率較好，而放置超過5小時(shí)，其復(fù)蘇率較低，也就是說，隨著精子放置時(shí)間的延長，其復(fù)蘇率越來越低，具有反比例關(guān)系。

據(jù)統(tǒng)計(jì)，在本次實(shí)驗(yàn)中，精液放置1小時(shí)的精子冷凍復(fù)蘇率為（51.88±3.25）%，2小時(shí)則為（46.36±2.52）%，3小時(shí)則為（46.25±3.75）%，4小時(shí)則為（45.63±2.63）%，5小時(shí)則為（42.21±2.72）%，6小時(shí)則為（36.24±3.52）%。

3 討論

人類精子庫的建議，其可以治療不孕不育，可以預(yù)防遺傳疾病，并利用超低溫冷凍技術(shù)可以對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)、保存。但是影響精子冷凍后復(fù)蘇率的因素也有很多，包括保護(hù)劑的應(yīng)用、冷凍方式、保存期限、凍儲(chǔ)溫度[3]。將精子集中保存，其精液標(biāo)本量大，且防止時(shí)間長。其次，在操作過程中，人員和設(shè)備情況有限，大批量的冷凍標(biāo)本也會(huì)造成現(xiàn)實(shí)上的困難。這些都會(huì)導(dǎo)致精子冷凍前，精液標(biāo)本的放置時(shí)間長[4]。

在不斷規(guī)范我國精子庫精子質(zhì)量的過程中，其精子數(shù)量、活力、復(fù)蘇率均設(shè)置了下限。解決精液靜置時(shí)間，這對(duì)復(fù)蘇率的改善和提升具有積極作用。從本次研究中看，精液放置時(shí)間會(huì)對(duì)復(fù)蘇結(jié)果有直接影響，如果液化放置時(shí)間長，復(fù)蘇率則有必然的下降趨勢(shì)。同時(shí)有學(xué)者也做了相關(guān)研究，即在5小時(shí)內(nèi)冷凍精子，其復(fù)蘇率處于可接受的范圍，反之，超過5小時(shí)，效果則有明顯下降。

綜上所述，在收集到精液樣本后，我們建議在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行冷凍處理，如果由于其他因素需要放置，則建議放置時(shí)間不超過5小時(shí)，確保精子冷凍后具有良好的復(fù)蘇率。

參考文獻(xiàn)

[1]陳碧，張維，馬天仲，等.取精后至冷凍前的間隔時(shí)間對(duì)精子冷凍復(fù)蘇效果的影響[J].中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2016，13（11）：1-4.

[2]董世桃. 液氮緩慢冷凍方法對(duì)精液冷凍復(fù)蘇后精子活力的影響[J]. 中外醫(yī)學(xué)研究，2018，16（07）：162-164.

[3]張寧， 閆素文， 崔鑫. 建立平戰(zhàn)結(jié)合軍人精子庫應(yīng)對(duì)戰(zhàn)爭和突發(fā)事件對(duì)軍人生殖系統(tǒng)的損傷[J].解放軍醫(yī)藥雜志， 2014（26）：62-64.

[4]World Health Organization. WHO laboratory manual for theexamination and processing of human semen [M]. 5th ed.London：Cambridge University Press， 2010.