徐承建 祝捷

摘? ? 要：目的：通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)建模和細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證miRNA-33a對(duì)馬拉松跑導(dǎo)致心肌纖維化的調(diào)控作用。方法：通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)建模對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠進(jìn)行馬拉松跑訓(xùn)練，檢測(cè)miRNA-33a的變化情況及心肌形態(tài)學(xué)差異，以分析實(shí)驗(yàn)大鼠左心室心肌纖維化對(duì)心功能的影響程度。通過(guò)細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)證明miRNA-33a對(duì)CFb合成膠原蛋白、分化等的調(diào)控作用。 結(jié)果：1）檢測(cè)各組大鼠的心功能狀況：相比對(duì)照組（CG），實(shí)驗(yàn)組（EG）大鼠的左心室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）和左心室短軸縮短率（LVFS） 均顯著下降 （P<0.05）;而相比實(shí)驗(yàn)組（EG），miRNA-33a +EG組大鼠的LVEF顯著提高、LVFS顯著增長(zhǎng)。2）Q-PCR檢測(cè)顯示：與對(duì)照組（CG）相比，實(shí)驗(yàn)組（EG）的miRNA-33a顯著上調(diào)（P<0.05）;與實(shí)驗(yàn)組（EG）相比，miRNA-33a +EG組的miRNA-33a則顯著下降（P<0.05）。3）HE染色結(jié)果顯示：miRNA-33a +EG的大鼠心肌纖維結(jié)構(gòu)紊亂得到緩解，且肌細(xì)胞體積明顯縮小。Masson染色結(jié)果顯示：miRNA-33a +EG的大鼠膠原纖維數(shù)量顯著減少，心肌纖維結(jié)構(gòu)排列相對(duì)有序。與實(shí)驗(yàn)組（EG）相比，miRNA-33a +EG膠原蛋白容積分?jǐn)?shù)顯著下降（P<0.05）。4）Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示：轉(zhuǎn)染miRNA-33a 模擬物后，CFb細(xì)胞I型膠原蛋白、III型膠原蛋白、CTGF的蛋白含量均顯著增加（P<0.05）;轉(zhuǎn)染miRNA-33a 抑制劑后，CFb細(xì)胞I型膠原蛋白、III型膠原蛋白、CTGF的蛋白含量均顯著減少（P<0.05）。5）Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示：miRNA-33a 模擬物顯著增加CFb細(xì)胞a-SMA的蛋白含量（P<0.05）; miRNA-33a 抑制劑顯著降低CFb細(xì)胞a-SMA的蛋白含量（P<0.05）。結(jié)論：miRNA-33a可顯著改善馬拉松跑導(dǎo)致心肌纖維化的病理變化，為后續(xù)研究提供了干預(yù)靶點(diǎn)。

關(guān)鍵詞：miRNA-33a;馬拉松;心肌纖維化;心臟成纖維細(xì)胞

中圖分類號(hào)：G 804.5? ? ? ? ? 學(xué)科代碼：040302? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

Abstract： Objective： To verify the regulation of miRNA-33a on myocardial fibrosis resulted from marathon through animal and cytological experiments. Methods： The variation of miRNA-33a in the left ventricle and the morphology of myocardial morphology is to be verified by zoological experiments， so as to analyze the degree of left ventricular fibrosis in rats. Through cytological experiments， it is to prove that miRNA-33a regulates the function of CFb synthesis of collagen and differentiation in the cytological layer. Results： 1） Determination of cardiac function in each group： Compared with control group（CG）， the left ventricular ejection fraction （LVEF） and left ventricular short axis shortening rate（LVFS） of EG group were significantly lower（P<0.05） in the experimental group（EG）; LVEF and LVFS in the miRNA-33a antago-miR+EG group were significantly increased in EG. 2） Q-PCR showed that the expression of miRNA-33a was significantly up-regulated in EG compared with CG（P<0.05）. Compared with EG， miRNA-33a antago the expression of miRNA-33a in the -miR+EG decreased significantly（P<0.05）. 3） HE staining showed that the disorder of tissue structure arrangement in miRNA-33a antago-miR+EG was alleviated， and the myocyte volume was significantly reduced. Masson staining showed that the number of collagen fibers in miRNA-33a antago-miR+EG was significantly decreased. The muscle fibers are arranged in a relatively orderly manner. Compared with EG， the collagen volume integral of the miRNA-33a antago-miR+EG significantly decreased（P<0.05）. 4） Western blot analysis showed that transfection of miRNA-33a mimics increased the expression/content of type I， type III collagen and CTGF in CFb cells at mRNA/protein level （P<0.05）; transfection of miRNA-33a inhibitor The expression/content of type I， type III collagen and CTGF decreased at the mRNA/protein level（P<0.05）. 5. Western blot analysis showed that miRNA-33a mimics significantly increased a-SMA protein content in CFb cells（P<0.05）. Transfection of miRNA-33a inhibitor significantly decreased a-SMA protein content in CFb cells（P<0.05）. Conclusion： miRNA-33a can significantly improve the pathological process of myocardial fibrosis resulted from marathon. It provides a good target for intervention for subsequent research.

Keywords：miRNA-33a; marathon; myocardial fibrosis; cardiac fibroblasts

近年來(lái)，因馬拉松跑引發(fā)運(yùn)動(dòng)損傷甚至猝死的案例逐年增加，這引發(fā)了研究者對(duì)馬拉松跑及長(zhǎng)跑訓(xùn)練對(duì)心臟是否會(huì)造成病理性損傷的質(zhì)疑[1-3]。自2011年有研究提出各類耐力性運(yùn)動(dòng)可能會(huì)造成心肌纖維化（簡(jiǎn)稱“MF”）損傷以來(lái)，近年又有研究顯示，以馬拉松為典型的長(zhǎng)期大強(qiáng)度耐力訓(xùn)練可誘發(fā)MF，馬拉松運(yùn)動(dòng)員的MF發(fā)生率顯著高于一般人[2，4]。還有研究顯示：MF是多種心血管疾病的病理生理基礎(chǔ)，譬如心肌病、高血壓、惡性心律失常和心功能不全等[5]。MF的發(fā)生與心肌炎癥反應(yīng)、心肌細(xì)胞凋亡和自噬等均有關(guān)[6-7]。例如，馬拉松的大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練，可能促使機(jī)體因細(xì)胞因子活化等，激活上述機(jī)制，導(dǎo)致心臟成纖維細(xì)胞（簡(jiǎn)稱“CFb”）分化為心臟肌成纖維細(xì)胞（簡(jiǎn)稱“CMF”），這種肌成纖維細(xì)胞的繁殖活性和膠原蛋白合成能力比靜息狀態(tài)下的CFb顯著增強(qiáng)，膠原蛋白過(guò)度堆積，即可導(dǎo)致心肌纖維化的發(fā)生[5，8]，但具體作用機(jī)制有待深入開(kāi)展運(yùn)動(dòng)性心肌纖維化的病理研究予以明確。

微小核糖核酸（miRNA）是內(nèi)源性的非編碼RNA，通過(guò)識(shí)別并結(jié)合在其基因3-末端未翻譯區(qū)的互補(bǔ)序列，從而在轉(zhuǎn)錄后水平上抑制該基因的變化。miRNA參與多種生物功能過(guò)程，譬如細(xì)胞繁殖、分化和死亡、機(jī)體新陳代謝、血管生成等，是重要的基因表達(dá)調(diào)控過(guò)程之一。由此可見(jiàn)，研究miRNA參與心肌纖維化的病理生理過(guò)程可為干預(yù)馬拉松所致MF提供理論參考。目前已發(fā)現(xiàn)多種miRNA參與調(diào)控心肌纖維化過(guò)程，諸如miRNA-21、miRNA-45可以促進(jìn)心肌纖維化的發(fā)生，而miRNA-24、miRNA-29、miRNA-101和miRNA-133a可抑制心肌纖維化的發(fā)生[9-11]。其中，miRNA-33a在CFb中表達(dá)多樣，有研究發(fā)現(xiàn)其與高密度脂蛋白膽固醇的代謝相關(guān)，抑制miRNA-33a可抑制線粒體呼吸過(guò)程和ATP產(chǎn)生，且能促使ABCA1變化，從而能抑制巨噬細(xì)胞膽固醇外流，抑制動(dòng)脈粥樣硬化的形成，由此推斷，miRNA-33a可能是潛在的馬拉松所致MF的干預(yù)靶點(diǎn)[12]。

本研究通過(guò)動(dòng)物學(xué)及細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)探討miRNA-33a對(duì)馬拉松跑所致心肌纖維化的調(diào)控作用，以期明確miRNA-33a在其中的作用機(jī)制。

1? ?實(shí)驗(yàn)器材及方法

1.1? 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

選取SPF級(jí)雄性SD大鼠50只，由南方醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供（質(zhì)量合格證編號(hào)：11651301251428）。大鼠飼養(yǎng)于南方醫(yī)科大學(xué)中心實(shí)驗(yàn)室，飼養(yǎng)環(huán)境為清潔級(jí)，溫度維持在20 ～22 ℃。分籠飼養(yǎng)，每籠2只，每周換墊料、消毒籠具2次，飼養(yǎng)至體質(zhì)量為220 ～250 g時(shí)備用。

1.2? 實(shí)驗(yàn)儀器及耗材

實(shí)驗(yàn)儀器及耗材包括：超凈工作臺(tái)、酶標(biāo)儀、二氧化碳培養(yǎng)箱、倒置顯微鏡、恒溫水浴鍋、水平離心機(jī)、低溫高速離心機(jī)、渦旋混勻器、眼科剪、眼科鑷、磁力攪拌器、PH計(jì)、純水儀、陶瓷研磨器、western blot電泳儀、電轉(zhuǎn)儀、western blot電泳槽及電轉(zhuǎn)夾、水平搖床、成像儀、稱量天平、超聲破碎儀、紫外檢測(cè)儀、制冰機(jī)、PCR儀、4 ℃冰箱、-20 ℃冰箱、-80 ℃冰箱等。

1.3? 實(shí)驗(yàn)建模

適應(yīng)性飼養(yǎng)大鼠1 周后開(kāi)始進(jìn)行馬拉松跑適應(yīng)性訓(xùn)練。馬拉松跑的條件：封閉小動(dòng)物平板跑臺(tái)儀，跑道長(zhǎng)為340 mm、寬為135 mm，并外罩有機(jī)玻璃，主動(dòng)軸與驅(qū)動(dòng)電機(jī)相連。依據(jù)Bedford[13]研制的大鼠跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)負(fù)荷等級(jí)表，設(shè)為5級(jí)運(yùn)動(dòng)負(fù)荷，每級(jí)速度分別為8 m/min、16 m/min、20 m/min、24 m/min、27 m/min，每級(jí)跑道傾角分別為0 °、5 °、10 °、10 °、10 °，在1 min內(nèi)勻速遞增至下一級(jí)，直至第5級(jí)。通過(guò)每天45 min跑臺(tái)適應(yīng)性訓(xùn)練后剔除不適應(yīng)大鼠。將剩余大鼠依照隨機(jī)數(shù)字表法分為3組：對(duì)照組（簡(jiǎn)稱“CG”）、實(shí)驗(yàn)組（簡(jiǎn)稱“EG”）、miRNA-33a拮抗劑注射實(shí)驗(yàn)組（簡(jiǎn)稱“miRNA-33a+EG”）。

CG大鼠正常飼養(yǎng)不予任何處理，并傳代CG的心臟成纖維細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn);EG大鼠于平板跑臺(tái)儀進(jìn)行馬拉松跑模擬訓(xùn)練6周，于大鼠力竭時(shí)取出休息10 min后恢復(fù)訓(xùn)練，確保每日分次訓(xùn)練時(shí)間之和不少于120 min;miRNA-33a antago-miR+EG大鼠則于訓(xùn)練前3天根據(jù)大鼠的體質(zhì)量，將200 pMoL/kg的miRNA-33a antago-miR稀釋于1 mL滅菌PBS溶液，予大鼠以尾靜脈注射，連續(xù)3天后開(kāi)始進(jìn)行馬拉松跑訓(xùn)練，訓(xùn)練方案同EG。

1.4? 超聲心動(dòng)儀

馬拉松跑訓(xùn)練6周后用超聲心動(dòng)儀檢查各組大鼠的心功能狀況：通過(guò)腹腔注射戊巴比妥鈉溶液誘導(dǎo)麻醉，誘導(dǎo)麻醉成功的表征為呼吸頻率變慢、四肢緊張度降低、夾趾反應(yīng)陰性。之后，仰臥位固定大鼠，大鼠左前胸部皮膚涂抹耦合劑，固定超聲探頭后進(jìn)行M型和B型超聲檢查，分別采集圖像3次。超聲檢查過(guò)程中要注意大鼠的呼吸頻率和心率，避免過(guò)度按壓探頭引起呼吸、心跳驟停。本論文的檢測(cè)指標(biāo)主要包括左心室射血分?jǐn)?shù)（簡(jiǎn)稱“LVEF”）和左心室短軸縮短率（簡(jiǎn)稱“LVFS”），以分析馬拉松跑導(dǎo)致心肌纖維化對(duì)心功能的影響程度。

1.5? 病理組織學(xué)染色

超聲檢查結(jié)束后，對(duì)各組大鼠進(jìn)行心臟取材。使用Q-PCR檢測(cè)各組大鼠左心室心肌miRNA-33a的變化情況。使用石蠟包埋、切片之后，使用HE染色觀察各組大鼠左心室各類心肌細(xì)胞的形態(tài)差異，使用Masson染色觀察各組大鼠左心室各類纖維的形態(tài)差異。

1.6? 細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)

本研究的細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)分為4組：空白對(duì)照組（簡(jiǎn)稱“BCG”）、陰性對(duì)照組（簡(jiǎn)稱“NCG”）、miRNA-33a模擬物轉(zhuǎn)染組、miRNA-33a抑制劑轉(zhuǎn)染組。

傳代CG大鼠的CFb進(jìn)行細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)。轉(zhuǎn)染前一日采用6孔板對(duì)消化細(xì)胞進(jìn)行接種，細(xì)胞數(shù)量為2×105孔，細(xì)胞培養(yǎng)基為1 500 μL。次日，當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)50%～70%時(shí)再進(jìn)行轉(zhuǎn)染。用250 μL無(wú)血清OPti-MEM培養(yǎng)基分別稀釋5 μL miRNA-33a的模擬物和抑制劑，緩慢混勻，在室溫下孵化5 min。用250 μL無(wú)血清OPti-MEM培養(yǎng)基稀釋4 μL脂質(zhì)體Lipofectamin 2000，緩慢混勻，在室溫下孵化5 min。將稀釋的miRNA-33a 的模擬物和抑制劑分別與Lipofectamin 2000充分混勻，混合液置于室溫下孵化20 min，將混合液倒入含有1 500 μL細(xì)胞培養(yǎng)基的培養(yǎng)孔中，緩慢混勻。靜置于37 ℃的二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)，每隔4～6 h換溶液，miRNA-33a 的模擬物和抑制劑的最大濃度應(yīng)為50 Nm，在轉(zhuǎn)染48～72 h后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

使用Q-PCR檢測(cè)各組細(xì)胞miRNA-33a的變化;然后使用Q-PCR、Western blot檢測(cè)膠原蛋白的主要成分，即Ⅰ型膠原蛋白（CollagenⅠ）、Ⅲ型膠原蛋白（CollagenⅢ）及其編碼蛋白Col1A1/Col3A1的差異，另檢測(cè)促CFb細(xì)胞活化并合成膠原蛋白的結(jié)締組織生長(zhǎng)因子（簡(jiǎn)稱“CTGF”）的差異;使用Western blot檢測(cè)肌動(dòng)蛋白-α（簡(jiǎn)稱“a-SMA”）的變化以明確CFb細(xì)胞分化為CMF的情況。

1.7? 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用Excel 2016軟件建立數(shù)據(jù)庫(kù)，使用雙次錄入法以完成數(shù)據(jù)核對(duì)與邏輯糾錯(cuò)?；赟PSS21.0軟件完成數(shù)據(jù)處理，設(shè)定雙側(cè)P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)計(jì)量數(shù)據(jù)進(jìn)行Kolmogorov-Smirnov檢驗(yàn)：符合正態(tài)分布的計(jì)量數(shù)據(jù)表示為均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD/SEM），兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用SNK法;不符合正態(tài)分布的計(jì)量數(shù)據(jù)以中位數(shù)及四分位數(shù)表示，兩組間及多組間比較采用秩和檢驗(yàn)。

2? ?研究結(jié)果

2.1? 實(shí)驗(yàn)建模

剔除未通過(guò)適應(yīng)性訓(xùn)練的4只大鼠，剩余大鼠被隨機(jī)分入3組，其中：CG為18只、EG及miRNA-33a+EG分別為14只，在實(shí)驗(yàn)建模6周后完成實(shí)驗(yàn)。

2.2? 超聲心動(dòng)檢測(cè)結(jié)果

各組大鼠的心功能狀況：相比CG大鼠，EG大鼠的LVEF及LVFS均顯著下降（P<0.05）;相比EG大鼠，miRNA-33a+EG大鼠LVEF及LVFS均顯著提高（P<0.05），如圖1所示。

2.3? 心肌組織病理組織學(xué)分析結(jié)果

與EG大鼠相比，miRNA-33a+EG大鼠的心肌纖維結(jié)構(gòu)紊亂得到緩解，且肌細(xì)胞體積明顯縮小。使用Masson染色觀察各組大鼠左心室各類肌纖維的形態(tài)差異：與EG相比，miRNA-33a +EG膠原纖維數(shù)量顯著減少，心肌纖維排列相對(duì)有序。進(jìn)一步使用IPP6.0分析Masson染色結(jié)果顯示：與EG相比，miRNA-33a +EG膠原容積分?jǐn)?shù)顯著減少（P<0.05）。如圖2所示。

2.4? 細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

分離、傳代、轉(zhuǎn)染CFb細(xì)胞之后，Q-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示：轉(zhuǎn)染miRNA-33a模擬物能顯著上調(diào)CFb細(xì)胞的miRNA-33a水平（P<0.05），轉(zhuǎn)染miRNA-33a抑制劑則顯著下調(diào)CFb細(xì)胞的miRNA-33a水平（P<0.05）。這說(shuō)明細(xì)胞學(xué)模型造模成功?；诩?xì)胞學(xué)模型進(jìn)一步檢測(cè)得出如下結(jié)果：1）使用Q-PCR檢測(cè)各組Col1A1、Col3A1及其CTGF的mRNA的水平。相比BCG和NCG，轉(zhuǎn)染miRNA-33a模擬物后，上述指標(biāo)的mRNA均顯著增長(zhǎng)（P<0.05）;相比BCG和NCG，轉(zhuǎn)染miRNA-33a抑制劑后，上述指標(biāo)的mRNA均顯著減少（P<0.05），如圖3所示。2）使用western-blot檢測(cè)各組CollagenⅠ、CollagenⅢ及其CTGF的蛋白含量，其結(jié)果與mRNA變化規(guī)律一致，即：相比BCG和NCG，轉(zhuǎn)染miRNA-33a模擬物后，上述指標(biāo)的蛋白含量均顯著增加（P<0.05）;相比BCG和NCG，轉(zhuǎn)染miRNA-33a抑制劑后，上述指標(biāo)的蛋白含量均顯著減少（P<0.05），如圖4所示。3）相比BCG和NCG，miRNA-33a模擬物轉(zhuǎn)染組的CFb細(xì)胞的α-SMA顯著增加（P<0.05）;相比BCG和NCG，miRNA-33a抑制劑可在蛋白水平抑制CFb細(xì)胞的α-SMA顯著減少（P<0.05），如圖5所示。

3? ?討論

在進(jìn)行馬拉松跑時(shí)，缺氧等可導(dǎo)致心肌組織中各種膠原纖維蛋白堆積、Ⅰ型膠原蛋白纖維、Ⅲ型膠原蛋白纖維的比例嚴(yán)重失調(diào)，心室壁僵硬度增加、心室壁運(yùn)動(dòng)功能逐漸失調(diào)、心室順應(yīng)性降低，在早期可引起舒張功能障礙，逐漸地可導(dǎo)致心室收縮功能減弱，從而引起心肌纖維化、惡性心力衰竭的發(fā)生。

隨著CFb大量分化為CMF，其繁殖能力顯著增強(qiáng)，分泌合成Ⅰ型膠原蛋白、Ⅲ型膠原蛋白、CTGF等的能力顯著提高，顯著加速了馬拉松跑所致心肌纖維化的發(fā)生，因此，尋找到能夠抑制CFb繁殖、合成膠原蛋白、分化的靶點(diǎn)，對(duì)延緩或抑制馬拉松跑導(dǎo)致的心肌纖維化的病變過(guò)程，具有十分重要的臨床意義。

目前，有研究發(fā)現(xiàn)，多種miRNA參與調(diào)控心肌纖維化過(guò)程，諸如miRNA-21可以促使心肌纖維化的發(fā)生，而miRNA-24、miRNA-29、miRNA-101和miRNA-133a可抑制心肌纖維化的發(fā)生[14]。由此可見(jiàn)，研究miRNA參與心肌纖維化的病理生理過(guò)程可為臨床干預(yù)心肌纖維化確定新的治療方案。另有研究顯示：miRNA-33a在心臟成纖維細(xì)胞中變化多樣，與高密度脂蛋白膽固醇的代謝相關(guān)，抑制miRNA-33a的變化可抑制線粒體呼吸過(guò)程和ATP產(chǎn)生，且能增加ABCA1的表達(dá)，從而能抑制巨噬細(xì)胞膽固醇外流，抑制動(dòng)脈粥樣硬化的形成，由此可見(jiàn)，miRNA-33a可能是一個(gè)潛在的心血管疾病的干預(yù)靶點(diǎn)[15-16]。然而，miRNA-33a對(duì)于馬拉松跑所致MF的影響尚未見(jiàn)有研究。

鑒于此，本研究進(jìn)行了動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)，試圖初步探討miRNA-33a對(duì)于馬拉松跑所致MF的調(diào)控機(jī)制：在動(dòng)物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，拮抗劑miRNA-33a顯著改善馬拉松跑導(dǎo)致心肌纖維化大鼠的心功能，并緩解心肌組織的病理學(xué)變化;細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)，miRNA-33a具有增強(qiáng)CFb細(xì)胞分泌膠原蛋白的能力，并能促進(jìn)CFb細(xì)胞分化為CMF細(xì)胞，以進(jìn)一步加速M(fèi)F進(jìn)程;抑制miRNA-33a變化可以在細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)中得到相應(yīng)的反向結(jié)果。該結(jié)果顯示，miRNA-33a通過(guò)影響CFb細(xì)胞分化，促進(jìn)其合成膠原蛋白，從而加快馬拉松跑導(dǎo)致心肌纖維化的進(jìn)程，構(gòu)成后續(xù)心血管疾病的病理生理基礎(chǔ)。

4? ?結(jié)論

通過(guò)建立馬拉松跑訓(xùn)練的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，研究結(jié)果顯示，長(zhǎng)期大強(qiáng)度的馬拉松跑訓(xùn)練可導(dǎo)致心肌纖維化。從miRNA-33a這一作用靶點(diǎn)探討其中的病理生理機(jī)制，為進(jìn)一步揭示馬拉松跑所致MF的發(fā)生機(jī)制、預(yù)防機(jī)制、干預(yù)途徑奠定了一定的理論基礎(chǔ)。后續(xù)有必要深入開(kāi)展運(yùn)動(dòng)性心肌纖維化病理與發(fā)病機(jī)制研究。

參考文獻(xiàn)：

[1]常蕓.運(yùn)動(dòng)性心律失常研究現(xiàn)狀與展望[J].中國(guó)運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)雜志，2015，34（1）：59.

[2]? 陳雷.高強(qiáng)度馬拉松訓(xùn)練后AngⅡ介導(dǎo)小鼠心肌細(xì)胞損傷中TLR4信號(hào)通路的作用[J]. 北京體育大學(xué)學(xué)報(bào)，2016，39（12）：56.

[3]? 劉長(zhǎng)江，武洋，邵培培，等. 馬拉松力竭對(duì)冠脈結(jié)扎致大鼠慢性心衰模型的優(yōu)化[J]. 中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2017，22（12）：1340.

[4]? 黃傳業(yè)，聶金雷，田野. 運(yùn)動(dòng)引起心肌肌鈣蛋白T釋放：心肌可逆性損傷的證據(jù)與心肌適應(yīng)性改變的信號(hào)[J]. 中國(guó)運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)雜志，2012，31（8）：723.

[5]? ZHANG D， CUI Y， LI B， et al. MiR-155 regulates high glucose-induced cardiac fibrosis via the TGF-β signaling pathway[J]. Molecular Biosystems， 2016， 13（1）： 215.

[6]? LIU X， XU Y， DENG Y， et al. MicroRNA-223 regulates cardiac fibrosis after myocardial infarction by targeting rasa1[J]. Cellular Physiology & Biochemistry， 2018， 46（4）： 1439.

[7]? BOON R A， IEKUSHI K， LECHNER S， et al. MicroRNA-34a regulates cardiac ageing and function[J]. Nature， 2013， 495（7439）： 107.

[8]? XU X， TAN X， TAMPE B， et al. Epigenetic balance of aberrant rasal1 promoter methylation and hydroxymethylation regulates cardiac fibrosis[J]. Cardiovascular Research， 2015， 105（3）： 279.

[9]? COELHO L L ， PEREIRA I R ， PEREIRA M C D S ， et al. Trypanosoma? cruzi activates mouse cardiac fibroblasts in vitro leading to fibroblast-myofibroblast transition and increase in expression of extracellular matrix proteins[J]. Parasites & Vectors， 2018， 11（1）： 72.

[10]? LIU Y， ZHAO D， QIU F， et al. Manipulating PML sumoylation via silencing UBC9 and RNF4 regulates cardiac fibrosis[J]. Molecular Therapy the Journal of the American Society of Gene Therapy， 2017， 25（3）： 666.

[11]? HUANG Y， QI Y， DU J Q， et al. MicroRNA-34a regulates cardiac fibrosis after myocardial infarction by targeting smad4[J]. Expert Opin Ther Targets， 2014， 18（12）： 1355.

[12]? MATKOVICH S J， WANG W， TU Y， et al. MicroRNA-133a protects against myocardial fibrosis and modulates electrical repolarization without affecting hypertrophy in pressure-overloaded adult hearts[J].? Circulation Research， 2010， 106（1）： 166.

[13]? BEDFORD T G， TIPTON C M， WILSON N C， et al. Maximal oxygen consumption of rats and its changes with various experimental procedures[J]. Journal of Applied Physiology Respiratory Environmental & Exercise Physiology， 1979，47（6）： 1278.

[14]? SUN L， MOCHLY-ROSEN D. Protein kinase Cε regulates histone deacetylase 6 in cardiac fibrosis journal of cardiac failure[J]. Journal of Cardiac Failure， 2008， 14（6）： 78.

[15]? DAI B， CUI M， ZHU M， et al. STAT1/3 and ERK1/2 synergistically regulate cardiac fibrosis induced by high glucose[J]. Cellular Physiology & Biochemistry International Journal of Experimental Cellular Physiology Biochemistry & Pharmacology， 2013， 32（4）： 960.

[16]? KIM J， KIM J， LEE S H， et al. Cytokine-like 1 regulates cardiac fibrosis via modulation of TGF-β signaling[J]. Plos One， 2016， 11（11）： 166480.