■肖再利 譚清甜，2 陳家烙 Daniel Sindaye 盧亞萍 鄧百川*

（1.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，廣東廣州510642；2.清遠(yuǎn)市廣生元畜牧發(fā)展有限公司，廣東清遠(yuǎn)511500；3.杭州市康源飼料科技有限公司，浙江杭州310051）

溶菌酶又稱為胞壁質(zhì)酶，是一種在人和動(dòng)物機(jī)體中廣泛存在的酶[1]，它能夠分解細(xì)菌細(xì)胞壁肽聚糖層結(jié)構(gòu)中的β-1，4 糖苷鍵，從而破壞細(xì)胞壁骨架，導(dǎo)致細(xì)菌死亡[2-3]，因而在抗菌方面尤其是抑制革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌中發(fā)揮著重要作用。有研究報(bào)道，溶菌酶還能夠增強(qiáng)機(jī)體抵抗力和促進(jìn)腸道有益菌的繁殖[4]，尤其是具有對(duì)人類和畜禽無毒副作用和無藥害殘留等優(yōu)點(diǎn)[5]，因而得到了相關(guān)從業(yè)者的密切關(guān)注[6]。例如，美國(guó)農(nóng)業(yè)部研究中心研究發(fā)現(xiàn)在豬飼糧中添加溶菌酶可有效改善豬的生長(zhǎng)性能[7]，Ma等[8]和宋忠柯[9]分別在21 日齡斷奶仔豬和肉雛雞飼糧中添加溶菌酶發(fā)現(xiàn)顯著提高了飼料轉(zhuǎn)化率。楊榮芳[10]報(bào)道，添加溶菌酶可顯著提高蛋雞的產(chǎn)蛋率和平均蛋重水平，這些研究均表明溶菌酶可作為新型飼料添加劑應(yīng)用到畜禽生產(chǎn)中。但目前為止，溶菌酶在蛋雞上的相關(guān)報(bào)道較少。因此，本試驗(yàn)旨在探究飼糧中添加溶菌酶對(duì)產(chǎn)蛋高峰期蛋雞的生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)和血清生化指標(biāo)的影響，確定溶菌酶的適宜添加水平，為溶菌酶在蛋雞生產(chǎn)上的應(yīng)用提供一定的科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

本試驗(yàn)所使用的溶菌酶，通過基因工程和液體發(fā)酵工藝獲得，溶菌酶純度約10%，酶活力為3 110 U/mg，由浙江艾杰斯生物科技有限公司提供。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及飼糧組成

試驗(yàn)采用單因子隨機(jī)設(shè)計(jì)，選取360只產(chǎn)蛋率和體重相近的40 周齡京粉1 號(hào)蛋雞，隨機(jī)分成4 組，每組6 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)15 只雞。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)組分別在基礎(chǔ)飼糧中添加200、350 mg/kg 和500 mg/kg 溶菌酶。預(yù)試期7 d，正式試驗(yàn)期28 d?；A(chǔ)飼糧為參照NRC（1994）需要配制的粉狀配合飼料，其基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平如表1 所示。試驗(yàn)地點(diǎn)為清遠(yuǎn)廣生元畜牧發(fā)展有限公司的蛋雞養(yǎng)殖基地。

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)雞舍為半開放式雞舍，3 層階梯式籠養(yǎng)，3 只/籠。每天喂料兩次（7:00、15:30），自由采食和飲水，15:00 準(zhǔn)時(shí)收集雞蛋。試驗(yàn)期間舍內(nèi)溫度為23～30 ℃，自然通風(fēng)結(jié)合縱向負(fù)壓通風(fēng)，舍內(nèi)每天光照15 h，主要采用自然光照，早晚為人工光照，每天清理糞便1次，勻料3次，常規(guī)免疫，每3 d進(jìn)行禽舍消毒1次。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

1.4 指標(biāo)測(cè)定與方法

1.4.1 生產(chǎn)性能

試驗(yàn)期間每天以重復(fù)為單位記錄喂料量、產(chǎn)蛋數(shù)量和產(chǎn)蛋總重，每周末進(jìn)行結(jié)料，計(jì)算產(chǎn)蛋率、平均日采食量、料蛋比、平均日產(chǎn)蛋量和平均蛋重。

1.4.2 蛋品質(zhì)

正式試驗(yàn)第28 d，每重復(fù)取10枚外形完好、大小基本一致的雞蛋用于蛋品質(zhì)檢測(cè)。依次使用游標(biāo)卡尺、蛋殼強(qiáng)度測(cè)定儀（Egg Force Reader，Orka Technology Ltd.）、蛋品質(zhì)分析儀(Egg NnalyzerTM，Orka Technology Ltd.)和螺旋測(cè)微儀測(cè)定蛋形指數(shù)、蛋殼強(qiáng)度、蛋黃顏色和哈氏單位等指標(biāo)；每重復(fù)隨機(jī)取2枚雞蛋的蛋黃樣，使用比色皂化法[11]測(cè)定蛋黃膽固醇含量。

1.4.3 血清生化指標(biāo)

正式試驗(yàn)第28 d，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選擇2 只雞，空腹12 h 后翅靜脈采血各4 ml 左右，待血清析出后3 000 r/min 離心10 min，分裝的血清樣于-80 ℃保存。血清尿素氮（BUN）、尿酸（UA）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、白蛋白（ALB）、總蛋白（TP）、甘油三酯（TG）和總膽固醇（TC）含量均使用雷杜全自動(dòng)生化分析儀Chemray 240測(cè)定。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 2010 初步進(jìn)行統(tǒng)計(jì)后，采取SPSS 25.0 進(jìn)行單因素方差分析，多重比較用Duncan's法，結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示，P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼糧中添加溶菌酶對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的影響（見表2）

表2 溶菌酶對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的影響

從表2 可見，與對(duì)照組相比，飼糧添加200、350、500 mg/kg 溶菌酶顯著降低了蛋雞平均日采食量（P＜0.05），而對(duì)產(chǎn)蛋率、平均日產(chǎn)蛋量和平均蛋重均無顯著影響（P＞0.05），飼糧添加200 mg/kg 溶菌酶料蛋比降低了3.4%（P＞0.05），為各組最低值。

2.2 飼糧中添加溶菌酶對(duì)蛋雞蛋品質(zhì)的影響(見表3)

表3 溶菌酶對(duì)蛋雞蛋品質(zhì)的影響

從表3可見，與對(duì)照組相比，飼糧添加350 mg/kg溶菌酶，雞蛋的哈氏單位在數(shù)值上有所提高，但差異不顯著（P＞0.05），隨著溶菌酶添加水平的提高，蛋黃膽固醇含量逐漸降低，飼糧添加500 mg/kg溶菌酶顯著降低了蛋黃膽固醇的含量（P＜0.05）。飼糧添加200、350 mg/kg和500 mg/kg溶菌酶對(duì)蛋雞的蛋形指數(shù)、蛋殼強(qiáng)度、蛋白高度、蛋黃顏色和蛋殼厚度均無顯著影響（P＞0.05）。

2.3 飼糧中添加溶菌酶對(duì)蛋雞血清生化指標(biāo)的影響(見表4)

從表4 可見，與對(duì)照組相比，隨著溶菌酶添加水平的提高，蛋雞血清尿酸含量和總膽固醇含量逐漸降低，飼糧添加500 mg/kg 溶菌酶顯著降低了血清尿酸和總膽固醇含量（P＜0.05）。飼糧添加200、350 mg/kg和500 mg/kg 溶菌酶對(duì)蛋雞血清中的尿素氮、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、白蛋白、總蛋白和甘油三酯含量均無顯著影響（P＞0.05）。

表4 溶菌酶對(duì)蛋雞血清生化指標(biāo)的影響

2.4 飼糧中添加溶菌酶對(duì)蛋雞經(jīng)濟(jì)效益的影響(見表5)

由表5 可知，在試驗(yàn)期內(nèi)，基礎(chǔ)飼糧價(jià)格和雞蛋價(jià)格大致為2.5 元/kg 和9 元/kg，該溶菌酶參考價(jià)格為100 元/kg，隨著溶菌酶添加水平的提高，飼料的單價(jià)成本逐漸上升，200、350 mg/kg 和500 mg/kg 溶菌酶組飼料成本比對(duì)照組分別降低了0.270、0.207 元/只和0.063 元/只。與對(duì)照組相比較，200 mg/kg 溶菌酶組每只蛋雞利潤(rùn)提高了0.207 元/只，350 mg/kg 和500 mg/kg 溶菌酶組利潤(rùn)分別減少了0.466 元/只和0.093 元/只。

表5 飼料成本與利潤(rùn)

3 討論

3.1 飼糧中添加溶菌酶對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的影響

在養(yǎng)殖蛋雞的過程中，生產(chǎn)性能是評(píng)價(jià)經(jīng)濟(jì)效益的一個(gè)重要指標(biāo)，也是評(píng)價(jià)飼料添加劑效果的重要指標(biāo)。本試驗(yàn)表明，飼糧添加200、350 mg/kg和500 mg/kg溶菌酶對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋率、平均日產(chǎn)蛋量和平均蛋重均無顯著影響，添加200 mg/kg 溶菌酶料蛋比降低了3.4%，這與前人研究結(jié)果不盡相同，楊榮芳[10]發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加溶菌酶可顯著提高蛋雞產(chǎn)蛋率，Yun 等[12]和Gong 等[13]研究結(jié)果表明，肉雞飼糧中添加溶菌酶對(duì)生長(zhǎng)性能無顯著影響，而目前有部分在肉雞[14-15]、肉雛雞[16]、肉鴨[17-18]、斷奶仔豬[8，19]的報(bào)道均表明，飼糧中添加溶菌酶能提高畜禽的生長(zhǎng)性能，這可能是與本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)添加溶菌酶以后顯著降低了蛋雞平均日采食量以及飼養(yǎng)時(shí)間過短有關(guān)。邵春榮等[20]在飼糧中添加4～100 mg/kg蛋清溶菌酶（1 200 U/mg）、張世卿等[21]在飼糧中添加300～600 mg/kg溶菌酶（1 000 U/mg）和Torki等[22]在飼糧中添加40 mg/kg蛋清溶菌酶（純度≥90%）的結(jié)果均顯示，添加溶菌酶降低了肉仔雞的平均日采食量，這與本試驗(yàn)結(jié)果相似。但May 等[23]在流質(zhì)飲食中添加溶菌酶（100 mg/l）飼喂斷奶仔豬和Xu等[24]在飼糧中添加150 mg/kg和300 mg/kg溶菌酶（5 000 U/mg）飼喂哺乳母豬時(shí)發(fā)現(xiàn)，飼糧添加溶菌酶均可顯著提高其平均日采食量，這與本研究結(jié)果不同。造成上述試驗(yàn)結(jié)果差異的原因也許是本試驗(yàn)使用的溶菌酶產(chǎn)品有發(fā)酵后的味道，添加到基礎(chǔ)飼糧后其氣味和味道改變，從而降低采食量，另外溶菌酶的加工工藝、純度和酶活力不同，試驗(yàn)的畜禽、品種和日齡也不同。本試驗(yàn)表明，溶菌酶添加在蛋雞飼糧中應(yīng)保持在適量水平。

3.2 飼糧中添加溶菌酶對(duì)蛋雞蛋品質(zhì)的影響

蛋品質(zhì)是評(píng)價(jià)雞蛋優(yōu)劣的一項(xiàng)重要指標(biāo)，近年來，由于消費(fèi)意識(shí)的提高，消費(fèi)者更傾向購(gòu)買蛋白濃厚、蛋黃顏色更深、蛋殼質(zhì)量好的雞蛋[25]。雞蛋的蛋清品質(zhì)一般用蛋白高度和哈氏單位來判定，其數(shù)值越高表示雞蛋新鮮程度和口感越好[26]。本試驗(yàn)表明，飼糧添加350 mg/kg 溶菌酶飼喂蛋雞，雞蛋的哈氏單位在數(shù)值上有所提高。研究表明，溶菌酶的添加可顯著提高十二指腸[14，16，27]和回腸[23]腸絨毛的高度，且能改善腸道菌群的組成[8]。黃群[28]研究發(fā)現(xiàn)，蛋清所含卵白蛋白約占新產(chǎn)雞蛋總蛋白的54%，隨著貯藏時(shí)間的推移卵白蛋白轉(zhuǎn)變成S-卵白蛋白，而S-卵白蛋白含量與哈氏單位負(fù)相關(guān)。鄭彩燕[29]研究表明，卵白蛋白與溶菌酶之間存在相互作用，這些結(jié)果可能與飼糧添加350 mg/kg 溶菌酶影響雞蛋的蛋清品質(zhì)有關(guān)。

蛋雞主要合成膽固醇的器官是肝臟和卵巢，肝臟不僅擔(dān)負(fù)機(jī)體主要膽固醇總合成量且合成速度快，血液總膽固醇也主要來源于此，大部分血液膽固醇隨極低密度脂蛋白通過卵母細(xì)胞原生質(zhì)膜受體介導(dǎo)和吞噬轉(zhuǎn)入蛋黃，由此轉(zhuǎn)化成95%蛋黃總膽固醇[30]。本研究表明，隨著溶菌酶添加水平的提高，蛋黃膽固醇含量逐漸降低，飼糧添加500 mg/kg 溶菌酶顯著降低蛋黃膽固醇含量，這與溶菌酶對(duì)血清總膽固醇含量的影響趨勢(shì)一致，說明可能是因?yàn)槿芫赣行У亟档土搜迥懝檀嫉暮?，從而蛋黃中的膽固醇含量減少[31]。溶菌酶作為一種新型飼料添加劑，目前在蛋品質(zhì)方面的研究較少。在本試驗(yàn)中，飼糧添加溶菌酶對(duì)蛋雞的蛋形指數(shù)、蛋殼強(qiáng)度、蛋殼厚度和蛋黃顏色均無顯著影響，這與楊榮芳[10]在蛋雞上的試驗(yàn)結(jié)果一致。

3.3 飼糧中添加溶菌酶對(duì)蛋雞血清生化指標(biāo)的影響

通過對(duì)試驗(yàn)雞只血清生化指標(biāo)的測(cè)定，能反映其健康水平以及機(jī)體對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收程度和代謝狀態(tài)[32]。尿酸不僅是畜禽機(jī)體代謝產(chǎn)物，還是核酸代謝和氨代謝的關(guān)鍵去路[33-34]。本試驗(yàn)表明，飼糧添加500 mg/kg 溶菌酶顯著降低血清中尿酸含量，可能是由于溶菌酶的添加促進(jìn)了蛋雞對(duì)氮素的利用，加快了蛋白質(zhì)的合成代謝。血清中總膽固醇和甘油三酯的水平與脂類物質(zhì)的代謝相關(guān)，在產(chǎn)蛋高峰期蛋雞中，脂類物質(zhì)不僅為機(jī)體供能，還能為蛋黃的形成提供基礎(chǔ)[35]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧添加500 mg/kg 溶菌酶顯著降低蛋雞血清總膽固醇水平，可能是機(jī)體脂類物質(zhì)的消化代謝加快，飼糧添加溶菌酶能促進(jìn)蛋雞機(jī)體脂類物質(zhì)的代謝。另一方面，蛋雞血液膽固醇大部分隨極低密度脂蛋白轉(zhuǎn)入蛋黃，且蛋雞血清總膽固醇與蛋黃膽固醇含量的變化趨勢(shì)一致，說明飼糧添加500 mg/kg 溶菌酶蛋黃膽固醇含量的降低可能是由于其血清膽固醇含量的降低。蛋雞產(chǎn)蛋性能主要受下丘腦-垂體-卵巢軸調(diào)控，其中促性腺激素釋放激素是重要因子，雌激素可直接和間接作用于促性腺激素釋放激素神經(jīng)元，從而誘導(dǎo)和調(diào)節(jié)其合成與分泌，影響產(chǎn)蛋性能[30]。本試驗(yàn)表明，隨著溶菌酶添加水平的提高，血清總膽固醇含量和產(chǎn)蛋率變化趨勢(shì)一致，說明血清膽固醇含量的降低可能與雌激素的水平有關(guān)，進(jìn)而影響蛋雞產(chǎn)蛋率，具體原因有待進(jìn)一步分析。

血清總蛋白包括白蛋白和球蛋白，白蛋白在肝臟形成，而球蛋白是反映機(jī)體免疫能力的指標(biāo)[36]。有研究表明，日糧中添加溶菌酶，能夠提高肉仔雞血清總蛋白[37]和白蛋白的含量[9,21]，可能是溶菌酶能加強(qiáng)畜禽機(jī)體蛋白質(zhì)吸收和代謝能力[38]。本試驗(yàn)中，飼糧中添加溶菌酶對(duì)蛋雞血清的尿素氮、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、白蛋白、總蛋白和甘油三酯的含量無顯著影響，可能是飼養(yǎng)周期短，溶菌酶中的有效成分發(fā)揮作用的時(shí)間更長(zhǎng)，也可能和試驗(yàn)雞的健康狀況相關(guān)[39]。

3.4 飼糧中添加溶菌酶對(duì)蛋雞經(jīng)濟(jì)效益的影響

經(jīng)濟(jì)效益直接反映了溶菌酶在蛋雞生產(chǎn)中的應(yīng)用效果。按照蛋雞試驗(yàn)期市場(chǎng)價(jià)格，隨著飼料成本的提高，與對(duì)照組相比較，200 mg/kg溶菌酶組每只蛋雞利潤(rùn)提高了0.207 元/只，350 mg/kg 和500 mg/kg 溶菌酶組利潤(rùn)分別減少了0.466元/只和0.093元/只。由此可知，飼糧添加200 mg/kg溶菌酶經(jīng)濟(jì)效益最高。

4 結(jié)論

飼糧添加200、350 mg/kg 和500 mg/kg 溶菌酶可顯著降低蛋雞的平均日采食量，添加200 mg/kg 溶菌酶對(duì)產(chǎn)蛋率無顯著影響，可降低料蛋比3.4%，提高了企業(yè)經(jīng)濟(jì)效益，添加500 mg/kg 溶菌酶可顯著降低蛋黃膽固醇含量以及血清尿酸和總膽固醇含量。綜上可見，200 mg/kg 溶菌酶在蛋雞生產(chǎn)上的應(yīng)用效果較好，推薦其為蛋雞飼糧中的合適添加水平。