鄒 芳，王金龍，杜 彪

各種原因致顱內(nèi)血管不暢甚而導(dǎo)致血管發(fā)生閉塞，使血管供血區(qū)域發(fā)生梗死性病灶，即為急性腦梗死[1]。該病發(fā)病急，若患者在患病前就有動脈粥樣硬化、血管狹窄、斑塊形成等病變，將加速急性血栓的形成，進(jìn)而引起腦梗死的急性發(fā)作，對患者腦部神經(jīng)造成不可逆損傷[2]。隨著近年來人們生活水平的不斷提高，急性腦梗死患病率及病死率也逐漸升高[3]。外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)是一種可有效調(diào)節(jié)免疫活性并抑制炎性因子的細(xì)胞亞群，與腦梗死發(fā)生聯(lián)系密切。神經(jīng)元特異烯醇化酶(NSE)位于神經(jīng)細(xì)胞中，參與神經(jīng)的能量代謝，在一定程度上可有效反映神經(jīng)系統(tǒng)損傷情況[4-5]。本研究通過對急性腦梗死患者外周血Treg、NSE水平測定，分析上述兩種因子與患者腦部損傷程度的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年9月—2019年9月本院確診的61例急性腦梗死患者作為研究組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)臨床及影像學(xué)檢查且符合急性腦梗死診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]；②臨床資料完整，無腦梗死病史。排除標(biāo)準(zhǔn)：①存在嚴(yán)重心、腎、肝功能障礙或合并惡性腫瘤、危重并發(fā)癥者；②伴代謝紊亂或免疫、血液系統(tǒng)疾病者；③近1個月內(nèi)服用過干擾本研究指標(biāo)結(jié)果的藥物者；④臨床資料欠缺者。另選擇29例同時(shí)間段來我院體檢的身體健康者作為對照組。研究組男38例，女23例；年齡48～74(67.92±10.23)歲；病程為2～30(23.21±10.15)h；合并高血壓病27例，糖尿病22例，高脂血癥19例。對照組男19例，女10例；年齡49～75(68.21±10.15)歲。兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核通過。

1.2檢測方法 抽取所有入組者清晨空腹靜脈血3 ml，并加入乙二胺四乙酸抗凝處理，離心取血清。①將各受檢者血清分別置入2只流式細(xì)胞試管內(nèi)，每支150 μl，于管內(nèi)分別孵育CD4-PE、FITC-CD25、PE-CD4、FITC-IgG 20 min后，分別加入磷酸鹽緩沖液400 μl及紅細(xì)胞裂解液400 μl混合搖勻，再避光孵育20 min，孵育完成后離心并再次使用磷酸鹽緩沖液500 μl重懸，應(yīng)用流式細(xì)胞儀(美國BD公司生產(chǎn))檢測Treg細(xì)胞數(shù)。②運(yùn)用酶聯(lián)免疫吸附法測定NSE水平，儀器為美國BioRad公司生產(chǎn)的BioRad450酶標(biāo)儀，試劑盒購自德國羅氏公司，嚴(yán)格按說明書進(jìn)行操作。

1.3觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn) ①對比兩組外周血Treg數(shù)目、NSE水平；②對比不同梗死范圍患者外周血Treg數(shù)目、NSE水平；③對比不同程度腦損傷患者外周血Treg數(shù)目、NSE水平；④分析急性腦梗死患者外周血Treg數(shù)目、NSE水平與腦損傷程度的相關(guān)性。梗死灶范圍依據(jù)MRI或頭顱CT檢查結(jié)果，并據(jù)Pullicino公式=長×寬×MRI或掃描陽性層數(shù)/2，計(jì)算梗死灶體積。腦損傷程度根據(jù)美國國立衛(wèi)生研究院卒中量表[7]判定，總分42分，輕型損傷<15分、中型損傷15～29分、重型損傷>29分。

2 結(jié)果

2.1兩組外周血Treg數(shù)目、NSE水平比較 研究組外周血Treg數(shù)目明顯少于對照組，而NSE水平明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見表1。

表1 急性腦梗死及體檢健康者外周血Treg數(shù)目、NSE水平比較

2.2不同梗死范圍患者外周血Treg數(shù)目、NSE水平比較 61例急性腦梗死患者根據(jù)病灶大小進(jìn)行亞組分析，其中病灶<4 cm3為小梗死亞組(27例)，4～10 cm3為中梗死亞組(20例)，≥10 cm3為大梗死亞組(14例)。外周血Treg數(shù)目大梗死亞組<中梗死亞組<小梗死亞組，NSE水平大梗死亞組>中梗死亞組>小梗死亞組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。見表2。

表2 不同梗死范圍的急性腦梗死患者外周血Treg數(shù)目、NSE水平比較

2.3不同程度腦損傷患者外周血Treg數(shù)目、NSE水平比較 外周血Treg數(shù)目輕型亞組>中型亞組>重型亞組，NSE水平輕型亞組<中型亞組<重型亞組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見表3。

表3 不同程度腦損傷的急性腦梗死患者外周血Treg數(shù)目、NSE水平比較

2.4急性腦梗死患者外周血Treg數(shù)目、NSE水平與梗死范圍、腦損傷程度的相關(guān)性分析 經(jīng)Spearman相關(guān)性分析，急性腦梗死患者外周血Treg數(shù)目與梗死范圍、腦損傷程度呈負(fù)相關(guān)，而NSE水平與梗死范圍、腦損傷程度呈正相關(guān)。見表4。

表4 急性腦梗死患者外周血Treg數(shù)目、NSE的表達(dá)與梗死范圍、腦損傷程度的相關(guān)性分析

3 討論

目前腦血管疾病已成為我國病死率、致殘率極高的疾病，近年來隨著人們生活壓力的逐漸加大，該病的患病群體呈年輕化傾向[8]。急性腦梗死是在短時(shí)間內(nèi)血管發(fā)生閉塞，導(dǎo)致相應(yīng)腦組織發(fā)生壞死的一種疾病，而腦神經(jīng)細(xì)胞作為人體中最嬌嫩的細(xì)胞之一，一旦血供完全阻斷持續(xù)8～10 min將對其造成不可逆性傷害[9]。

目前，臨床對于急性腦梗死主要采用溶栓、抗栓、血管內(nèi)治療等手段治療[10]。該病發(fā)病原因及發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，有研究認(rèn)為腦梗死的發(fā)生與動脈栓塞、動脈硬化、代謝性疾病及血液凝血機(jī)制等多種因素有關(guān)[11-12]。當(dāng)腦血管發(fā)生病變，內(nèi)膜損傷、破裂將釋放大量的促凝血因子，加速血小板等血液成分發(fā)生沉著、聚集和黏附，同時(shí)血液中纖維蛋白原、脂蛋白、膽固醇等因子水平上升，導(dǎo)致血液黏度、凝固性增高，血流減慢，致使局部腦組織發(fā)生急性缺血癥狀[13-14]。故分析急性腦梗死患者血管內(nèi)相關(guān)因子水平對該病的治療及預(yù)防有重要意義。

外周血Treg是一種可調(diào)節(jié)免疫功能的T細(xì)胞亞群，有文獻(xiàn)顯示，該因子主要使Th1細(xì)胞分泌受到抑制從而減少炎性細(xì)胞產(chǎn)生，從而有效緩解血管內(nèi)斑塊性質(zhì)改變、延緩顱內(nèi)血管粥樣硬化的發(fā)生，并減輕患者神經(jīng)功能損傷[15-16]。有研究指出，外周血Treg數(shù)目減少與梗死發(fā)生存在緊密聯(lián)系，急性腦梗死患者外周血Treg數(shù)目顯著低于正常人[17]。而本研究結(jié)果驗(yàn)證了該觀點(diǎn)，一定程度上說明當(dāng)Treg數(shù)目減少，機(jī)體對免疫活性的調(diào)節(jié)減弱，血管內(nèi)炎性因子大量釋放促進(jìn)血栓形成、動脈硬化等，從而導(dǎo)致腦組織缺氧缺血。NSE則是廣泛存在于成熟神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞中的特異性蛋白，在腦組織中的含量及活性均遠(yuǎn)高于周圍神經(jīng)組織[18]。相關(guān)研究證明，正常腦組織NSE含量較低，一旦出現(xiàn)缺氧、缺血等病理改變使細(xì)胞膜受損后，腦脊液將釋放大量NSE，致血腦屏障破壞，血中NSE水平大量增加[19-20]。本研究結(jié)果與上述研究一致，進(jìn)一步說明NSE持續(xù)高水平可提示急性腦梗死的發(fā)生。

同時(shí)本研究發(fā)現(xiàn)外周血Treg與NSE的異常表達(dá)與腦組織損傷程度有關(guān)，梗死范圍越大，外周血Treg數(shù)目就越低，NSE表達(dá)越高，提示上述因子的變化與腦組織損傷程度存在相關(guān)性。目前臨床對于急性腦梗死的病變范圍及腦組織損傷程度普遍是借助CT、MRI等影像學(xué)手段進(jìn)行判斷，且具有局限性，存在患者早期診斷失誤的情況[21]。而本研究經(jīng)患者血清學(xué)指標(biāo)檢測可有效判斷病情，提示二者可作為急性腦梗死診斷、治療及預(yù)后評估的指向性指標(biāo)。

綜上，急性腦梗死患者外周血Treg數(shù)目、NSE水平與其梗死范圍及腦組織受損程度具有相關(guān)性，臨床可將二者作為本病診斷、治療及預(yù)后評估的參考指標(biāo)。