郁勝勝 湯文娟 陳姝彤 楊一君

【摘 要】目的：考察宮頸癌患者癌組織中神經型鈣粘蛋白（ N-cadherin）蛋白表達及其臨床意義。方法：收集2009年12月至2014年3月在我院病理科提供的活檢的子宮頸組織石蠟標本65例，同期子宮肌瘤行全子宮切除的正常宮頸組織45例為對照。采用免疫組化法檢測宮頸組織的N-cadherin蛋白表達。結果：N-cadherin陽性染色定位于細胞膜，呈連續(xù)的細胞膜染色。與對照組比，宮頸癌組織的N-cadherin陽性表達明顯增高（P<0.05），分期越高，分化程度越低，淋巴結轉移和淋巴血管間隙浸潤，N-cadherin陽性表達越高（P<0.05），N-cadherin表達陽性越高，患者越焦慮，越抑郁和生存質量越低（P<0.05），N-cadherin表達陽性越高，患者生存時間越短（χ2=6.461， P=0.011）。結論：N-cadherin表達陽性與宮頸癌的發(fā)生、浸潤及轉移密切相關，可為宮頸癌的焦慮、憂慮、生存質量和生存時間提供參考。

【關鍵詞】宮頸癌;N-cadherin;意義

【中圖分類號】R737.3【文獻標識碼】B【文章編號】1672-3783（2020）10-30--01

宮頸癌（cervical carcinoma， CC）是婦科常見的惡性腫瘤，近年來的發(fā)病率略有增高，且呈現(xiàn)年輕化趨勢。宮頸癌發(fā)病早期沒有明顯的臨床癥狀，當被檢出時已到晚期，錯失了手術治療的最佳時期，放療是晚期宮頸癌的主要治療手段，即使給予標準放療，晚期宮頸癌5 年生存率不足35%，與腫瘤發(fā)生轉移和擴散導致復發(fā)和死亡有關，可見宮頸癌仍然是威脅女性健康的巨大毒瘤。近年來越來越多人研究上皮細胞向間質細胞轉變（epithelial to mesenchymal transition， EMT）與惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展的關系。EMT 是上皮細胞獲得遷移能力的重要方式，肺癌、乳腺癌、前列腺癌、結腸癌和胰腺癌等多種癌癥的原發(fā)性浸潤與繼發(fā)性轉移均有EMT參與其中。EMT 介導癌細胞浸潤及轉移的機制在于鈣粘蛋白轉換（cadherin switch），上皮型鈣粘蛋白（E-cadherin）轉化為神經型鈣粘蛋白（N-cadherin），EMT 過程常伴有 N-cadherin 蛋白的表達上調，N-cadherin 蛋白水平的增加與多種腫瘤的惡性程度、浸潤及轉移相關，直接影響病人預后[3，4]。N-cadherin 蛋白在宮頸癌中的作用研究較少。本課題擬考察宮頸癌患者癌組織中N-cadherin蛋白表達，探討與宮頸癌發(fā)生、發(fā)展和預后的關系，為宮頸癌的病理研究提供參考。

1 研究對象和方法

1.1 研究對象

經院倫理委員會同意，收集2009年12月至2014年3月在我院病理科提供的活檢的子宮頸組織石蠟標本及對應的完整病歷為研究對象，均經病理學診斷確診為宮頸癌65例，均為宮頸上皮內瘤變（cervical intraepithelial neoplasia，CIN），其中Ⅰ～ⅡA 期50例，ⅡB～ⅢA期15例，低/未分化20例，高/中分化45例。選擇同期子宮肌瘤行全子宮切除的正常宮頸組織45例為對照。宮頸癌組與對照組的年齡、體重指數(shù)等一般參數(shù)具有可比性。所有受試者均簽署知情同意書。

1.2 納入標準

未并發(fā)其他腫瘤;術前未行放化療及內分泌治療;無免疫及代謝性疾病。

N-cadherin蛋白在宮頸組織的表達 石蠟切片常規(guī)脫蠟，PBS沖洗，滴加3% H2O2阻斷內源性過氧化物酶，置入枸櫞酸緩沖液，微波抗原修復30min，滴加胎牛血清，在37℃下孵育1 h，滴加一抗（N-cadherin多克隆抗體）， 4℃過夜， PBS 沖洗，滴加生物素標記二抗，37℃孵育1 h，PBS 沖洗，滴加辣根酶工作液，37℃孵育 1 h，PBS 沖洗，DAB 染色，蘇木素復染，脫水、透明，封片，鏡下觀察。陰性對照以PBS為一抗，流程同上。兔抗人N-cadherin多克隆抗體購自美國 Abcam公司，其余試劑購自上海長島生物技術公司。

N-cadherin蛋白在宮頸組織表達的判斷標準? 高倍鏡下（400倍）根據陽性細胞所占比例和染色強度進行半定量評分。染色強度分為4級：0分（無著色）、1分（淺黃色）、2分（棕黃色）和3分（棕褐色）。著色細胞比例評分：0分（≤5%）、1分（6%～25%）、2分（26%～50%）和3分（>50%）為。將每張切片上述兩項評分加和為綜合評分：陰性 （-）（0～1分） 、弱陽性（+）（2～3分） 、陽性 （++）（4～6分）和強陽性 （+++）（>6分）。

焦慮自評量表（SAS）? SAS量表包括20個項目，每個項目按照1～4分評價，每個小項目分數(shù)加和為初始分再乘以1.25為焦慮評分，分值越高則焦慮程度越高。

抑郁自評量表（SDS）? SDS量表包括20個項目，每個小項目按照1～4分進行評價，每項得分加和再乘以1.25為焦慮評分，分值越高則抑郁程度越高。

生存質量? 采用EORTCQLC-C30量表評價患者生存質量。量表包括30個項目，包括軀體功能、角色功能、認知功能、情緒功能和社會功能及總體生存質量，分數(shù)越高則生存質量越高。

1.3 統(tǒng)計學處理

采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計學分析，率比較采用χ2檢驗;生存時間比較Lan-rank 檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1N-cadherin在不同組別的表達情況比較

N-cadherin陽性染色定位于細胞膜，呈連續(xù)的細胞膜染色。與對照組比，宮頸癌組織的N-cadherin陽性表達明顯增高（P<0.05），半數(shù)以上的宮頸癌組織的N-cadherin表達為陽性及強陽性，見表1和圖1。

2.2N-cadherin表達與宮頸癌的病理特征的關系

分期越高，分化程度越低，淋巴結轉移和淋巴血管間隙浸潤，N-cadherin陽性表達越高（P<0.05），見表2。

3 討論

浸潤與轉移是腫瘤細胞，尤其惡性腫瘤擁有的生物學特征，但需要腫瘤細胞需克服細胞間黏連。EMT描述了上皮細胞在形態(tài)學向成纖維細胞或間質細胞表型的轉變并獲得遷移的能力，在該過程中，上皮細胞間的粘附結構、極性及細胞骨架都發(fā)生不同程度地改變，上皮細胞的變形、遷移及運動功能增強，同時抗調亡的能力提升，在該過程中，N-cadherin作為主要的特征分子標記物可直接介導腫瘤細胞由上皮向間葉轉化，加強腫瘤的侵襲作用，影響腫瘤細胞擴散，研究顯示腫瘤細胞從良性到惡性轉化的過程中 N-cadherin 表達逐漸增強，可加快腫瘤浸潤及轉移，對預后造成直接影響[3，4]。大量的惡性腫瘤研究，如肝細胞癌[4，5]、卵巢癌、口腔鱗狀細胞癌、膀胱移行細胞癌、喉癌和肺癌均顯示腫瘤組織中N-cadherin 表達增高，細胞的惡性進程加快，侵襲轉移能力增強，預后不良。本課題結果也顯示N-cadherin陽性越高，宮頸癌的分期越高，分化程度越低，存在淋巴結轉移和淋巴血管間隙浸潤，生存時間越短，伴隨更高的焦慮和抑郁，更低的生存質量，N-cadherin表達陽性與宮頸癌的發(fā)生、浸潤及轉移密切相關，具有統(tǒng)計學意義，該結果與文獻報道類似[11，12]。但本課題納入的宮頸癌均為宮頸上皮內瘤變，宮頸癌分類還包括鱗狀細胞癌 和腺癌等，因此進一步的研究有必要增加這兩種病理類型進行討論。

綜上所述，N-cadherin在宮頸組織的表達可為宮頸癌的焦慮、憂郁、生存質量和生存時間提供參考。

參考文獻

Cheng H， Wang W， Zhang Y， et al.Expression levels and clinical significance of hepsin and HMGB1 proteins in cervical carcinoma[J].Oncol Lett，2017，14（1）：159-164.

Shu R， He J， Wu C， et al.The association between RARβ and FHIT promoter methylation and the carcinogenesis of patients with cervical carcinoma： A meta-analysis[J].Tumour Biol，2017，39（6）：1010428317709126.

Zidar N， Bo?tjan?i? E， Malgaj M，et al.The role of epithelial-mesenchymal transition in squamous cell carcinoma of the oral cavity[J].Virchows Arch. 2017 Jul 12. [Epub ahead of print].

Wu X， Wang H， Lian Y，et al.GTSE1 promotes cell migration and invasion by regulating EMT in hepatocellular carcinoma and is associated with poor prognosis[J].Sci Rep，2017，7（1）：5129.

Yen CH， Lai CC， Liao CC，et al.Characterization of a new murine cell line of sarcomatoid hepatocellular carcinoma and its application for biomarker/therapy development[J].Sci Rep，2017 ，7（1）：3052.