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      二苯乙烯苷對(duì)人乳腺癌T-47D細(xì)胞增殖及其雌激素受體表達(dá)的影響

      2020-10-30 01:55朱璨王嫣李堯鋒付云燕唐文超楊長(zhǎng)福王和生
      中國(guó)藥房 2020年19期
      關(guān)鍵詞:首烏培養(yǎng)液高濃度

      朱璨 王嫣 李堯鋒 付云燕 唐文超 楊長(zhǎng)福 王和生

      摘 要 目的:研究二苯乙烯苷(TSG)對(duì)人乳腺癌T-47D細(xì)胞增殖及其雌激素受體(ER)表達(dá)的影響,探討其雌激素樣作用及可能機(jī)制。方法:以ER陽(yáng)性人乳腺癌T-47細(xì)胞為對(duì)象,以β-雌二醇(β-E2,1×10-8 mol/L)為陽(yáng)性對(duì)照,采用CKK-8法檢測(cè)不同濃度TSG(1×10-8、1×10-7、1×10-6、1×10-5、1×10-4 mol/L)作用24、48、72 h后的細(xì)胞增殖情況,并計(jì)算增殖率;分別采用Western blotting法和逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法檢測(cè)經(jīng)低、中、高濃度TSG(1×10-8、1×10-6、1×10-4 mol/L)作用48 h后細(xì)胞中ER-α、ER-β蛋白及其mRNA的表達(dá)情況。結(jié)果:經(jīng)不同濃度TSG作用24、48、72 h后,各給藥組各時(shí)間點(diǎn)(除β-E2組48 h外)的細(xì)胞增殖率均較空白組顯著升高,且TSG 1×10-7、1×10-6、1×10-5 mol/L組顯著高于β-E2組(P<0.05或P<0.01)。經(jīng)低、中、高濃度TSG作用48 h后,各給藥組細(xì)胞中ER-α、ER-β蛋白及其mRNA的表達(dá)量均較空白組顯著升高(P<0.05或P<0.01);且TSG低濃度組ER-β蛋白的表達(dá)量,各濃度組細(xì)胞中ER-α mRNA以及低、高濃度組ER-β mRNA的表達(dá)量均顯著高于β-E2組(P<0.05或P<0.01)。結(jié)論:TSG可誘導(dǎo)T-47D細(xì)胞的體外增殖,并可通過(guò)促進(jìn)ER-α、ER-β蛋白及其mRNA的表達(dá)來(lái)發(fā)揮雌激素樣作用;這種作用在一定濃度下強(qiáng)于β-E2。

      關(guān)鍵詞 二苯乙烯苷;植物雌激素;人乳腺癌T-47D細(xì)胞;細(xì)胞增殖;雌激素受體

      ABSTRACT ? OBJECTIVE: To study the effects of stilbene glucoside (TSG) on the proliferation and estrogen receptor (ER) of human breast cancer T-47D cells, and to explore its estrogen-like effect and potential mechanism. METHODS: Taking ER positive human breast cancer T-47D cells as subjects, using β-estradiol (β-E2,1×10-8 mol/L) as positive control, CCK-8 assay was used to detect the cell proliferation after treated with different concentrations of TSG (1×10-8, 1×10-7, 1×10-6, 1×10-5, 1×10-4 mol/L) for 24, 48, 72 h; the cell proliferation rate was calculated. Western blotting assay and RT-PCR methods were adopted to detect the protein and mRNA expression of ER-α and ER-β in cells after treated with low, medium and high concentrations of TSG (1×10-8, 1×10-6, 1×10-4 mol/L) for 48 h. RESULTS: After treated with different concentrations of TSG for 24, 48, 72 h, the cell proliferation rate of each administration group at each time point (except for β-E2 group at 48 h) increased significantly, compared with blank group; those of TSG groups (1×10-5, 1×10-6, 1×10-7 mol/L) were significantly higher than β-E2 group (P<0.05 or P<0.01). After treated with low, medium and high concentrations of TSG for 48 h, protein and mRNA expression of ER-α and ER-β in cells were increased significantly, compared with blank group (P<0.05 or P<0.01); protein expression of ER-β in TSG low concentration group, mRNA expression of ER-α in TSG groups as well as mRNA expression of ER-β in TSG low and high concentration groups were significantly higher than β-E2 group (P<0.05 or P<0.01). CONCLUSIONS: TSG can induce the in vitro proliferation of T-47D cells and exert estrogen-like effects by promoting protein and mRNA expression of ER-α and ER-β, which is stronger than that of β-E2 at a certain concentration.

      KEYWORDS ? Stilbene glucoside; Phytoestrogen; Human breast cancer T-47D cells; Cell proliferation; Estrogen receptor

      二苯乙烯苷化學(xué)名為2,3,5,4′-四羥基二苯乙烯葡萄糖苷(2,3,5,4′-tetrahydroxystilbene-2-Ο-β-D-glucoside,以下簡(jiǎn)稱“TSG”),易溶于水,是中藥制首烏的主要活性成分,且其含量是制首烏質(zhì)量控制的專屬性指標(biāo)[1]。制首烏為蓼科植物何首烏Polygonum multiflorum Thunb.干燥塊根的炮制加工品,具有補(bǔ)肝腎、益精血、壯筋骨、烏須發(fā)之效[1]?,F(xiàn)代藥理研究表明,制首烏及其活性成分TSG具有抗衰老、防治骨質(zhì)疏松、改善血管性癡呆等作用[2-3]。本課題組前期發(fā)現(xiàn),制首烏具有植物雌激素樣作用,其水煎劑可調(diào)節(jié)去卵巢大鼠的生殖軸,亦能抑制雷公藤多苷對(duì)大鼠生殖功能的破環(huán),且制首烏含藥血清可促進(jìn)人乳腺癌T-47D細(xì)胞的增殖[4-6];且前期體內(nèi)實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn),TSG能增加性未成熟小鼠的子宮系數(shù),調(diào)節(jié)性激素水平,增強(qiáng)子宮雌激素受體(ER-α、ER-β)的表達(dá),亦提示TSG具有雌激素樣活性[7]?;诖耍菊n題組擬研究TSG對(duì)雌激素受體陽(yáng)性[ER(+)]人乳腺癌T-47D細(xì)胞增殖及其ER表達(dá)的影響,以進(jìn)一步探討TSG的雌激素樣作用及分子機(jī)制,為制首烏植物雌激素樣作用的物質(zhì)基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù),為雌激素依賴性腫瘤(如乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌)患者的治療提供參考。

      1 材料

      1.1 儀器

      Eclipse TS100型倒置顯微鏡(日本Nikon公司);Synergy 2型熒光/吸收光酶標(biāo)儀(美國(guó)BioTek公司);BB15型CO2培養(yǎng)箱(美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司);Mini-PROTEAN Tetra型電泳槽、ChemicDoc Touch型超高靈敏化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)、C1000 Touch Thermal Cycler型聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)儀(美國(guó)Bio-Rad公司);NanoPhotometer型超微量分光光度計(jì)(德國(guó)Implen公司);Mi- crofuge 20R型高速冷凍離心機(jī)(美國(guó)Beckman 公司)。

      1.2 藥品與試劑

      TSG對(duì)照品(上海源葉生物科技有限公司,批號(hào):J17O8Z45941,純度:99.9%);β-雌二醇對(duì)照品(β-E2,陽(yáng)性對(duì)照,北京索萊寶科技有限公司,批號(hào):521C022,純度:≥98.0%);DMEM高糖培養(yǎng)液、無(wú)酚紅DMEM高糖培養(yǎng)液、胰蛋白酶(美國(guó)Gibco公司,批號(hào)分別為8118240、2003881、1967534);胎牛血清(FBS)、活性炭-葡聚糖苷處理的胎牛血清(CDT-FBS,以色列Biological Industries公司,批號(hào)分別為1829596、1742900);兔源β-肌動(dòng)蛋白(β-actin)、ER-α抗體(美國(guó)CST公司,批號(hào)分別為4、6);兔源ER-β抗體(美國(guó)Abcam公司,批號(hào):GR3211677-6);辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔免疫球蛋白G(H+L)二抗(美國(guó)Jackson Immuno Research公司,批號(hào):139799);青-鏈霉素雙抗、CCK-8試劑盒、細(xì)胞裂解液、十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS- PAGE)凝膠配制試劑盒、BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒、ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒、快速封閉液(上海碧云天生物技術(shù)有限公司,批號(hào)分別為091818180923、013018181008、082018180910、081518180916、103018181030、0710181- 80906、110818181108);TRNzol Universal總RNA提取試劑、FastKing一步法逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)試劑盒[天根生化科技(北京)有限公司,批號(hào)分別為R6917、Q6214];PCR引物(序列及擴(kuò)增片段長(zhǎng)度見(jiàn)表1)由生工生物工程(上海)股份有限公司設(shè)計(jì)、合成;二甲基亞砜(DMSO)等試劑均為分析純,水為雙蒸水。

      1.3 細(xì)胞

      ER(+)人乳腺癌T-47D細(xì)胞株由上海復(fù)祥生物科技有限公司提供。

      2 方法

      2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及預(yù)處理

      將T-47D細(xì)胞置于含10%FBS、1%青-鏈霉素雙抗的DMEM高糖培養(yǎng)液中,于37 ℃、5%CO2、相對(duì)飽和濕度的條件下培養(yǎng)(培養(yǎng)條件下同)。于試驗(yàn)開(kāi)始前3 d,用磷酸鹽緩沖液(PBS,pH 7.4)清洗2次后,替換為含5%CDT-FBS、1%青-鏈霉素雙抗的無(wú)酚紅DMEM高糖培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),以進(jìn)一步增加細(xì)胞對(duì)雌激素樣物質(zhì)的敏感性[8]。

      2.2 細(xì)胞增殖情況檢測(cè)

      采用CCK-8法檢測(cè)。取“2.1”項(xiàng)下經(jīng)培養(yǎng)且處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞適量,用PBS清洗2次,經(jīng)0.25%胰蛋白酶消化后,以不含血清的DMEM高糖培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞密度,并按1×103個(gè)/孔接種于96孔板中,每孔總體積為150 μL。培養(yǎng)24 h待細(xì)胞貼壁后,將其隨機(jī)分為空白組、β-E2組[1×10-8 mol/L,以含DMSO、5%CDT-FBS、1%青鏈霉素、雙抗的無(wú)酚紅DMEM高糖培養(yǎng)基稀釋(DMSO最終體積分?jǐn)?shù)為0.000 3%),濃度參考文獻(xiàn)方法[9]和本課題組前期預(yù)試驗(yàn)結(jié)果設(shè)置;下同]和TSG不同濃度組(1×10-4、1×10-5、1×10-6、1×10-7、1×10-8 mol/L,濃度參考本課題組前期預(yù)試驗(yàn)結(jié)果設(shè)置),每組設(shè)6個(gè)復(fù)孔。吸棄上清液,空白組加入含5%CDT-FBS、1%青-鏈霉素雙抗的無(wú)酚紅DMEM高糖培養(yǎng)液150 μL,各給藥組加入含相應(yīng)藥物以及5%CDT-FBS、1%青-鏈霉素雙抗的無(wú)酚紅DMEM高糖培養(yǎng)液150 μL。分別于培養(yǎng)24、48、72 h時(shí),各孔加入CCK-8試劑15 μL,于37 ℃孵育2 h,使用熒光/吸收光酶標(biāo)儀于450 nm波長(zhǎng)處檢測(cè)各孔的吸光度(A),計(jì)算細(xì)胞增殖率:增殖率(%)=(試驗(yàn)組平均A值/空白組平均A值)×100%。上述試驗(yàn)重復(fù)3次。

      2.3 細(xì)胞中ER-α、ER-β蛋白表達(dá)情況檢測(cè)

      采用Western blotting法檢測(cè)。取“2.1”項(xiàng)下經(jīng)培養(yǎng)且處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞適量,用PBS清洗2次,經(jīng)0.25%胰蛋白酶消化后,以不含血清的DMEM高糖培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞密度,并按1×106個(gè)/孔接種于6孔板中,每孔總體積為2 mL。培養(yǎng)24 h待細(xì)胞貼壁后,將其隨機(jī)分為空白組、β-E2組(1×10-8 mol/L)和TSG低、中、高濃度組(濃度參考“2.2”項(xiàng)下試驗(yàn)結(jié)果設(shè)置),每組設(shè)4個(gè)復(fù)孔。吸棄上清液,空白組加入含5%CDT-FBS、1%青-鏈霉素雙抗的無(wú)酚紅DMEM高糖培養(yǎng)液2 mL,各給藥組加入含相應(yīng)藥物以及5%CDT-FBS、1%青-鏈霉素雙抗的無(wú)酚紅DMEM高糖培養(yǎng)液2 mL。培養(yǎng)48 h后,收集細(xì)胞,經(jīng)細(xì)胞裂解液裂解后,以12 000 r/min離心15 min,取上清液按BCA法測(cè)定蛋白濃度。將蛋白于100 ℃變性5 min后,取20 μg行SDS-PAGE。電泳后轉(zhuǎn)移至PVDF膜上,室溫封閉15 min,加入ER-α、ER-β和β-actin一抗(稀釋度均為1 ∶ 1 000),4 ℃孵育過(guò)夜;用三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽(TBST)溶液清洗10 min×3次,加入二抗(稀釋度為1 ∶ 10 000),室溫孵育1 h;用TBST溶液清洗10 min×3次,經(jīng)ECL顯色后,于超高靈敏化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)上成像。使用Image-Pro Express 5.1軟件分析,以相應(yīng)蛋白與內(nèi)參β-actin條帶的灰度值比值作為目標(biāo)蛋白的表達(dá)量。上述試驗(yàn)重復(fù)3次。

      2.4 細(xì)胞中ER-α、ER-β mRNA表達(dá)情況檢測(cè)

      采用RT-PCR法檢測(cè)。取“2.1”項(xiàng)下經(jīng)培養(yǎng)且處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,按“2.3”項(xiàng)下方法培養(yǎng)、分組、給藥,每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔。培養(yǎng)48 h后,收集細(xì)胞,參照TRNzol Universal總RNA提取試劑說(shuō)明書(shū)方法提取總RNA,使用超微量分光光度計(jì)測(cè)定其純度(即A260 nm/A280 nm值,若該值為1.8~2.0即表明其純度符合試驗(yàn)要求[10])。參照FastKing一步法RT-PCR試劑盒說(shuō)明書(shū)方法進(jìn)行RT-PCR。反應(yīng)體系(50 μL):總RNA 2 μL,2×FastKing One Step RT-PCR Master Mix 25 μL,25×RT-PCR Enzyme Mix 2 μL,上/下游引物各1.25 μL、無(wú)RNA酶的ddH2O 18.5 μL。反應(yīng)條件:40 ℃逆轉(zhuǎn)錄30 min;95 ℃預(yù)變性3 min;94 ℃變性30 s,58 ℃退火30 s,72 ℃延伸30 s,共循環(huán)35次;72 ℃再延伸5 min。擴(kuò)增產(chǎn)物行1.2%瓊脂糖凝膠電泳后,于超高靈敏化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)上成像。使用Image Lab 5.2.1軟件分析,以相應(yīng)基因與內(nèi)參β-actin條帶的灰度值比值作為目標(biāo)基因mRNA的表達(dá)量。上述試驗(yàn)重復(fù)3次。

      2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

      采用SPSS 17.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以x±s表示,組間比較采用單因素方差分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

      3 結(jié)果

      3.1 TSG對(duì)T-47D細(xì)胞增殖的影響

      與空白組比較,β-E2組和TSG各濃度組各時(shí)間點(diǎn)(除β-E2組48 h外)的細(xì)胞增殖率均顯著升高(P<0.05或P<0.01),且用藥72 h時(shí)TSG 1×10-7、1×10-6、1×10-5 mol/L組的細(xì)胞增殖率均顯著高于β-E2組(P<0.05),詳見(jiàn)表2。根據(jù)上述結(jié)果,本研究以1×10-8、1×10-6、1×10-4 mol/L作為T(mén)SG的低、中、高濃度進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

      3.2 TSG對(duì)T-47D細(xì)胞中ER-α、ER-β蛋白表達(dá)的影響

      與空白組比較,各給藥組細(xì)胞中ER-α、ER-β蛋白的表達(dá)量均顯著升高,且TSG低濃度組ER-β蛋白的表達(dá)量顯著高于β-E2組(P<0.05或P<0.01)。其中,β-E2組細(xì)胞中ER-α、ER-β蛋白的表達(dá)量分別增加了56%、29%,TSG低、中、高濃度組細(xì)胞中上述蛋白的表達(dá)量分別增加了61%、69%、30%(ER-α)和83%、28%、34%(ER-β),詳見(jiàn)圖1、表3。

      3.3 TSG對(duì)T-47D細(xì)胞中ER-α、ER-β mRNA表達(dá)的影響

      與空白組比較,各給藥組細(xì)胞中ER-α、ER-β mRNA的表達(dá)量均顯著升高,且TSG各濃度組ER-α mRNA以及TSG低、高濃度組ER-β mRNA的表達(dá)量均顯著高于β-E2組(P<0.05或P<0.01)。其中,β-E2組細(xì)胞中ER-α、ER-β mRNA的表達(dá)量分別增加了22%、27%,TSG低、中、高濃度組細(xì)胞中上述mRNA的表達(dá)量分別增加了52%、127%、41%(ER-α)和95%、26%、131%(ER-β),詳見(jiàn)圖2、表3。

      4 討論

      雌激素是女性體內(nèi)重要的性激素,不僅能促進(jìn)女性生殖器官發(fā)育、維持第二性征,而且在骨代謝、心血管活動(dòng)和神經(jīng)功能中也具有重要作用[11]。雌激素水平低下可引發(fā)一系列疾病,如骨質(zhì)疏松、更年期綜合征、心血管疾病等,嚴(yán)重影響了女性的正常生活;同時(shí),長(zhǎng)期應(yīng)用雌激素替代療法的副作用較多,且可增加雌激素依賴性腫瘤(如乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌等)發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)[11]。因此,不良反應(yīng)少的植物雌激素逐漸受到學(xué)者的關(guān)注,現(xiàn)已成為相關(guān)研究的熱點(diǎn)之一[12]。

      植物雌激素可與ER結(jié)合而發(fā)揮雌激素樣作用,在調(diào)節(jié)ER表達(dá)水平的同時(shí),亦可用于治療骨質(zhì)疏松、圍絕經(jīng)期綜合征、心血管疾病、肥胖等癥[12-13]。ER主要包括ER-α和ER-β,其中ER-α的親和力及總體活性更高[14]。TSG是中藥制首烏的主要活性成分,前期研究表明其在體內(nèi)具有一定的植物雌激素作用。為進(jìn)一步探討該化合物雌激素樣活性及作用機(jī)制,本課題組以ER(+)T47-D細(xì)胞(該細(xì)胞含有豐富的ER,易受雌激素或雌激素樣物質(zhì)誘導(dǎo)而增殖,是用于檢測(cè)化合物雌激素樣活性的常用細(xì)胞株[15])為對(duì)象,以β-E2為陽(yáng)性對(duì)照,通過(guò)體外試驗(yàn)初步考察了不同濃度TSG對(duì)細(xì)胞增殖和ER表達(dá)影響。

      CCK-8試驗(yàn)結(jié)果顯示,各給藥組各時(shí)間點(diǎn)(除β-E2組48 h外)的細(xì)胞增殖率均較空白組顯著升高,且用藥72 h時(shí)TSG 1×10-7、1×10-6、1×10-5 mol/L組的細(xì)胞增殖率均顯著高于β-E2組。這提示陽(yáng)性對(duì)照藥和TSG均具有促進(jìn)T-47D細(xì)胞增殖的作用,且TSG(1×10-7、1×10-6、1×10-5 mol/L)的作用持續(xù)時(shí)間可能較陽(yáng)性對(duì)照藥更長(zhǎng)。在本研究過(guò)程中發(fā)現(xiàn),TSG各濃度組細(xì)胞的增殖率均有先升高后降低的趨勢(shì),且在濃度為1×10-6 mol/L(24、72 h)時(shí)達(dá)到峰值;同時(shí),TSG在1×10-8~1×10-4 mol/L的濃度范圍內(nèi)均可顯著促進(jìn)T-47D細(xì)胞的增殖,故本研究最終選擇了1×10-8、1×10-6、1×10-4 mol/L作為T(mén)SG后續(xù)試驗(yàn)中的低、中、高濃度。

      本研究進(jìn)一步采用Western blotting法和RT-PCR法分別測(cè)定了各組細(xì)胞中ER-α蛋白及其mRNA的表達(dá)情況。結(jié)果顯示,各給藥組細(xì)胞中ER-α蛋白及其mRNA的表達(dá)量均較空白組顯著升高,且TSG各濃度組ER-α mRNA的表達(dá)量均顯著高于β-E2組。這提示陽(yáng)性對(duì)照藥和TSG均可不同程度地上調(diào)ER-α蛋白及其mRNA的表達(dá)。值得注意的是,TSG各濃度組細(xì)胞ER-α蛋白表達(dá)量與β-E2組無(wú)明顯差異,但其mRNA的表達(dá)量卻顯著升高,這可能與設(shè)計(jì)ER-α mRNA擴(kuò)增引物時(shí)未包含變異片段,而β-E2可誘導(dǎo)引物外某些序列片段轉(zhuǎn)錄有關(guān)[16]。此外筆者還發(fā)現(xiàn),在TSG 1×10-8~1×10-4 mol/L的濃度作用范圍內(nèi),細(xì)胞中ER-α蛋白及其mRNA的表達(dá)呈先上升后下降的趨勢(shì),在TSG 1×10-6 mol/L(中劑量)時(shí)其增強(qiáng)上述指標(biāo)表達(dá)的效果最明顯,這可能與PE的雙重調(diào)節(jié)作用有關(guān),即低濃度協(xié)同、高濃度拮抗的擬/抗雌激素作用[17]。

      本研究同法測(cè)定了各組細(xì)胞中ER-β蛋白及其mRNA的表達(dá)情況。結(jié)果顯示,各給藥組細(xì)胞中ER-β蛋白及其mRNA的表達(dá)量均較空白組顯著升高,且TSG低濃度組ER-β蛋白表達(dá)量以及TSG低、高濃度組ER-β mRNA的表達(dá)量均顯著高于β-E2組。這提示陽(yáng)性對(duì)照藥和TSG均可不同程度地上調(diào)ER-β蛋白及其mRNA的表達(dá),且TSG低濃度的誘導(dǎo)作用普遍強(qiáng)于陽(yáng)性對(duì)照藥。值得注意的是,雖然高濃度TSG也可顯著上調(diào)ER-β mRNA的表達(dá),但其對(duì)蛋白的上調(diào)作用相對(duì)較弱,這可能是因?yàn)榈鞍妆磉_(dá)除受mRNA降解的影響外,可能還受蛋白自組裝的影響,從而導(dǎo)致mRNA轉(zhuǎn)錄水平和蛋白翻譯水平不同步[18-19]。此外筆者還發(fā)現(xiàn),在TSG 1×10-8~1×10-4 mol/L的作用濃度范圍內(nèi),細(xì)胞中ER-β蛋白呈先下降后升高的趨勢(shì),在TSG 1×10-8 mol/L(低劑量)時(shí)其增強(qiáng)上述指標(biāo)表達(dá)的效果最明顯。ER-β與ER-α變化趨勢(shì)不同,這可能與兩種亞型活性不同、應(yīng)答不同有關(guān)[12]。

      有文獻(xiàn)指出,植物雌激素的活性較雌激素弱[12],且本課題組前期研究也得出了類似結(jié)論[6]。但本研究結(jié)果卻提示,TSG的雌激素樣活性與β-E2無(wú)明顯差異,甚至在某些濃度下還強(qiáng)于β-E2。筆者分析其原因,認(rèn)為:其一,β-E2多以DMSO為溶劑,若DMSO體積分?jǐn)?shù)超過(guò)0.2%則會(huì)產(chǎn)生細(xì)胞毒性[20];其二,受試物TSG是單一化學(xué)成分,而本課題組前期研究以制首烏為對(duì)象,成分復(fù)雜,故作用強(qiáng)弱有所差異。

      綜上所述,制首烏活性成分TSG可誘導(dǎo)T-47D細(xì)胞的體外增殖,并可通過(guò)促進(jìn)ER蛋白及mRNA的表達(dá)來(lái)發(fā)揮雌激素樣作用。本課題組將在此研究的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步探討TSG對(duì)雌激素依賴性腫瘤細(xì)胞的影響,挖掘其雌激素樣作用的具體機(jī)制,以期為制首烏藥材及其活性成分的雌激素樣作用的物質(zhì)基礎(chǔ)研究以及臨床應(yīng)用提供更多的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

      參考文獻(xiàn)

      [ 1 ] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典:一部[S]. 2015年版,北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2015:176-177.

      [ 2 ] 王浩,楊健,周良云,等.何首烏化學(xué)成分與藥理作用研究進(jìn)展[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2019,25(13):192-205.

      [ 3 ] 王宏楊,遲繼銘,姜雪,等.何首烏提取物二苯乙烯苷藥理及臨床研究進(jìn)展[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2019,37(10):2464-2469.

      [ 4 ] 朱璨,李堯鋒,楊長(zhǎng)福,等.制首烏對(duì)去卵巢大鼠子宮指數(shù)和性激素水平的影響研究[J].中國(guó)民族民間醫(yī)藥,2017,26(10):25-27.

      [ 5 ] 朱璨,李堯鋒,彭芳,等.制首烏對(duì)大鼠卵巢功能減退的影響研究[J].醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào),2018,31(6):602-607.

      [ 6 ] 朱璨,王嫣,李堯鋒,等.制首烏含藥血清對(duì)人乳腺癌T- 47D細(xì)胞增殖及ER表達(dá)的影響[J].中國(guó)藥房,2019,30(22):3062-3067.

      [ 7 ] 朱璨,李堯鋒,彭芳,等.二苯乙烯苷的雌激素樣作用及其對(duì)性未成熟小鼠ER表達(dá)的影響研究[J].中國(guó)藥房,2019,30(8):1031-1036.

      [ 8 ] JEONG SY,CHANG M,CHOI SH,et al. Estrogenic effects of phytoestrogens derived from Flemingia strobi- lifera in MCF-7 cells and immature rats[J]. Arch Pharm Res,2018,41(5):519-529.

      [ 9 ] 趙丕文. 10種中藥植物雌激素樣作用及其機(jī)制的研究[D].北京:北京中醫(yī)藥大學(xué),2007.

      [10] WU ZG,JIAGN W,MANTRI N,et al. Transciptome ana- lysis reveals flavonoid biosynthesis regulation and simple sequence repeats in yam(Dioscorea alata L.)tubers[J]. BMC Genomics,2015,16(1):346.

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