王蕾 張習(xí)本 李鑫

摘要：為更好的保護地方特色品種——威寧雞，在烏蒙山區(qū)納雍縣選取5個規(guī)模養(yǎng)殖場，對其禽流感H5疫苗免疫效果進行調(diào)查。結(jié)果表明，5個規(guī)模養(yǎng)殖場在使用疫苗免疫后抗體陽性率直線上升，抗體保護率好，免疫效果佳，以上5個場的免疫方法及程序可在納雍縣及周邊區(qū)縣推廣使用，對保護烏蒙山區(qū)威寧雞及其他品種雞群養(yǎng)殖具有重要意義。

關(guān)鍵詞：威寧雞;禽流感;免疫效果;烏蒙山區(qū)

中圖分類號：S858.31? ? ? ? 文獻標(biāo)識碼：A? ? ? ? 文章編號：1007-273X（2020）10-0005-02

威寧雞因主要生活在烏蒙山區(qū)，故又稱烏蒙雞，屬中型蛋肉兼用型品種。主產(chǎn)于貴州省畢節(jié)市納雍縣、赫章縣等地。該品種具有耐粗飼、抗寒、抗?jié)?、肉質(zhì)鮮美、蛋大殼厚和蛋黃品質(zhì)良好等特點，是貴州省優(yōu)良特色地方畜禽品種資源。

禽流感是養(yǎng)雞生產(chǎn)中常見的病毒性疾病，屬甲型流感病毒，不同品種、年齡段的雞均可感染，雞群一旦感染流感病毒，短時間內(nèi)會傳播至附近雞場，傳播速度極快，給家禽養(yǎng)殖業(yè)造成較大損失[1]。禽流感臨床可分為最急性型、急性型和溫和型3種，最急性型病毒致病力最強，感染雞死亡率非常高，急性型臨床發(fā)病最多，病雞主要表現(xiàn)呼吸道癥狀和全身癥狀，死亡率較低，溫和型常為隱形感染，臨床癥狀不明顯[2]。

因獨特的地理優(yōu)勢和悠久的畜牧文化，納雍縣是貴州省畢節(jié)市家禽養(yǎng)殖大縣，目前全縣家禽存欄量266萬羽。同時，納雍縣也是威寧雞的重要產(chǎn)區(qū)。為了更好保護地方優(yōu)勢特色品種資源，維護家禽養(yǎng)殖業(yè)的良好發(fā)展，助力畢節(jié)試驗區(qū)按時打贏脫貧攻堅戰(zhàn)。本調(diào)查將納雍縣5個育有威寧雞的規(guī)模養(yǎng)殖場作為調(diào)查目標(biāo)，對調(diào)查場的禽流感H5亞型血清抗體進行檢測。評估春防免疫結(jié)果，為納雍地區(qū)禽流感防控提供理論基礎(chǔ)。

1? 材料與方法

1.1? 材料

1.1.1? 受試養(yǎng)殖場和農(nóng)戶? 分別在納雍縣維新鎮(zhèn)、厙東關(guān)彝族苗族白族鄉(xiāng)、化作苗族彝族鄉(xiāng)、羊場苗族彝族鄉(xiāng)隨機選取5家威寧雞規(guī)模養(yǎng)殖場，每場選取50羽雛雞進行禽流感疫苗免疫效果調(diào)查。通過當(dāng)?shù)匦竽凉芾聿块T了解到，以上5家規(guī)模養(yǎng)殖場均使用了哈爾濱某疫苗公司生產(chǎn)的重組禽流感病毒（H5+H7）二價滅活疫苗。

1.1.2? 標(biāo)準(zhǔn)抗原? 禽流感H5亞型標(biāo)準(zhǔn)抗原購自哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司，生產(chǎn)批號為2018011。

1.1.3? 主要材料? 無菌采血管、單道可微量移液器、離心機、96孔V型微量血凝板、振蕩器。

1.2? 方法

1.2.1? 基本情況? 以上5個雞場均在當(dāng)?shù)匦竽琉B(yǎng)殖部門的指導(dǎo)下于4月5日進行禽流感免疫工作，且均使用重組禽流感病毒（H5+H7）二價滅活疫苗。一個月后，即5月5日進行加強免疫。

1.2.2? 血液樣品采集? 第1次采血：首次免疫前2 d進行第一次采血，每個場選取50羽威寧雛雞進行無菌采血，用于測量母源抗體。第2次采血：在首免30 d后對受試雛雞進行采血。第3次采血：在加強免疫后30 d后對受試雛雞進行采血。血液均采集在無菌采血管中，-4 ℃保存并快速送至實驗室。

1.2.3? 血清抗體檢測

（1）血清制備。取2 mL血液于血樣試管中，2 000 r/min離心5 min。觀察到血球沉淀，血清懸浮于血球上層。無菌吸出血清置于無菌EP管中保存。沉積的紅細胞用PBS配制成1%的紅細胞懸液[3]。

（2）血凝抑制試驗。反應(yīng)在96孔V型血凝板上進行，每排檢驗1個樣品。每排1～12孔均加入50 μL生理鹽水，第1孔中加入被檢血清50 μL，然后倍比稀釋至第11孔，最后棄50 μL。第1孔至第12孔加入4單位標(biāo)準(zhǔn)禽流感抗原50 μL，第12孔為病毒對照。每孔加入1%的雞紅細胞懸液50 μL。振蕩均勻，后置于37 ℃恒溫箱中30 min，然后進行結(jié)果判定。以紅細胞100%不凝集的反應(yīng)孔判為該血清的HI抑制價。

2? 結(jié)果與分析

通過血凝抑制試驗檢測，5個規(guī)模養(yǎng)雞場（命名為A、B、C、D、E場）在進行免疫前后禽流感H5抗體情況如表1、表2、表3所示。根據(jù)農(nóng)業(yè)部標(biāo)準(zhǔn)，禽流感血凝抑制抗體效價HI（log2）≥4為免疫合格。試驗結(jié)果顯示，免疫前5個規(guī)模場的威寧雞禽流感H5母源抗體水平均較低，96.8%受試威寧雞母源抗體水平未達4Log2，其中4個場抗體陽性率均低于5%，尤其是E場母源抗體水平最低，為0（表1）。首次免疫后，5個場強制免疫疫苗抗體陽性率顯著提高，A場抗體水平達到7log2，B、C、E場均達6log2，D場達5log2，抗體陽性率均上升至50%以上，其中4個場上升至75%以上，尤其是A、E場抗體陽性率高達90%及以上（表2）。加強免疫后，A、C、E場抗體水平達到8log2，B和D場達6log2，A、B、C、E場抗體檢測陽性率均達到95%以上，A場達到100%（表3）。

綜合分析，免疫前5個養(yǎng)殖場禽流感H5母源抗體均很低，抗體陽性率均在10%以下，難以達到保護效果。在進行首次免疫后，受試場的抗體陽性率均快速提高，A和E場高達90%及以上，疫苗保護率平均可達80%。加強免疫后，5個場抗體陽性率均穩(wěn)步上升，疫苗保護率平均達到96.8%，A、C、E場疫苗免疫抗體陽性率均在98%及以上（圖1）。因此，受試場疫苗免疫的抗體產(chǎn)生水平和保護率均達到理想水平。

3? 討論

禽流感是由正黏病毒科、流行性病毒屬A型流感病毒引起的一類傳染病，被世界衛(wèi)生組織列為A類傳染病[4]。據(jù)納雍縣畜牧部門介紹，該地多呈溫和型感染，且近2年來多呈H5亞型暴發(fā)，臨床表現(xiàn)呼吸道癥狀，雞產(chǎn)蛋量下降，器官出血性病變等。給當(dāng)?shù)丶仪蒺B(yǎng)殖業(yè)帶來了巨大損失。

目前，高致病性禽流感不予治療，溫和型禽流感的治療也局限在中藥和抗病毒因子的生物制劑，且治療痊愈速度遠遠低于傳播速度。所以該病的控制方式首選疫苗防控，免疫效果好和抗體保護率高的疫苗對防控禽流感具有非常重要的意義。對納雍縣范圍內(nèi)5個規(guī)模場威寧雞禽流感的抗體效價進行調(diào)查，結(jié)果表明重組禽流感病毒（H5+H7）二價滅活疫苗能有效刺激威寧雞產(chǎn)生禽流感H5抗體。尤其是在加強免疫后，禽流感H5抗體陽性率均在90%以上，對雞群起到非常好的保護作用。

防治雞禽流感必須進行規(guī)范的疫苗免疫，聽取當(dāng)?shù)匦竽敛块T的建議，了解當(dāng)?shù)厍萘鞲胁《镜姆肿由飳W(xué)特征和流行特點后，選擇更加合適的疫苗和免疫程序。規(guī)范免疫、科學(xué)管理、加強監(jiān)控，能在很大程度上避免禽流感的發(fā)生，為當(dāng)?shù)鼐G色規(guī)范家禽養(yǎng)殖增添一道保護屏障。

參考文獻：

[1] 許文珍.雞禽流感流行特點與防治措施分析[J].江西畜牧獸醫(yī)雜志，2018（5）：42-43.

[2] 李亞玲.雞禽流感病防治[J].畜牧獸醫(yī)科學(xué)，2019（23）：76-77.

[3] 曹洪敬，顏世敢，王文志，等.微量血凝抑制試驗檢測雞IBV抗體水平的研究[J].山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，1999（1）：44-45.

[4] 呂? 冬.雞禽流感防治[J].中國畜禽種業(yè)，2017（4）：157-158.