華 蓮，郝桂明，王 衛(wèi)

（天津市藥品檢驗研究院，天津 300070）

尼莫地平［1］為第二代二氫吡啶類鈣拮抗劑，可選擇性地作用于腦血管平滑肌，顯著減少血管痙攣引起的缺血性腦損傷，預(yù)防并改善蛛網(wǎng)膜下腔出血后的血管痙攣，恢復(fù)腦功能，有改善意識和記憶的功能。臨床用于缺血性腦血管病的治療。

該品種目前已收載于《中國藥典》2015 年版二部［2］，現(xiàn)行國外藥典中USP 42 版［3］和BP 2020 版［4］均有收載?！吨袊幍洹?015 年版中尼莫地平有關(guān)物質(zhì)僅對光降解雜質(zhì)A（雜質(zhì)Ⅰ）進行定量控制，并未對其他兩種已知合成副產(chǎn)物雜質(zhì)B 和雜質(zhì)C 單獨定量。本次研究比對、結(jié)合國內(nèi)外現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，對收集到的國內(nèi)3 個生產(chǎn)廠家的10 批樣品進行評價分析，建立新的色譜系統(tǒng)對尼莫地平各雜質(zhì)產(chǎn)物定量控制，提高其產(chǎn)品生產(chǎn)過程中各環(huán)節(jié)把控性，以完善現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)，保證產(chǎn)品的安全、有效。

1 儀器與試藥

島津LC-20A 高效液相色譜儀，尼莫地平對照品及雜質(zhì)A、雜質(zhì)B、雜質(zhì)C 對照品均由拜耳醫(yī)藥保健有限公司提供（尼莫地平批號R-0191-03B，99.8%；雜質(zhì)A 批號S02-0145-08A，94.4%；雜質(zhì)B 批號S03-0145-02B，99.7%；雜質(zhì)C 批號S01-0145-02B，99.5%），尼莫地平（樣品1#～3#，山東A 藥廠提供，批號1804022、1804025、1805034；樣品4#～7#，河北B 藥廠提供，批號150803、180305、180306、180307；樣品8#～10#，山西C藥廠提供，批號071204、080103、080319）。甲醇、四氫呋喃均為色譜純（Merck 公司），水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 采用Venusil XBP C18色譜柱（100 mm×4.6 mm，5 μm）；以甲醇-四氫呋喃-水（20∶20∶60）（每升中加入25%氨水25 μl）為流動相；檢測波長為235 nm；柱溫為40 ℃；流速1.0 ml/min；進樣體積為20 μl。

2.2 溶液制備（避光操作）

2.2.1 對照品貯備液 取雜質(zhì)A、雜質(zhì)B 和雜質(zhì)C 對照品各適量，精密稱定，用甲醇溶解并稀釋制成每1 ml中分別約含40、80 和80 μg 的貯備液a。取尼莫地平對照品約40 mg，精密稱定，加四氫呋喃2.5 ml 使溶解，用流動相稀釋制成每1 ml 中約含40 μg 的貯備液b。

2.2.2 對照品溶液 精密量取對照品貯備液a、b 各1 ml 置25 ml 量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻。

2.2.3 供試品溶液 取樣品約40 mg，精密稱定，置25 ml 量瓶中，加四氫呋喃2.5 ml 使溶解，用流動相稀釋至刻度，搖勻。

2.2.4 靈敏度溶液 精密量取對照品溶液1 ml，置10 ml 量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗 取雜質(zhì)A 對照品適量，加甲醇稀釋制成每1 ml 中含40 μg 的溶液，另取尼莫地平對照品約40 mg，置25 ml 量瓶中，加四氫呋喃2.5 ml 使溶解，加上述雜質(zhì)A 溶液1 ml，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為系統(tǒng)適用性溶液。系統(tǒng)適用性溶液色譜圖中，理論板數(shù)按尼莫地平峰計算不低于3 000，雜質(zhì)A峰與尼莫地平峰的分離度應(yīng)符合規(guī)定。靈敏度溶液色譜圖中，尼莫地平峰高的信噪比不小于10。典型色譜圖見圖1。

圖1 系統(tǒng)適用性（A）對照品（B）樣品1#（C）樣品4#（D）樣品8#（E）HPLC 色譜圖

2.4 專屬性試驗（取山西C 藥廠批號為071204 樣品試驗）

2.4.1 酸破壞 稱取樣品約40 mg，置25 ml 量瓶中，加四氫呋喃2.5 ml 使溶解，加1 mol/L 鹽酸2 ml，加流動相稀釋至刻度，搖勻放置，調(diào)節(jié)pH 至中性。結(jié)果表明，酸破壞下，樣品色譜圖中未見顯著雜質(zhì)峰，典型色譜圖見圖2。

圖2 酸破壞（A）堿破壞（B）強光照射破壞（C）高溫破壞（D）氧化破壞（E）HPLC 色譜圖

2.4.2 堿破壞 稱取樣品約40 mg，置25 ml 量瓶中，加四氫呋喃2.5 ml 使溶解，加1 mol/L 氫氧化鈉2 ml，加流動相稀釋至刻度，搖勻放置，調(diào)節(jié)pH 至中性。結(jié)果表明，堿破壞下，樣品色譜圖中未見顯著雜質(zhì)峰，典型色譜圖見圖2。

2.4.3 強光照射破壞 稱取樣品約40 mg，置25 ml 量瓶中，加四氫呋喃2.5 ml 使溶解，加流動相稀釋至刻度，搖勻，在照度為4 500 lx 條件下放置3 d。結(jié)果表明，強光照射下，樣品色譜圖中產(chǎn)生的雜質(zhì)A 峰顯著增大，與主峰分離度符合要求，典型色譜圖見圖2。

2.4.4 高溫破壞 稱取樣品約40 mg，置25 ml 量瓶中，加四氫呋喃2.5 ml 使溶解，加流動相稀釋至刻度，搖勻，100 ℃水浴加熱3 h。結(jié)果表明，高溫破壞下，樣品色譜圖中未見顯著雜質(zhì)峰，典型色譜圖見圖2。

2.4.5 氧化降解 稱取樣品約40 mg，置25 ml 量瓶中，加四氫呋喃2.5 ml 使溶解，加30%過氧化氫2 ml，加流動相稀釋至刻度，搖勻放置。結(jié)果表明，氧化破壞下，樣品色譜圖中未見顯著雜質(zhì)峰，典型色譜圖見圖2。

2.5 線性試驗 精密稱取尼莫地平對照品和雜質(zhì)A、雜質(zhì)B 和雜質(zhì)C 對照品適量，分別用流動相和甲醇溶解并稀釋制成每1 ml 中均含800 μg 的溶液，作為對照品貯備液；精密量取適量，分別加流動相稀釋制成濃度為0.16、3.2、16.0、40.0 和80.0 μg/ml 的系列溶液，分別精密量取上述溶液20 μl 注入液相色譜儀，記錄色譜圖；以濃度（C）為橫坐標(biāo)，以對應(yīng)的峰面積（A）為縱坐標(biāo)，進行線性回歸。結(jié)果表明，尼莫地平和各雜質(zhì)在0.16～80.0 μg/ml 濃度范圍內(nèi)均與其峰面積呈良好線性關(guān)系。尼莫地平及3 種已知雜質(zhì)的線性方程及校正因子見表1。

表1 線性方程及校正因子結(jié)果

2.6 精密度試驗 取對照品溶液按“2.1”項下的色譜條件連續(xù)進樣6 針，雜質(zhì)A、雜質(zhì)B、雜質(zhì)C 及尼莫地平峰面積RSD 分別為0.6%、1.6%、0.6%及0.7%，結(jié)果表明精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗 取山西C 藥廠批號為071204 的樣品，按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液6 份，按“2.1”項下的色譜條件測定，6 份供試品溶液中雜質(zhì)A 未檢出，雜質(zhì)B、雜質(zhì)C、其他最大單雜及雜質(zhì)總量的RSD分別為6.6%、2.9%、0.01%和0.01%，結(jié)果表明重復(fù)性良好。

2.8 回收率試驗 取山西C 藥廠批號為071204 的樣品適量，精密稱定，加四氫呋喃適量使溶解，用流動相稀釋制成每1 ml 含400 mg 的供試品貯備液；另精密稱取雜質(zhì)A、雜質(zhì)B 和雜質(zhì)C 對照品適量，用甲醇溶解并稀釋制成每1 ml 中含40、80 和80 μg 的溶液，作為對照品貯備液；精密量取樣品貯備液1 ml 共6 份，分別置25 ml 量瓶中，各精密加入對照品貯備液1 ml，用流動相稀釋至刻度，搖勻，按“2.1”項下的色譜條件測定，結(jié)果雜質(zhì)A 的平均回收率為98.8%，RSD 為1.3%；雜質(zhì)B 的平均回收率為102.0%，RSD 為0.01%；雜質(zhì)C的平均回收率為102.0%，RSD 為0.01%。見表2-4。

表2 雜質(zhì)A 回收率試驗結(jié)果

表3 雜質(zhì)B 回收率試驗結(jié)果

表4 雜質(zhì)C 回收率試驗結(jié)果

2.9 最低檢測限 取對照品溶液，采用逐步稀釋法，使信噪比約為3，最低檢出量分別為尼莫地平1.6 ng（0.005%）、雜質(zhì)A 1.6 ng（0.005%）、雜質(zhì)B 3.2 ng（0.005%）、雜質(zhì)C 3.2 ng（0.005%）。

2.10 穩(wěn)定性試驗 取對照品溶液及樣品溶液在室溫避光放置0、12、24 和48 h 后依法測定，觀察主峰及各雜質(zhì)峰面積的變化，雜質(zhì)總量RSD 為1.9%。試驗結(jié)果表明對照品溶液及樣品溶液在48 h 內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.11 樣品測定結(jié)果 按“2.1”項下色譜條件測定10批樣品，測定結(jié)果見表5。

表5 樣品測定結(jié)果

3 討論

尼莫地平破壞試驗結(jié)果表明，酸、堿、高溫、氧化破壞產(chǎn)生的降解雜質(zhì)較少，僅對光照敏感，其降解產(chǎn)物主要為光降解產(chǎn)物雜質(zhì)A。而尼莫地平結(jié)構(gòu)為二氫吡啶類藥物，其特點即光不穩(wěn)定性，因此在試驗過程中溶液制備及測定應(yīng)嚴(yán)格避光操作，并且原料及其制劑均應(yīng)對該產(chǎn)物嚴(yán)格把控，以控制產(chǎn)品質(zhì)量。

按“2.1”項下色譜條件測定，采用Agilent 1260 液相色譜儀、ZORBAX Eclipse Plus C18色譜柱（100 mm×4.6 mm，3.5 μm）測定10 批樣品，測定結(jié)果與島津LC-20A 高效液相色譜儀、Venusil XBP C18色譜柱（100 mm×4.6 mm，5 μm)所得結(jié)果基本一致，表明耐用性良好。測定結(jié)果表6。

表6 樣品耐用性測定結(jié)果

流動相中四氫呋喃具有氧化性，在放置過程中極易形成過氧化物，可能造成液相色譜圖的基線不穩(wěn)，出現(xiàn)此情況下建議使用新開封試劑制備。因此，若試驗過程中出現(xiàn)基線不穩(wěn)，可考慮由于流動相放置時間較長引起，重新配制流動相予以考查。