呂智鵬

（漳州市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，福建 漳州 363000）

食用菌母種多數(shù)采用試管培養(yǎng)基保存和擴(kuò)繁（下文簡(jiǎn)稱試管菌種），是食用菌工廠化、產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的主要菌源，其質(zhì)量?jī)?yōu)劣關(guān)系著食用菌成品的產(chǎn)量和等次，身系廣大菇農(nóng)的經(jīng)濟(jì)利益。近年來(lái)，各地因?yàn)樵嚬芫N質(zhì)量問(wèn)題所造成的生產(chǎn)事故屢見(jiàn)不鮮，常見(jiàn)問(wèn)題有菌種感染雜菌、老化、退化、變異、酸化、拮抗、品種錯(cuò)用等，特別是母種菌苔選用和轉(zhuǎn)接不當(dāng)，而造成原菌種特性退化、變異等問(wèn)題屢見(jiàn)不鮮，且這類問(wèn)題不易察覺(jué)，難以追溯，最終易造成食用菌生長(zhǎng)能力衰退、產(chǎn)量降低、品質(zhì)下降等現(xiàn)象[1]。為此，本文通過(guò)對(duì)比試驗(yàn)和理論分析，探析試管母種不同區(qū)域菌苔的特性差異和對(duì)外界因素的適應(yīng)能力，為菌種從業(yè)人員和菇農(nóng)提供高效使用菌種的理論依據(jù)，希望能夠減少菌種事故的發(fā)生，提高食用菌生產(chǎn)效益。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 培養(yǎng)基試管制備

培養(yǎng)基配方：去皮馬鈴薯250g、葡萄糖20g、硫酸鎂0.5g、磷酸二氫鉀2g、瓊脂20g、水1000ml。將馬鈴薯加水煮沸15～30分鐘，以馬鈴薯不爛為宜，經(jīng)紗布過(guò)濾，濾液加入瓊脂，加熱至瓊脂液化，再依次加入其他材料，邊煮邊攪拌，直至全部溶化[2]，用10%氫氧化鈉、10%鹽酸等調(diào)節(jié)ph值至7.0左右。培養(yǎng)基趁熱分裝入試管內(nèi)（18mm×180mm），裝量為不超過(guò)試管長(zhǎng)的1/5，干凈管口塞棉花或橡皮塞。

培養(yǎng)基試管放置高壓鍋內(nèi)，通電加熱至鍋內(nèi)壓力49千帕?xí)r，打開(kāi)排氣閥，排凈鍋內(nèi)冷氣，再加熱至121℃～126℃、蒸氣壓力98～130千帕，滅菌30分鐘后，逐步排汽冷卻后，將試管取出，一次性傾斜擺放（斜面長(zhǎng)度為試管總長(zhǎng)度的1/2左右），待培養(yǎng)基溫度與室溫一致，存于培養(yǎng)室內(nèi)備用，適時(shí)無(wú)菌檢查。

1.1.2 接種前其他材料準(zhǔn)備

接種針（見(jiàn)圖1）等工具以棉紗包裹，高溫殺毒，備用。將棉花剪成母指大小裝入廣口瓶中，浸滿酒精，制成消毒酒精棉，備用。接種室地板用水洗凈，保持微濕，利用水表面吸附空氣中飛塵；培養(yǎng)基試管、接種針?biāo)闹芊謩e用酒精棉擦拭，斜跨于接種臺(tái)（常見(jiàn)有超凈工作臺(tái)）臺(tái)面案幾上，打開(kāi)接種臺(tái)和房間內(nèi)的紫外線燈，操作人員回避，房?jī)?nèi)殺菌1h后，關(guān)閉紫外線燈。取出試管母種，連同接種針?biāo)闹苡镁凭尴?，接種針前半段用酒精燈火焰輕微灼燒，徹底消毒。

1.2 對(duì)比實(shí)驗(yàn)

選取1支白背木耳43-28試管母種，要求培養(yǎng)基無(wú)干縮或發(fā)黃、背面無(wú)斑點(diǎn)、斜面前端無(wú)多層菌絲或雜色，菌苔的表面無(wú)皺折，菌種無(wú)水浸狀或柔軟等，接種開(kāi)始先將母種原接種菌苔移出。在母種上等距離均勻（見(jiàn)圖2）選取10個(gè)菌苔（2mm×2mm）轉(zhuǎn)接至10個(gè)培養(yǎng)基試管（ck），下一步在母種中心區(qū)域、一般區(qū)域、邊沿區(qū)域（見(jiàn)圖3）各取10個(gè)菌苔（2mm×2mm）分別轉(zhuǎn)接至10個(gè)培養(yǎng)基試管，待轉(zhuǎn)接母種培養(yǎng)成熟后，每支試管母種再轉(zhuǎn)接2瓶原種，每瓶原種培養(yǎng)成熟后再轉(zhuǎn)接25個(gè)菌包，各處理原種或菌包接種量均相同。即用一根白背毛木耳43-28試管母種等距離均勻選取菌苔擴(kuò)繁500個(gè)菌包（ck），中心區(qū)域菌苔擴(kuò)繁500個(gè)菌包（方案1），一般區(qū)域菌苔擴(kuò)繁500個(gè)菌包（方案2），邊沿區(qū)域菌苔擴(kuò)繁500個(gè)菌包（方案3），待菌包培養(yǎng)完成，給予適宜生長(zhǎng)條件出菇，稱量各自鮮品產(chǎn)量。為避免菌種、菌包次品（感染雜菌、拮抗、酸化等）廢棄，影響試驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，具體實(shí)驗(yàn)操作會(huì)適當(dāng)增加菌種和菌包的制作量，但列入統(tǒng)計(jì)的數(shù)量不變。

另外用白背毛木耳03216、杏鮑菇大、秀珍菇B、平菇PL-9901母種（見(jiàn)表1）重復(fù)做以上實(shí)驗(yàn)，共五組對(duì)比實(shí)驗(yàn)。每組實(shí)驗(yàn)的操作者、工具、培養(yǎng)材料、環(huán)境、時(shí)間完全相同，使用同一標(biāo)準(zhǔn)稱量鮮品產(chǎn)量，對(duì)每組對(duì)比實(shí)驗(yàn)的ck和三個(gè)方案產(chǎn)量進(jìn)行對(duì)比（見(jiàn)表2）。

表1 供試驗(yàn)的食用菌菌株（漳州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所提供）

2 結(jié)果和分析

2.1 不同方案實(shí)驗(yàn)結(jié)果和對(duì)比分析

根據(jù)表2橫向?qū)Ρ确治隹芍褰M對(duì)比實(shí)驗(yàn)的方案1、方案2產(chǎn)量多數(shù)比方案3高，其中方案1平均比方案3高3%、方案2平均比方案3高2.8%，即母種中心區(qū)域菌苔、一般區(qū)域菌苔相比邊沿區(qū)域菌苔的菌種特性保持較好，擴(kuò)繁出的菌包出菇產(chǎn)量較高；而中心區(qū)域菌苔相比一般區(qū)域菌苔菌種特性差別較小，擴(kuò)繁菌包出菇產(chǎn)量十分接近，差異性平均為0.2%。

表2 五組對(duì)比實(shí)驗(yàn)產(chǎn)量比較（產(chǎn)量單位：kg/500個(gè)菌包）

表3 母種邊沿區(qū)域劣質(zhì)菌苔的直觀特征和現(xiàn)象分析

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根據(jù)影響因素分析，母種邊沿區(qū)域菌苔特性保持較差，可能是其菌苔底部培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)量較少，受試管外界溫度、光照、機(jī)械動(dòng)能等變化因素影響最直接、單位面積受量最大、緩沖空間小，同時(shí)也是試管內(nèi)部水汽蒸發(fā)、回流的主要區(qū)域，所以菌苔容易出現(xiàn)變異、老化、過(guò)濕或過(guò)干、出現(xiàn)原基等現(xiàn)象[3]，具體直觀現(xiàn)象和分析見(jiàn)表3；相反母種中心區(qū)域和一般區(qū)域菌苔底部培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)量充足，受試管外界溫度、光照、機(jī)械動(dòng)能等變化因素影響量小、緩沖空間大，且并非試管內(nèi)部水汽蒸發(fā)、回流的主要區(qū)域，所以菌苔較不容易出現(xiàn)變異、老化、過(guò)濕或過(guò)干、出現(xiàn)原基等現(xiàn)象。嚴(yán)格上講，母種中心區(qū)域和一般區(qū)域的菌苔生長(zhǎng)環(huán)境十分相近，其菌種特性保持效果也相差不大，并非中心區(qū)域菌苔一定優(yōu)于一般區(qū)域菌苔。

2.2 不同菌種實(shí)驗(yàn)結(jié)果和對(duì)比分析

從表2縱向?qū)Ρ确治隹梢钥闯霾煌秤镁N進(jìn)行以上對(duì)比實(shí)驗(yàn)，所得出的產(chǎn)量差異性有所不同，這可能與不同菌種對(duì)溫、光、水、汽、動(dòng)能等因素的適應(yīng)能力不同有關(guān)，有其適應(yīng)的上下限和最佳點(diǎn)，當(dāng)某些因素超出其生長(zhǎng)耐受極限時(shí)，將使其失去原有的調(diào)節(jié)能力，降低生理功能，無(wú)法表達(dá)原有的優(yōu)良性狀。如：白背毛木耳菌絲生長(zhǎng)力較強(qiáng)，對(duì)外界因素的適應(yīng)面較廣，所以實(shí)驗(yàn)表現(xiàn)出的差異性在2.7%～3.1%；而杏鮑菇菌絲對(duì)生長(zhǎng)環(huán)境要求較為苛刻，對(duì)外界因素的適應(yīng)面較窄，實(shí)驗(yàn)表現(xiàn)出的差異性為7.3%。

3 討論與結(jié)論

3.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)論

試管母種不同區(qū)域的菌苔特性存在一定差異，主要體現(xiàn)在擴(kuò)繁菌包產(chǎn)量方面。一般情況下中心區(qū)域、一般區(qū)域的菌苔特性要優(yōu)于邊沿區(qū)域的菌苔特性，而中心區(qū)域和一般區(qū)域的菌苔特性比較相近。此差異性對(duì)于生產(chǎn)條件要求較高、適應(yīng)能力較弱的菌種體現(xiàn)較為明顯，而對(duì)于生產(chǎn)要求粗獷、適應(yīng)能力較強(qiáng)的菌種體現(xiàn)較不明顯。

3.2 理論適用性

本實(shí)驗(yàn)所推導(dǎo)出的理論不僅可應(yīng)用于母種，對(duì)于原種和菌包的菌塊特性分析同樣具有借鑒意義。原種和菌包不同位置的菌塊特性同樣存在差異，而且情況和母種相仿，其菌塊靠近容器部分（也簡(jiǎn)稱為邊沿區(qū)域）接受外界溫、光、動(dòng)能的影響較大，容易造成干濕交替、ph值下降、拮抗、出現(xiàn)原基的現(xiàn)象，若在養(yǎng)菌和出菇階段無(wú)設(shè)備控溫控濕控氣情況下，各影響因素變化幅度較大，劣質(zhì)效應(yīng)將更明顯。

3.3 本試驗(yàn)有待商榷和提升事項(xiàng)

（1）母種邊沿區(qū)域菌苔受外界因素影響而產(chǎn)生的變異往往是有利的因素少、不利的因素多，但并非絕對(duì)，若發(fā)現(xiàn)邊沿區(qū)域菌苔具有優(yōu)良特性也可提純使用；（2）產(chǎn)量是食用菌生產(chǎn)的重要指標(biāo)，但并非唯一指標(biāo)，另外還有色澤、口感等指標(biāo)。（3）本實(shí)驗(yàn)隨著實(shí)驗(yàn)所用母種品種、生產(chǎn)原種和菌包數(shù)量的增加，而使實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)更有代表性；在不同區(qū)域菌苔轉(zhuǎn)接代數(shù)越多的情況下，其特性差異可能會(huì)更加明顯。（4）母種不同區(qū)域菌苔特性差異會(huì)隨著容器的變化而有所不同，如選用培養(yǎng)皿或更大試管，當(dāng)然這樣也會(huì)造成菌齡差異大、增加雜菌感染率等現(xiàn)象。

3.4 影響母種特性變化的因素討論

嚴(yán)格上講影響母種特性變化的因素是多方面的，從菌源特性上講，我們采集的菌種也可能是幾個(gè)品種雜交和混合而成的，種性并不穩(wěn)定，生產(chǎn)上前幾年可能表現(xiàn)良好，幾年后種性逐漸變差[4]；菌種在培養(yǎng)和保存過(guò)程中，細(xì)胞代謝所產(chǎn)生的有機(jī)酸也會(huì)使pH值下降，并增加有毒物質(zhì)的積累，可使部分細(xì)胞器發(fā)育不良好和造成代謝失衡現(xiàn)象，繼而造成退化現(xiàn)象[5]；外界自然環(huán)境和人為操作時(shí)對(duì)母種的特性造成影響。上述所提的影響因素，對(duì)于母種制作人員來(lái)講有些屬于可控因素，有些屬于不可控因素。

3.4.1 接種期間菌苔選擇和工具使用影響

一般母種生產(chǎn)單位在選用健康優(yōu)良母種、使用常規(guī)培養(yǎng)基、給予良好培養(yǎng)條件的前提下，母種不同區(qū)域菌苔的選擇成為影響試管菌種生產(chǎn)質(zhì)量的重要因素，是溫、光、水、汽、動(dòng)能、藥劑等人為因素對(duì)母種影響的集中體現(xiàn)，也是擴(kuò)繁菌包質(zhì)量好壞的關(guān)鍵，且這些因素的影響將會(huì)隨著轉(zhuǎn)接代數(shù)增加表現(xiàn)上升態(tài)勢(shì)，呈現(xiàn)從量變轉(zhuǎn)而到質(zhì)變的變異退化性過(guò)程[6]。另外轉(zhuǎn)接菌苔的大小也會(huì)影響母種特性的發(fā)揮，選用大塊菌苔可有效加快菌種擴(kuò)繁速度、減少雜菌感染機(jī)率，但擴(kuò)繁菌種生命力相對(duì)較差[7]；而選用小塊菌苔擴(kuò)繁，生長(zhǎng)速度相比較漫、雜菌感染機(jī)率較高，但擴(kuò)繁菌種生命力較好。

接種工具的選擇也是母種特性能否保持的關(guān)鍵，本試驗(yàn)工具接種針相比接種刀、接種鏟，其特點(diǎn)在于：（1）避免工具交替使用，降低工具與菌苔的接觸面，有效減少雜菌感染機(jī)率和熱傳導(dǎo)、藥劑影響（工具消毒后接觸菌苔）；（2）接種速度更快，成功率更高；（3）接種針相比其他接種工具更小、更靈活，但對(duì)工作人員的技術(shù)要求較高。

3.4.2 運(yùn)輸和使用過(guò)程影響

外界因素對(duì)母種的影響不僅局限在接種和培養(yǎng)過(guò)程，運(yùn)輸和使用期間溫光水汽的影響也很重要。溫度方面，試管母種受外界氣候影響，局部溫度可能高于40℃或低于10℃，影響營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)，刺激生殖生長(zhǎng)；光線方面， 試管母種直接或間接受到紫外線、射線的照射，容易打破原生長(zhǎng)周期，甚至出現(xiàn)原基；水汽方面，母種的培養(yǎng)基水份隨著時(shí)間推遲逐漸減少，當(dāng)受到外部溫度大幅度變化時(shí)，又容易產(chǎn)生水蒸汽繼而回流的現(xiàn)象，造成培養(yǎng)基含水量不均勻，影響菌絲健康生長(zhǎng)；動(dòng)能方面，試管在運(yùn)輸、檢查過(guò)程中與外界頻繁觸碰、震動(dòng)，這些動(dòng)能也將傳遞到菌種本身，增加變異機(jī)率。從外觀上講，上述因素的影響將在菌絲呈色、質(zhì)感、生長(zhǎng)速度、爬壁能力等[8]方面有所體現(xiàn)。