SARS- CoV- 2的生物學(xué)性狀和病毒檢測(cè)方法以及COVID- 19的治療現(xiàn)狀

張瑞，吳國(guó)球,2

(1.東南大學(xué) 醫(yī)學(xué)院，江蘇 南京 210009； 2.東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院 檢驗(yàn)科，江蘇 南京 210009)

由新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)引起的2019新型冠狀病毒肺炎(COVID-19)大流行，截止至2020年6月15日，確診病例已達(dá)700多萬(wàn)人，在全球造成至少430 241 人死亡(https://covid19.who.int/)。SARS-CoV-2屬冠狀病毒科，可引起呼吸系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)疾病[1]。迄今為止，共鑒定出6種人冠狀病毒，分別為人冠狀病毒229E型(HCoV-229E)、人冠狀病毒HKU1型(HCoV-HKU1)、人冠狀病毒OC43型(HCoV-OC43)、人冠狀病毒NL63型(HCoV-NL63)、嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒(SARS-CoV)和中東呼吸綜合征冠狀病毒(MERS-CoV)[2]。SARS-CoV-2有約30 kb的單鏈正鏈RNA基因組，屬冠狀病毒科，可引起呼吸系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)疾病[1]，被推斷源于蝙蝠，通過人畜共患傳播給人類[3- 4]。傳染源主要是SARS-CoV-2感染患者，包括無(wú)癥狀感染者，以呼吸道飛沫和接觸傳播為主要傳播途徑，傳播迅速[5]。早期的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)是確?；颊弑M早收治、及時(shí)管控，阻止疫情發(fā)展的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。目前正在使用抗病毒、抗炎藥物治療這種疾病，尚無(wú)針對(duì)SARS-CoV-2 感染患者的特定治療方法。在此背景下，作者綜述了SARS-CoV-2的基本生物學(xué)特性，檢測(cè)技術(shù)的基本原理、技術(shù)特點(diǎn)，診斷，潛在治療靶點(diǎn)和最新治療藥物研究信息，為臨床醫(yī)生及科研工作者提供更好的防治參考和研究思路。

1 SARS-CoV-2的生物學(xué)特性

我國(guó)科學(xué)家將武漢一些不明原因肺炎患者的支氣管肺泡灌洗液(BALF)接種到人氣道上皮細(xì)胞中進(jìn)行培養(yǎng)分離,通過透射電鏡進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)含有遺傳物質(zhì)，直徑60～140 nm，包膜上有獨(dú)特的蛋白尖刺的病毒顆粒[6]，其整體結(jié)構(gòu)與冠狀病毒科一致。

SARS-CoV-2是基因組長(zhǎng)約30 kb的正單鏈RNA病毒，其基因組具有典型的冠狀病毒結(jié)構(gòu)，包括兩端非翻譯區(qū)(untranslated regions, UTR)和編碼27種蛋白質(zhì)的開放閱讀框區(qū)(open reading frame, ORF)。對(duì)比多種冠狀病毒序列發(fā)現(xiàn)，ORF的非結(jié)構(gòu)蛋白編碼區(qū)的序列較為保守，而結(jié)構(gòu)蛋白編碼區(qū)序列為適應(yīng)環(huán)境而具有多樣性[7]。SARS-CoV-2與穿山甲(Manis javanica)和蝙蝠CoV RaTG13的冠狀病毒有74%～99%的一致性[6,8- 11]。最近的報(bào)道表明，SARS-CoV-2是一種源自蝙蝠的改良冠狀病毒[10,12]，通過人畜傳播進(jìn)入人類[3- 4]。

SARS-CoV-2主要有4個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白，分別為刺突蛋白(spike surface protein, S蛋白)、小包膜蛋白(small envelope protein, E蛋白)、基質(zhì)蛋白(matrix protein, M蛋白)和核衣殼蛋白(nucleocapsid protein, N蛋白)。S蛋白介導(dǎo)病毒識(shí)別宿主細(xì)胞受體，促進(jìn)膜融合，并誘導(dǎo)免疫反應(yīng)產(chǎn)生中和抗體，其中S蛋白的受體結(jié)合域(receptoR-binding domain，RBM)能直接與血管緊張素酶2(angiotensin converting enzyme 2, ACE2)受體結(jié)合，隨后跨膜絲氨酸蛋白酶裂解ACE2以激活病毒進(jìn)入，從而感染人類、小鼠、蝙蝠和豬[13- 15]。ACE2在肺中高表達(dá)，使肺組織對(duì)SARS-CoV-2感染高度敏感[16]。E蛋白和M蛋白均參與病毒顆粒的組裝和釋放[17- 18]。N蛋白序列保守程度高，在病毒復(fù)制過程中發(fā)揮重要作用，能刺激機(jī)體產(chǎn)生高親和力的抗體，但是一般沒有中和活性[19]。

2 流行病學(xué)和臨床表現(xiàn)

SARS-CoV-2潛伏期為1～14 d，多為3～7 d，平均6.4 d。SARS-CoV-2確診病例的主要表現(xiàn)為發(fā)熱、咳嗽、乏力，少數(shù)病例伴有流涕、咽痛和腹瀉等癥狀[20]。發(fā)病早期白細(xì)胞總數(shù)正?；蚪档?，淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)正?；驕p少。SARS-CoV-2感染患者的嗜中性粒細(xì)胞與淋巴細(xì)胞比值(NLR)是疾病嚴(yán)重的早期預(yù)警指標(biāo)[21]。重癥患者主要是老年人[22]，多在發(fā)病1周后出現(xiàn)呼吸困難和(或)低氧血癥，可快速進(jìn)展為急性呼吸窘迫綜合征、膿毒癥休克及多器官功能衰竭等[20,22]。重型、危重型病例病程中可表現(xiàn)為中低熱,甚至無(wú)明顯發(fā)熱，而輕型患者僅表現(xiàn)為低熱、輕微乏力等，無(wú)肺炎表現(xiàn)[20]。從目前收治的病例情況看，多數(shù)患者預(yù)后良好，少數(shù)患者病情危重。老年人和有慢性基礎(chǔ)疾病者預(yù)后較差。目前，已知SARS-CoV-2主要經(jīng)呼吸道飛沫和接觸途徑傳播，傳染源主要是SARS-CoV-2感染患者[5]。因此，有效的篩查和早期診斷對(duì)于控制和治療COVID-19尤為重要。

3 核酸檢測(cè)

病毒核酸檢測(cè)作為 SARS-CoV-2感染確診標(biāo)準(zhǔn)，具有靈敏度高、特異度好、可早期診斷等優(yōu)點(diǎn)[23]，主要用于檢測(cè)人體是否攜帶病毒，能檢測(cè)處于窗口期的患者，適用于早期確診，以盡快找出可能處于潛伏期的無(wú)癥狀感染者，減少病毒的進(jìn)一步擴(kuò)散。另一方面，核酸檢測(cè)可以定量檢測(cè)病毒的拷貝數(shù)，進(jìn)而動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)病毒感染的程度和治療的效果。常用的核酸檢測(cè)方法有測(cè)序法、實(shí)時(shí)熒光反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法、恒溫?cái)U(kuò)增法、雜交捕獲免疫熒光法和RNA捕獲探針法，熒光定量PCR法是目前臨床上廣泛應(yīng)用于SARS-CoV-2核酸檢測(cè)的方法。

3.1 基因測(cè)序技術(shù)

分子診斷技術(shù)可以準(zhǔn)確識(shí)別未知的病原體，也為后續(xù)SARS-CoV-2核酸檢測(cè)提供了特異性基因組序列信息。截至2020年3月24日，SARS-CoV-2的基因組和蛋白質(zhì)組組成已經(jīng)確定。我國(guó)科學(xué)家通過宏基因組測(cè)序測(cè)定了從患者體內(nèi)分離出的SARS-CoV-2序列，并向世界衛(wèi)生組織公開[5,24]。Chen 等[11]提倡使用低輸入元基因組下一代測(cè)序(mNGS)方法對(duì)從BALF中提取的所有核酸組分進(jìn)行完全無(wú)偏倚的擴(kuò)增，得出標(biāo)本中包含的病原微生物相關(guān)序列信息，對(duì)標(biāo)本中核酸片段進(jìn)行測(cè)序、生物信息分析和比對(duì)，并迅速鑒定出樣本中唯一含量極高的病原體。最近Di等[25]開發(fā)了一種基于細(xì)菌Tn5轉(zhuǎn)座酶快速建立RNA測(cè)序的轉(zhuǎn)錄組分析(RNA-seq)文庫(kù)的新方法，該方法隨機(jī)結(jié)合RNA/DNA異質(zhì)雙鏈，并在逆轉(zhuǎn)錄后直接將測(cè)序適配器添加到RNA上，不需要進(jìn)行第2鏈互補(bǔ)DNA (cDNA)合成，可檢測(cè)到單個(gè)細(xì)胞的RNA，提升SARS-CoV-2等樣本的測(cè)序質(zhì)量和速度。但是基因測(cè)序因存在儀器設(shè)備要求較高、費(fèi)用昂貴、操作復(fù)雜、需專業(yè)技術(shù)人員分析等不足，不適用于臨床常規(guī)檢測(cè)工作。

3.2 定量RT-PCR法

定量RT-PCR方法檢測(cè)SARS-CoV-2核酸是最有效的且廣泛應(yīng)用于臨床的早期病原學(xué)診斷方式，其檢測(cè)基本原理是先將特定區(qū)域的RNA(以SARS-CoV-2病毒RNA的ORF 1ab、N基因?yàn)橹?逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，再通過熒光探針對(duì)cDNA特定片段進(jìn)行PCR反應(yīng)產(chǎn)物實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，根據(jù)擴(kuò)增曲線得出起始RNA模板量。定量RT-PCR方法檢測(cè)有以下3個(gè)重要步驟：(1) RNA提取，注意細(xì)胞內(nèi)源性和外源性RNA的降解；(2) 特異性引物和探針的設(shè)計(jì)合成，是開發(fā)熒光PCR檢測(cè)試劑盒的基礎(chǔ)；(3) 反應(yīng)條件的優(yōu)化，一般在引物設(shè)計(jì)軟件推薦溫度上下2 ℃變化尋找最佳引物退火溫度，還需尋找合適的引物、模板和Mg2+濃度。目前已上市的 SARS-CoV-2核酸熒光PCR法檢測(cè)試劑盒檢測(cè)靶標(biāo)主要分為病毒基因組中ORF 1ab、N蛋白和E蛋白3個(gè)特異性區(qū)域。國(guó)家藥品監(jiān)督管理局已應(yīng)急批準(zhǔn)8種SARS-CoV-2熒光PCR法檢測(cè)試劑盒，大多數(shù)以O(shè)RF 1ab+N雙基因作為擴(kuò)增靶標(biāo)。

3.3 等溫?cái)U(kuò)增法

環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)技術(shù)是一種利用特異引物和具有鏈置換活性的Bst DNA聚合酶，在恒溫條件下進(jìn)行的特異、高效、快速的DNA擴(kuò)增技術(shù)[26- 27]，在等溫核酸擴(kuò)增技術(shù)中應(yīng)用最為廣泛，不需要專門的實(shí)驗(yàn)室設(shè)備來(lái)進(jìn)行PCR分析[28]。一些學(xué)術(shù)實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)開發(fā)了一種將LAMP和反轉(zhuǎn)錄相結(jié)合的逆轉(zhuǎn)錄環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(RT-LAMP)試驗(yàn)，在30 min內(nèi)實(shí)現(xiàn)了對(duì)SARS-CoV-2的檢測(cè)?？茖W(xué)家們首先根據(jù)NCBI 上發(fā)表的SARS-CoV-2的ORF 1ab、S和N基因的保守序列為靶點(diǎn)設(shè)計(jì)了4套LAMP引物，每套6個(gè)引物，分別是正向引物F3、反向引物B3、正向內(nèi)引物FIP、反向內(nèi)引物BIP、正向環(huán)引物L(fēng)oop F和反向環(huán)引物L(fēng)oop B，其中兩個(gè)Loop引物用來(lái)加速LAMP反應(yīng)，縮短一半原反應(yīng)的時(shí)間[29]，再利用恒溫快速核酸擴(kuò)增技術(shù)，在恒溫條件下呈指數(shù)級(jí)別放大核酸分子特性，將病毒核酸分子在30 min內(nèi)放大109～1010倍，最后將擴(kuò)增放大的核酸分子與染料結(jié)合，通過肉眼觀察顏色變化或濁度來(lái)判定樣本中是否含有目標(biāo)SARS-CoV-2分子[30- 32]。RT- LAMP法檢測(cè)與常規(guī)RT-PCR方法相比結(jié)果一致，且無(wú)需核酸提取，所需儀器大大簡(jiǎn)化(水浴鍋或金屬浴)，反應(yīng)時(shí)間大大縮短，可用于COVID-19的早期診斷，適用于在公共領(lǐng)域和醫(yī)院進(jìn)行大規(guī)模篩查。

3.4 雜交捕獲免疫熒光法

雜交捕獲免疫熒光法可快速檢測(cè)病原體核酸，無(wú)需核酸提取純化、無(wú)需PCR擴(kuò)增，通過處理液直接裂解咽拭子或痰液標(biāo)本中病原體并釋放靶核酸，靶核酸和探針形成DNA/RNA雜交體，熒光粒子對(duì)DNA/RNA雜交體進(jìn)行熒光信號(hào)識(shí)別，實(shí)現(xiàn)對(duì)樣本中目標(biāo)核酸的定性判斷。目前，國(guó)家藥品監(jiān)督管理局僅審批廈門生物科技有限公司的一個(gè)雜交捕獲免疫熒光法檢測(cè)SARS-CoV-2核酸的方法。該方法與55種常見病原微生物及其他冠狀病毒不存在交叉反應(yīng)，且常見病毒治療藥物檢測(cè)結(jié)果沒影響，完成的670例臨床試驗(yàn)的靈敏度為88.61%，特異度為94.92%，總體符合率為92.69%，應(yīng)用前景十分樂觀。

3.5 RNA捕獲探針法

國(guó)家藥品監(jiān)督管理局審批了唯一一個(gè)RNA捕獲探針法檢測(cè)SARS-CoV-2核酸的試劑盒。其原理是采用RNA特異靶標(biāo)捕獲和轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)的恒溫?cái)U(kuò)增實(shí)時(shí)檢測(cè)技術(shù)，在一個(gè)反應(yīng)管中自動(dòng)化完成核酸提取、擴(kuò)增步驟，90 min 可出結(jié)果，并可實(shí)現(xiàn)連續(xù)并行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果靈敏度、特異度能夠達(dá)到傳統(tǒng)PCR方法的水平。

目前，基于患者咽拭子等標(biāo)本的病毒核酸檢測(cè)是臨床診斷SARS-CoV-2的常用方法，盡管在SARS-CoV-2流行之初該方法在確定患者的SARS-CoV-2感染方面發(fā)揮了至關(guān)重要的作用，但在臨床應(yīng)用中遇到了一些質(zhì)疑。最近的標(biāo)本量為4 880份的研究中發(fā)現(xiàn)，RT-PCR陽(yáng)性檢出率僅為38%，有大量假陰性病例[33]。當(dāng)前SARS-CoV-2核酸檢測(cè)假陰性的可能原因：(1) 人體內(nèi)的病毒量還未達(dá)到可檢測(cè)到的程度；(2) 從鼻腔向下到呼吸道細(xì)胞的感染和復(fù)制能力逐漸變?nèi)鮗34]，鼻、咽拭子是最常用的采樣方式，可能會(huì)出現(xiàn)未采集或沒采集足夠量的上皮細(xì)胞；(3) SARS-CoV-2屬于 RNA 病毒，很不穩(wěn)定，容易產(chǎn)生變異，且保存、運(yùn)輸、處理標(biāo)本不當(dāng)還會(huì)導(dǎo)致核酸降解；(4) 現(xiàn)階段的SARS-CoV-2核酸檢測(cè)試劑均為應(yīng)急性審批，檢測(cè)試劑盒靈敏度不夠，需進(jìn)一步臨床驗(yàn)證后優(yōu)化。

4 抗體檢測(cè)

SARS-CoV-2感染3～5 d血清特異性抗體逐漸產(chǎn)生，最早出現(xiàn)的是IgM抗體，但該抗體維持時(shí)間短、濃度低、親和力較低，在血中持續(xù)數(shù)日至數(shù)周，是急性期感染的診斷指標(biāo)；然后出現(xiàn)IgG抗體，且在IgM接近消失時(shí)IgG的含量達(dá)到高峰，它濃度高、維持時(shí)間長(zhǎng)、親和力高，血清IgG陽(yáng)性提示感染中后期或既往感染[35]。通過檢測(cè)患者血清中IgM和IgG的陽(yáng)性情況，可有助于臨床醫(yī)生判斷患者所處病毒感染的不同時(shí)期。據(jù)報(bào)道，SARS-CoV-2感染后3～6 d血液中可檢測(cè)到IgM抗體，8 d血液中可檢測(cè)到IgG抗體[36- 37]，此后IgG抗體會(huì)一直保留[38]?？贵w檢測(cè)常用的方法有酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)、膠體金法、化學(xué)發(fā)光法等，3種方法均可測(cè)定IgM/ IgG總抗體或分別檢測(cè)IgM和IgG抗體兩類，但ELISA的檢測(cè)速度慢、步驟繁瑣，還易污染，目前臨床使用較少。目前已獲得國(guó)家藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的SARS-CoV-2 IgM/IgG抗體檢測(cè)試劑盒主要基于膠體金法。

4.1 膠體金法

膠體金免疫層析技術(shù)是以硝酸纖維素膜為固相載體，膠體金為標(biāo)記物，通過抗原抗體特異性反應(yīng)建立起來(lái)的一種新型診斷技術(shù)。膠體金法檢測(cè)SARS-CoV-2原理是與鼠抗人 IgM/ IgG抗體偶聯(lián)的膠體金涂于膠體金墊上，硝酸纖維素膜上固定特異的SARS-CoV-2抗原。陽(yáng)性樣品滴加到樣品墊后，由于毛細(xì)作用向前移動(dòng)，并與膠體金墊上的復(fù)合物結(jié)合，當(dāng)其移動(dòng)到檢測(cè)線處時(shí)，與檢測(cè)線上包被的特異性抗原結(jié)合，使得流動(dòng)相在檢測(cè)線處聚集引發(fā)膠體金顯影反應(yīng)，為紅色反應(yīng)線。膠體金法檢測(cè)SARS-CoV-2無(wú)需特殊處理標(biāo)本，僅需約10 μl的血標(biāo)本，10～15 min免疫反應(yīng)后便可肉眼觀測(cè)結(jié)果。該方法突破了現(xiàn)有測(cè)序技術(shù)對(duì)人員、場(chǎng)所的限制，縮短檢測(cè)時(shí)間，操作快速方便，廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)醫(yī)療單位及現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。目前已有多家生物公司研發(fā)出檢測(cè)SARS-CoV-2 IgM和IgG抗體的膠體金試劑，這為SARS-CoV-2感染的輔助診斷和流行病學(xué)調(diào)查提供了一個(gè)極好的檢測(cè)手段。

4.2 化學(xué)發(fā)光技術(shù)

化學(xué)發(fā)光法是利用納米磁珠標(biāo)記病毒的重組蛋白捕獲血液樣本中的病毒抗體IgM或者IgG，利用與吖啶酯偶聯(lián)的二抗識(shí)別抗體，加入激發(fā)液后通過相對(duì)發(fā)光強(qiáng)度測(cè)定化學(xué)發(fā)光反應(yīng)?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)具有靈敏度高、線性范圍寬、檢測(cè)速度快、試劑無(wú)放射性污染等特點(diǎn)，一直廣泛應(yīng)用于臨床樣本的檢測(cè)。 目前國(guó)內(nèi)已有深圳博奧賽斯等多家公司研發(fā)出了化學(xué)發(fā)光試劑盒用于檢測(cè)SARS-CoV-2 IgM或IgG抗體，而廈門萬(wàn)泰凱瑞公司開發(fā)了首個(gè)獲批的雙抗原夾心法總抗體檢測(cè)試劑，可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化批量檢測(cè)，但依賴于配套化學(xué)發(fā)光儀器。

抗體檢測(cè)試劑盒的陽(yáng)性預(yù)判值的設(shè)定存在一定誤差，影響檢測(cè)靈敏度、特異度，從而導(dǎo)致一定數(shù)量的誤判。產(chǎn)生假陽(yáng)性的因素：(1) 試劑盒中抗原與SARS-CoV-2或其他亞屬冠狀病毒有交叉反應(yīng)[37]；(2) 患者自身有某些基礎(chǔ)疾病而長(zhǎng)期服用某種藥物或免疫功能異常，標(biāo)本中存在自身抗體、嗜異性抗體、類風(fēng)濕因子、非特異IgM等[15]，具有一定的吸附性，影響免疫測(cè)定；(3) 標(biāo)本溶血使血紅蛋白高濃度，在膠體金法的檢測(cè)區(qū)堆積形成非特異性條帶，干擾目視法判定結(jié)果；(4) 細(xì) 菌污染,其中的疏水性的菌體碎片與金標(biāo)粒子或捕捉抗體發(fā)生結(jié)合，影響判讀。產(chǎn)生假陰性的因素：(1) 無(wú)論是IgM 還是IgG，從病毒感染到抗體產(chǎn)生均存在窗口期，因此，在潛伏期和感染初期特異性抗體還沒有產(chǎn)生或者產(chǎn)生量少，低于檢測(cè)下限而不能檢出；(2) 病毒變異導(dǎo)致抗體決定簇改變，現(xiàn)有檢測(cè)所用病毒抗原無(wú)法與之結(jié)合。

研究發(fā)現(xiàn)，雖然IgG的血清陽(yáng)性率最高，但有的人僅IgM或IgG陽(yáng)性[36,39]，因此，應(yīng)用過程中測(cè)定總抗體濃度可顯著提高靈敏度[40]。對(duì)于現(xiàn)有抗體檢測(cè)試劑來(lái)說，90%以上的特異性完全可以滿足臨床使用，但是在我國(guó)人群總體流行率很低的情況下，由于抗體檢測(cè)“假陽(yáng)性”和“假陰性”的局限性，不適合用于復(fù)工復(fù)產(chǎn)復(fù)學(xué)等一般人群篩查，也不適用于在流行率低地區(qū)的流行病學(xué)調(diào)查。

5 胸部影像學(xué)檢查

鑒于SARS-CoV-2核酸檢測(cè)技術(shù)受感染病程、病毒載量和標(biāo)本采集等因素影響，易產(chǎn)生假陰性結(jié)果，而影像學(xué)檢查在SARS-CoV-2早期診斷、疾病分期分級(jí)、治療指導(dǎo)、療效評(píng)價(jià)及動(dòng)態(tài)觀察中均有重要價(jià)值，是當(dāng)前篩查與輔助診斷SARS-CoV-2的主要便捷手段之一。胸部 X 線片檢查肺部早期病變的患者漏診率較高，以高分辨率CT(HRCT)檢查為主要的SARS-CoV-2篩查和輔助診斷手段。根據(jù)肺部 CT 影像表現(xiàn)不同判斷病毒感染的早期、進(jìn)展期、重癥期[41]。病變?cè)缙谥饕憩F(xiàn)為多發(fā)小結(jié)節(jié)狀和間質(zhì)改變[41- 42];進(jìn)展期病灶逐漸融合，范圍增大，境界不清，累及雙肺多個(gè)肺葉、肺段，胸部CT圖像表現(xiàn)為雙側(cè)多發(fā)毛玻璃樣滲出影和伴有實(shí)變、間質(zhì)水腫而增厚[41- 44]。重癥期患者的CT表現(xiàn)為雙肺彌漫性病灶，大范圍實(shí)變，支氣管充氣征常見，呈“白肺”[41,43]。

目前SARS-CoV-2確診主要依靠病毒核酸檢測(cè)，但核酸檢測(cè)存在采樣不合格導(dǎo)致的漏診、對(duì)檢測(cè)條件要求較高及檢測(cè)流程時(shí)間長(zhǎng)等不足[45]。與核酸檢測(cè)相比，抗體檢測(cè)標(biāo)本易采集且質(zhì)量有保證、檢測(cè)簡(jiǎn)單快捷、準(zhǔn)確、容易實(shí)現(xiàn)高通量、成本低等優(yōu)點(diǎn)，但其檢測(cè)往往滯后于核酸檢測(cè)，在檢測(cè)靈敏度上也低于核酸檢測(cè)，是對(duì)SARS-CoV-2核酸檢測(cè)假陰性有效互補(bǔ)的檢測(cè)指標(biāo)[46]，也用于與核酸檢測(cè)協(xié)同使用對(duì)疑似病例診斷。動(dòng)態(tài)檢測(cè)IgM和IgG變化過程，更能對(duì)SARS-CoV-2感染的肺炎進(jìn)行輔助診斷和反映疾病進(jìn)程[47]。CT檢查只有在肺部已經(jīng)產(chǎn)生炎癥反應(yīng)、組織器官發(fā)生器質(zhì)性病變的情況下才能在影像學(xué)上呈現(xiàn)異常，具有一定的滯后性。因此，SARS-CoV-2的診斷應(yīng)結(jié)合臨床特征、胸部影像學(xué)、核酸檢測(cè)和抗體檢測(cè)確定。

6 SARS-CoV-2的治療

SARS-CoV-2 感染患者沒有特定的治療方法，危重病人的病死率高達(dá)60%，開發(fā)新的降低疾病嚴(yán)重程度和病例死亡率的藥物和疫苗是重中之重。由于SARS-CoV-2與ACE2的結(jié)合依賴于與絲氨酸蛋白酶的相互作用和S蛋白的裂解，基于ACE2阻滯劑和絲氨酸蛋白酶特異性抑制劑或刺突蛋白的疫苗可能是治療SARS-CoV-2感染的潛在方法[48- 49]；CR3022、GSK1838705A、KT203、KT185、BMS195614等分子與病毒S蛋白的RBD具有較強(qiáng)的親和力，這些分子可以通過與病毒結(jié)合來(lái)幫助控制快速感染，成為新型抗SARS-CoV-2 的藥物[50- 51]。目前，包括中國(guó)在內(nèi)的多個(gè)國(guó)家已成功分離出 SARS-CoV-2 毒株并進(jìn)行疫苗的研發(fā)，包括重組疫苗、mRNA疫苗、腺病毒載體疫苗等[52]。Zheng等[53]通過調(diào)研大量文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞因子風(fēng)暴被認(rèn)為是SARS-CoV-2導(dǎo)致嚴(yán)重疾病和死亡的主要原因，而細(xì)胞因子產(chǎn)生的原因可能與抗體依賴性增強(qiáng)(antibody-dependent enhancement，ADE)相關(guān)的交叉反應(yīng)性抗體有關(guān)。事實(shí)證明，中老年人的抗體濃度高于年輕人，而中老年人等容易發(fā)展成為重癥，死亡率也更高[21,38,40]。由于ADE的特性開發(fā)SARS-CoV-2疫苗將更加困難。研究發(fā)現(xiàn)雷帕霉素(rapamycin, mTOR)抑制劑能夠選擇性地抑制SARS-CoV-2早期高?；颊哂洃汢細(xì)胞的激活，減少病毒交叉反應(yīng)抗體的產(chǎn)生，規(guī)避ADE效應(yīng)，降低SARS-CoV-2的嚴(yán)重程度。最新研究也支持mTOR抑制劑治療SARS-CoV-2的潛力[54- 55]。

7 展 望

面對(duì)SARS-CoV-2大流行，我們成功分離出病毒，并開發(fā)了多種核酸檢測(cè)和抗體檢測(cè)方法，為疾病的診斷和治療提供了實(shí)驗(yàn)室依據(jù)，也為疫苗的研發(fā)開啟了大門。鑒于目前檢測(cè)試劑盒多為國(guó)家緊急審批的，未進(jìn)行臨床驗(yàn)證，進(jìn)一步提高現(xiàn)有SARS-CoV-2檢測(cè)技術(shù)的靈敏度和準(zhǔn)確性、開發(fā)新型特異檢測(cè)方法成為主要的研究方向。SARS-CoV-2全球大流行，在全世界范圍內(nèi)產(chǎn)生對(duì)藥物和疫苗的迫切需求。目前尚未明確特定的手段治療COVID-19，需要繼續(xù)研發(fā)針對(duì)不同程度、不同癥狀患者的治療藥物。