何叢叢，蔣蓓蕾

（江蘇省淮安生物工程高等職業(yè)學(xué)校，江蘇 淮安 223200）

1 病原

研究表明，水霉菌具有一定的真菌特征，但卻是非真菌的類(lèi)真菌生物[1-5]，屬于茸鞭生物界(Stramenopila)中的卵菌門(mén)(Oomveota)［6］。 其病原菌主要有 S.ferax，S.monoica，S.diclina，S.parasitica等。

水霉菌可在5～26℃的條件下生長(zhǎng)，其中鮭水霉的適宜生長(zhǎng)溫度為10～30℃，最適生長(zhǎng)溫度為25℃［7］。

2 鑒定

水霉菌的鑒定技術(shù)主要包括傳統(tǒng)分類(lèi)學(xué)和現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)。

2.1 傳統(tǒng)分類(lèi)學(xué)

傳統(tǒng)分類(lèi)學(xué)對(duì)水霉菌的鑒定是基于第一代游動(dòng)孢子的釋放模式，對(duì)有性器官形態(tài)學(xué)上的描述是鑒定的主要依據(jù)，如無(wú)性生殖釋放自由的游動(dòng)孢子，有性生殖世代產(chǎn)生藏卵器，卵孢子萌發(fā)生孢子囊等[8]。不同種的水霉菌在不同條件下發(fā)育不穩(wěn)定，故而很難進(jìn)行鑒定。

2.2 現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)

現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)主要包括核糖體rDNA內(nèi)部轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(Internal Transcribed Spacer,ITS)[9]和擴(kuò)增多態(tài)性DNA(random amplification of polymorphic DNA,RAPD等)[10,11]。

2.3 核糖體rDNA 內(nèi)部轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(Internal Transcribed Spacer,ITS)

核糖體DNA中的18S、5.8S和28S的基因組序列稱為ITS，而且18S、5.8S和28S的基因組序列存在著廣泛的異種同源性，種內(nèi)相對(duì)一致,種間差異比較明顯。ITS序列片段不僅具有保守性，還易于分析。利用ITS序列對(duì)屬間、種間以及菌株間的堿基對(duì)差異進(jìn)行分析，這一方法已被廣泛應(yīng)用。如P.Y．Bastide等對(duì)收集到的400多個(gè)不同領(lǐng)域的菌株的ITS區(qū)域的核苷酸序列進(jìn)行了研究，結(jié)果表明，它們之間表現(xiàn)出一致的特定變化，并且支持基于序列數(shù)據(jù)的物種身份標(biāo)識(shí)［12］。 X.L．Ke等通過(guò)形態(tài)觀察與 ITS rDNA 序列分析相結(jié)合的方法成功地將分離自銀鯽和斑馬魚(yú)的兩株致病菌株JY和BMY鑒定為多子水霉菌［13］。張楠等利用PCR技術(shù)對(duì)從上海、江蘇、江西、四川、河北、浙江、湖北等省市的7個(gè)主要淡水養(yǎng)殖區(qū)采集到的60株致病性水霉株ITS區(qū)域進(jìn)行擴(kuò)增、測(cè)序及序列比對(duì)分析，其對(duì)基因型的鑒定分類(lèi)以及藥物研究具有重要意義［14］。

2.4 擴(kuò)增多態(tài)性DNA(random amplification of polymorphic DNA,RAPD)

樣品中的DNA經(jīng)聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增后，形成PCR產(chǎn)物，PCR產(chǎn)物經(jīng)限制性內(nèi)切酶消化后再經(jīng)電泳分離可得出DNA片段圖譜，由此根據(jù)此圖譜的種屬或個(gè)體的特異性能夠檢查不同來(lái)源的DNA。

3 病變及癥狀

3.1 表皮

水霉菌病之所以被稱為白毛病或水棉病，主要是病原具有纖細(xì)發(fā)達(dá)的內(nèi)菌絲，在魚(yú)類(lèi)表皮受損后，內(nèi)菌絲附著其上，外菌絲向外長(zhǎng)出絲狀、棉絮狀的菌絲，因此可造成魚(yú)鱗脫落，表皮形成潰瘍。水霉菌在魚(yú)體內(nèi)分泌蛋白質(zhì)分解酶，使蛋白質(zhì)分解，同時(shí)體表的傷口附著游動(dòng)的孢子，導(dǎo)致受損組織出現(xiàn)炎癥，逐漸壞死。孢子從中吸取營(yíng)養(yǎng)，致使魚(yú)類(lèi)呈現(xiàn)出躁動(dòng)不安、衰弱無(wú)力的狀態(tài)[15]。

水霉菌早期感染魚(yú)類(lèi)時(shí)，在損傷部位出現(xiàn)巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞，而長(zhǎng)期感染的結(jié)果是出現(xiàn)了多核巨細(xì)胞。嚴(yán)重的混合感染會(huì)導(dǎo)致?lián)p傷部位上皮細(xì)胞水腫、變性、壞死，甚至脫落。

3.2 臟器

咽部、鰓部的感染造成了魚(yú)類(lèi)呼吸系統(tǒng)功能衰竭，食道、肝、脾、腎等實(shí)質(zhì)性器官也會(huì)遭到感染，引起多器官功能衰竭。在顯微鏡下可以觀察到肝細(xì)胞出現(xiàn)變性，甚至壞死。

3.3 魚(yú)卵

健康的魚(yú)體不易感染水霉菌，同樣健康的魚(yú)卵亦不易感染水霉菌，只有魚(yú)卵受損或者受外界其他因素影響才較為易感。E．Thoen等研究表明，鮭魚(yú)活魚(yú)卵不能被水霉孢子感染，感染來(lái)源于死卵或未受精的卵［16］。

魚(yú)卵之間的大小差異是影響易感性的重要因素。如鯉魚(yú)和鯰魚(yú)比較小的卵在幾天內(nèi)就可以感染，而鮭魚(yú)的比較大的卵出現(xiàn)感染需要更長(zhǎng)的時(shí)間［17］。

4 防治

預(yù)防為主，防治結(jié)合，綜合治理。

4.1 傳染源

攜帶水霉菌的魚(yú)類(lèi)和魚(yú)卵是主要傳染源，而魚(yú)體和魚(yú)卵受損是感染水霉菌的主要原因。因此治療魚(yú)體的損傷部位是首要之舉。孫琪等證實(shí)，殼聚糖對(duì)魚(yú)類(lèi)體表傷口有愈合作用,在魚(yú)體感染水霉菌前用25 mg/L的殼聚糖浸泡受傷草魚(yú)3 d,結(jié)果草魚(yú)人工感染水霉菌的幾率降低[18]。其次是進(jìn)行抑菌處理。歐仁建等發(fā)現(xiàn)，異噻唑啉酮對(duì)菌株YC的抑菌效果最好,其次是硫酸銅和亞甲基藍(lán)，磺基水楊酸、戊二醛、苯扎溴銨、硫酸亞鐵、次氯酸鈉對(duì)菌株YC也具有一定的抑菌效果[19]。將受損的魚(yú)卵挑出，也可以有效避免水霉病的傳播。

4.2 傳播途徑

水環(huán)境的污染是造成水霉病傳播的主要原因之一，因此對(duì)水質(zhì)的治理刻不容緩。氯化鈉能有效抑制水霉菌的生長(zhǎng)。張書(shū)俊等研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)PDA培養(yǎng)基中NaCl質(zhì)量分?jǐn)?shù)大于3%時(shí)，病菌生長(zhǎng)被完全抑制[20]。芽孢桿菌已得到大規(guī)模推廣，其中在飼料中添加益生菌最為常見(jiàn)。賀鳳等從海洋放線菌中篩選出的水霉拮抗菌株對(duì)水霉菌生長(zhǎng)有很好的抑制效果[21]。

4.3 中藥治療

蔡焰值等借鑒漁民使用中草藥防治魚(yú)病的經(jīng)驗(yàn)，利用花椒、苦參、蛇床子、蘆薈、山柰、地膚子和土伏苓等治療該病[22]。歐仁建等研究發(fā)現(xiàn)，黃連對(duì)菌株YC的抑菌效果最好,其次是大蒜素和土槿皮[19]。李紹戊等用復(fù)方藥（丁香、黃連、土槿皮等）有效抑制了水霉菌的生長(zhǎng)[23]。