丁愛君

摘 ?要：哈伯德肉種雞對油苗免疫的應激反應較大，尤其多次的新城疫和禽流感油苗免疫對其影響后果更為嚴重。因此本試驗通過在開產前對哈伯德肉種雞減少1次雞新城疫、傳染性支氣管炎、禽流感（H9亞型）三聯(lián)滅活疫苗和重組禽流感病毒（H5+H7）滅活疫苗接種以及對油苗的免疫周齡進行調整優(yōu)化，通過血清學方法檢測新城疫、禽流感、傳染性支氣管炎抗體效價并進行抗體效價差異顯著性分析，評估油苗減負對哈伯德肉種雞免疫效果的影響。試驗結果表明，試驗組的各種抗體效價與對照組相比，抗體效價差異不顯著（P>0.05）。

關鍵詞：肉種雞;油苗;減負免疫;效果評估

我公司實驗室多年來通過血凝和血凝抑制試驗檢測新城疫、禽流感的抗體效價，合理有效地監(jiān)控新城疫和禽流感疫苗免疫的效果評估和抗體維持，近年來未發(fā)生一例新城疫或禽流感疫情。哈伯德肉種雞對油苗注射免疫的應激反應較大，尤其多次的新城疫和禽流感油苗免疫造成的應激反應更為嚴重。在可控條件下，我公司針對肉種雞的健康養(yǎng)殖提出了新城疫和禽流感疫苗油苗免疫減負項目。為此，通過開產前對哈伯德肉種雞開展新城疫和禽流感油苗免疫減少1次的試驗，以對免疫后雞群的抗體滴度進行血清學檢測來評估油苗減負對肉種雞免疫效果的影響。

1 ?試驗材料

1.1 ?新支流、禽流感油苗免疫調整 ?哈伯德肉種雞油苗免疫減負的疫苗為雞新城疫、傳染性支氣管炎、禽流感（H9亞型）三聯(lián)滅活疫苗（簡稱新支流）和重組禽流感病毒（H5+H7）三價滅活疫苗（簡稱禽流感）。

試驗組雞群：接種新支流油苗和禽流感油苗，在產蛋前減少1次免疫，只在開產前免疫4次，并對免疫時間進行了調整優(yōu)化;對照組雞群：采用原來的免疫程序，在產蛋前免疫5次。詳見表1新城疫、禽流感油苗免疫程序調整方案。

1.2 ?雞群分組 ?選擇哈伯德肉種雞場區(qū)16000羽肉種雞隨機分為試驗組和對照組，試驗組免疫4次新支流和禽流感油苗，對照組免疫5次新支流和禽流感油苗。免疫劑量和接種方法：2周齡，接種油苗0.3 mL/只，頸部皮下注射;3周齡，接種油苗0.3 mL/只，肌肉注射;其他周齡，接種油苗0.5 mL/只，肌肉注射，不同疫苗按照左、右胸肌分開注射接種。

試驗雞群是同一種群來源的哈伯德肉種雞，按照相同的飼養(yǎng)管理模式在同一場區(qū)進行管理，每個舍的飼養(yǎng)規(guī)模為8000羽。其他疫苗按照常規(guī)免疫程序執(zhí)行。

2 ?試驗方法

2.1 ?試驗方法 ?新城疫、禽流感的抗體使用血凝和血凝抑制試驗方法檢測抗體效價，參照GB/T14926.53-2001血凝試驗，GB/T14926.54-2001血凝抑制試驗。檢測抗體分別為油苗免疫后的ND，H9，H5（Re-11）、H5（Re-12）、H7（Re-2）的抗體滴度。傳染性支氣管炎（IB）抗體通過ELISA檢測其疫苗免疫效價，采用ELISA試劑盒并按照試劑盒說明書操作方法檢測。

2.2 ?血清采集 ?采集種雞群1、4、7、10、13、16、19、22、26、30、34、37周齡的血清，與免疫周齡相同的需在免疫之前采集血清。每組按照64羽的采樣數(shù)量隨機抽樣，翅靜脈采血，標明場區(qū)、樣品數(shù)、種雞品種、周齡和采血時間，待析出血清后及時分離血清凍存，對所有的試驗血清同一時間進行ND、H9、H5（Re-11）、H5（Re-12）、H7（Re-2）的抗體檢測。IB的檢測選取1、4、16、19、22、26、30周的血清進行ELISA檢測IB效價。

2.3 ?數(shù)據的統(tǒng)計分析 ?將測定的ND、H9、H5（Re-11）、H5（Re-12）、H7（Re-2）和IB抗體的數(shù)據，用Excel軟件進行數(shù)據處理，并用SPSS Statistics 19.0數(shù)據統(tǒng)計分析軟件中進行方差分析，試驗結果以“平均值±標準誤差”形式表示，以P<0.05作為差異顯著性判定標準。

3 ?試驗結果及分析

3.1 ?新城疫抗體的檢測結果 ?試驗雞群血清中ND抗體滴度（Log2）的結果見表2。

由表2可知，試驗組的抗體滴度在7周顯著低于對照組（P<0.05），其他周齡的抗體滴度差異不顯著（P>0.05）。試驗組在4、10、13、19周的抗體滴度高于對照組，16、22、26、30、34、37周的抗體滴度低于對照組。在26周之后，試驗組抗體水平下降速度要快于對照組。

3.2 ?禽流感H9抗體的檢測結果 ?血清的禽流感H9抗體滴度（Log2）的結果見表3。

由表3可知，試驗組在7、10、13、16、26、30、34、37周的抗體滴度低于對照組，19、22周的抗體滴度高于對照組，兩組間差異不顯著（P>0.05）。試驗組H9的抗體滴度在34周下降比對照組稍快。

3.3 ?禽流感 H5（Re-11）和H5（Re-12）抗體的檢測結果 ?血清中禽流感H5抗體滴度（Log2）的結果見表4。

由表4可知，試驗組H5（Re-11）的抗體滴度在10、13、16、37周稍高于對照組，在4、7、19、22、26、30、34周低于對照組，兩組間差異不顯著（P>0.05）。試驗組H5（Re-12）的抗體滴度在26周為10.65，低于對照組的11.45，差異顯著（P<0.05）;在4、13、16周的抗體滴度高于對照組，差異不顯著（P>0.05）。26周后，與對照組相比，H5（Re-12）的抗體水平下降幅度要比H5（Re-11）的大。

3.4 ?禽流感H7（Re-2）抗體的檢測結果 ?血清中禽流感H7（Re-2）抗體滴度（Log2）的結果見表5。

由表5可知，試驗組在4、7、10、13、16、19、22、30周的抗體滴度高于對照組，在26、34、37周時低于對照組，差異不顯著（P>0.05）。26周之后試驗組H7的抗體滴度下降速度比對照組稍快。

3.5 ?傳染性支氣管炎（IB）抗體的檢測結果 ?血清中傳染性支氣管炎抗體效價見表6。

由表6可知，試驗組IB抗體效價消長曲線與對照組基本一致，呈現(xiàn)先降后升變化規(guī)律，在26周時達到最高。與對照組相比，試驗組的IB抗體效價僅在19周高于對照組，其余4、16、26、30周齡的抗體效價均低于對照組，兩者間差異不顯著（P>0.05）。

4 ?討論與結論

4.1 ?討論 ?本次試驗通過對哈伯德肉種雞開產前減少1次油苗免疫接種，并對油苗的免疫周齡進行調整和優(yōu)化，試驗過程采集免疫前后及維持期的血清進行抗體效價檢測，以不同周齡的新城疫（ND）、禽流感（H9、H5、H7）、傳染性支氣管炎（IB）的抗體效價的差異顯著性分析進行油苗減負免疫的效果評估。試驗結果表明：①ND免疫抗體消長變化，除了試驗組7周的抗體滴度顯著低于對照組（P<0.05）外，其他周齡的抗體滴度差異不顯著（P>0.05）;②H5（Re-12）免疫抗體消長變化，試驗組26周的抗體滴度顯著低于對照組（P<0.05），其他周齡的抗體滴度差異不顯著（P>0.05）;③禽流感H9、H5（Re-11）、H7（Re-2）及IB所有檢測周齡的抗體滴度與對照組差異不顯著（P>0.05）。因此，哈伯德肉種雞開產前減少1次免疫接種雞新城疫、傳染性支氣管炎、禽流感（H9亞型）三聯(lián)滅活疫苗和重組禽流感病毒（H5+H7）三價滅活疫苗的油苗免疫，對肉種雞相應抗體高度和26周后的維持抗體消退都在預期范圍之內，可以有效保護雞群，維持肉種雞群健康。

4.2 ?結論 ?本試驗是新支流和禽流感油苗的免疫減負試驗，試驗減少了種雞的油苗接種次數(shù)，一方面節(jié)約了疫苗費用，另一方面減少了疫苗反應和注射應激。本試驗證明，減少1次新城疫、禽流感油苗免疫，機體產生抗體滴度的高度和抗體滴度的維持皆能有效保護雞群健康。之后，公司推動油苗減負試驗擴大試驗并驗證本次試驗結果。