3 種常見漁藥對河川沙塘鱧幼魚的急性毒性

劉怡然，黃陽陽，吳 琴，謝德兵，任 艷，李 波，王 輝，朱思華，徐洪亮

（1.武漢市農(nóng)業(yè)科學院水產(chǎn)研究所，武漢 430207；2.華中農(nóng)業(yè)大學水產(chǎn)學院，武漢 430070）

高效氯氰菊酯屬氯氰菊酯類殺蟲劑，是氯氰菊酯的高效異構體，其藥效比普通的氯氰菊酯高近一倍，生物活性較高，具有觸殺和胃毒作用［1］，殺蟲譜廣、擊倒速度快，殺蟲活性較氯氰菊酯高，常用于防治棉花、蔬菜、果樹、茶樹、森林等多種植物上的蟲害及衛(wèi)生害蟲［2，3］，但高效氯氰菊酯極易殘留對環(huán)境造成嚴重影響，危害人體健康［4］。此外，高效氯氰菊酯對水生生物的抗氧化系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)等也存在一定的毒害作用。Koprucu 等［5］從河蚌的存活率、氧化應激生物標記、抗氧化力等方面研究了高效氯氰菊酯對魚體肝臟和腎臟中丙二醛（MDA）水平的影響，發(fā)現(xiàn)丙二醛隨著高效氯氰菊酯暴露濃度的增加顯著增加。

聚維酮碘又稱聚乙烯吡咯烷酮碘，是一種廣譜消毒殺菌劑，能夠有效地治療水產(chǎn)動物腐皮爛鰓等疾?。?，7］。作為環(huán)境外源性藥物，其對水產(chǎn)養(yǎng)殖水質(zhì)以及水生態(tài)的影響不容忽視［8］。目前，已有相關的文獻報道過聚維酮碘對魚體的急性毒性以及生理毒性［9］，因此加強聚維酮碘對于水生生物的安全性評估在水產(chǎn)養(yǎng)殖過程中尤為重要。

辛硫磷是中國目前運用較為廣泛的有機磷殺蟲劑，同時也被用于漁業(yè)生產(chǎn)中，中國生產(chǎn)的有機磷農(nóng)藥占農(nóng)藥量的50% 以上［10］。農(nóng)藥在使用過程中僅一小部分被作用于靶生物，剩余大部分都殘留在土壤中，通過循環(huán)流入水環(huán)境和空氣，對人體以及水生動物造成潛在的危害［11，12］。辛硫磷被廣泛用于家畜寄生蟲、水產(chǎn)養(yǎng)殖中魚病的防治，對病原有較好的殺滅作用［13，14］，但80% 的農(nóng)藥直接殘留于生態(tài)環(huán)境中［15］，對生物體造成神經(jīng)毒性，造成體內(nèi)乙酰膽堿酯酶（AChE）等神經(jīng)傳遞的積累，易造成神經(jīng)傳導功能紊亂［16］。因此農(nóng)藥殘留及其對水生生物的代謝危害，明確農(nóng)藥使用的安全濃度，對保障水生生物的安全十分重要。

河川沙塘鱧（Odontobutis potamophila）是一種名優(yōu)淡水養(yǎng)殖魚類，隸屬鰕虎魚亞目塘鱧科，其肉質(zhì)細嫩、味道鮮美、營養(yǎng)豐富。近年來，河川沙塘鱧人工繁育技術不斷發(fā)展，池塘養(yǎng)殖規(guī)模不斷增加，已成為發(fā)展?jié)摿^大的養(yǎng)殖品種。但由于養(yǎng)殖水源的污染問題，使得對水質(zhì)要求較高的沙塘鱧養(yǎng)殖受到限制［17］。近年來，針對有機磷農(nóng)藥和有機氯農(nóng)藥毒性的研究已有報道，但針對河川沙塘鱧的養(yǎng)殖用藥安全卻鮮有報道，本研究通過檢測常用漁藥對河川沙塘鱧幼魚的急性毒性，測定其半數(shù)致死質(zhì)量濃度ρ（LC50），旨在為河川沙塘鱧的養(yǎng)殖用藥提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗用魚

試驗用魚為江蘇省淡水水產(chǎn)研究所南京市祿口基地人工繁殖的河川沙塘鱧幼魚，選擇體質(zhì)健康、規(guī)格基本一致的個體作為試驗材料魚，平均體長10～15 mm，選取體質(zhì)健壯、活力十足、反應靈敏的個體進行試驗，馴養(yǎng)3 d，試驗前1 d 停止餌料。

1.2 試驗藥物

試驗所用藥物的規(guī)格與成分見表1。

表1 試驗所用藥物的規(guī)格與成分

1.3 試驗條件

試驗在30 cm×30 cm×60 cm 深色聚乙烯塑料水箱中進行，頂部白天正常光，夜晚覆蓋黑色遮陽網(wǎng)，養(yǎng)殖用水為經(jīng)曝氣3 d 的凈化水，pH 為7.0～8.0，總硬度（以CaCO3計）為190～250 mg/L，試驗溫度為（24±2）℃，溶解氧—6.5 mg/L，避光飼養(yǎng)。為防止攝食的影響，試驗期間不投喂餌料，馴養(yǎng)和試驗期間幼魚生長正常。

1.4 藥物配制

對河川沙塘鱧幼魚進行急性毒理試驗前，先用丙酮溶液作為助溶劑將高效氯氰菊酯、辛硫磷（丙酮濃度控制的0.1% 以下）溶解，用蒸餾水將聚維酮碘配制成母液，再按一定比例稀釋成試驗需要的濃度。視擴大和縮小農(nóng)藥濃度對河川沙塘鱧幼魚進行24 h 敏感性預備試驗，觀察試驗魚的活動情況，確定全死和不死上限的劑量范圍，然后按照等對數(shù)間距確定各種試驗藥品的配制濃度。

1.5 試驗方法

根據(jù)靜水生物測試法［18］，試驗分預試驗和正式試驗。根據(jù)預試驗結(jié)果確定各常用藥物的正式試驗所需的濃度范圍，每種常用藥物通過等對數(shù)間距法設置6 個試驗藥物濃度組（表2）。每個濃度梯度設置3 個重復（箱），每個水箱投放試驗用幼魚24 尾，并設置空白對照組。每個水箱中水體積為50 L，每天定時更換培養(yǎng)液，觀察其行為和中毒癥狀。中毒后，經(jīng)多次刺激無反應則判斷為死亡，將其撈出并記錄死亡數(shù)量和死亡時間。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

利用SPSS 22.0 軟件對試驗數(shù)據(jù)進行處理分析，采用概率單位回歸法［19］（probit）計算24、48、72 h的半數(shù)致死濃度ρ( LC50)及不同濃度組的半數(shù)致死時間t( LT50)。安全濃度( ρs)。按特倫堡（Turubell）公 式 計 算［20］：ρs= 0.3 × 48 h LC50/(24 h LC50/48 h LC50)。

2 結(jié)果與分析

2.1 藥物對河川沙塘鱧幼魚的中毒癥狀

試驗期間空白對照組未發(fā)現(xiàn)有幼魚中毒或死亡現(xiàn)象，其他濃度組在中毒初期，魚體向一側(cè)傾斜，急速游動或上下亂竄。隨著藥物濃度的升高，幼魚的死亡率也明顯升高，應激反應強烈，呼吸速率變慢，向板壁撞擊，身體僵直，沉入水底，持續(xù)數(shù)小時后魚頭朝下，逐漸喪失運動能力，鰓蓋張開，最后躺臥箱底（表3）。

2.2 高效氯氰菊酯對河川沙塘鱧幼魚的急性毒性

河川沙塘鱧幼魚對高效氯氰菊酯敏感，中毒癥狀表現(xiàn)為上下急速狂游、撞擊板壁，死亡時魚體表面呈灰白色，鰭條氧化變黃。2.4 mg/L 高效氯氰菊酯試驗組，在8 h 時出現(xiàn)死亡，72 h 全部死亡，其他濃度組隨著暴露時間延長，死亡率均有所升高（表3）。由表3 可知，高效氯氰菊酯對河川沙塘鱧幼魚24、48、72 h 半致死濃度分別為3.007、2.695、0.974 mg/L，安全濃度為0.725 0 mg/L。

2.3 辛硫磷對河川沙塘鱧幼魚的急性毒性

高濃度辛硫磷試驗組河川沙塘鱧幼魚中毒癥狀明顯，幼魚上下竄動，游動劇烈。隨著中毒深入，魚體體色變淺，鰓蓋張開，脊椎彎曲。當辛硫磷濃度為2.5 mg/L 時，10 h 后出現(xiàn)死亡，死亡時魚體體色變淺，黏液增多，鰓蓋張開，72 h 后全部死亡，其他濃度組隨著暴露時間延長，死亡率均有所升高（表3）。由表3 可知，辛硫磷對河川沙塘鱧幼魚24、48、72 h半數(shù)致死濃度分別為4.030、1.207、0.409 mg/L，安全濃度為0.108 0 mg/L。

2.4 聚維酮碘對河川沙塘鱧幼魚的急性毒性

高濃度聚維酮碘試驗組河川沙塘鱧幼魚中毒癥狀明顯，魚體側(cè)游、鰓蓋張開、腹部水腫鼓起、魚體顏色變淺發(fā)白、黏液分泌增多等。當聚維酮碘濃度為3 000 mg/L 時，8 h 時幼魚開始出現(xiàn)死亡，48 h 全部死亡，其他濃度組隨著暴露時間延長，死亡率均有所升高（表3）。由表3 可知，聚維酮碘對河川沙塘鱧幼魚24、48、72 h 半致死濃度分別為1 466.0、1 148.0、997.6 mg/L，安全濃度為270.0 mg/ L。

2.5 3 種藥物對河川沙塘鱧幼魚的急性毒性比較

4.5 % 高效氯氰菊酯、40% 辛硫磷、10% 聚維酮碘對河川沙塘鱧幼魚48 h 半致死濃度分別為2.695、1.207、1 148.0 mg/L。根據(jù)有毒物質(zhì)48 h 對魚類的毒性標準（劇毒，半數(shù)致死濃度＜0.1 mg/L；高毒，0.1 mg/L＜半數(shù)致死濃度—1.0 mg/L；中毒，1.0 mg/L＜半數(shù)致死濃度—10.0 mg/L；低毒，半數(shù)致死濃度＞10.0 mg/L）可得，高效氯氰菊酯、辛硫磷對河川沙塘鱧幼魚屬于中毒性物質(zhì)，聚維酮碘為低毒性物質(zhì)。

表3 3 種藥物對河川沙塘鱧幼魚的急性毒性結(jié)果

根據(jù)特倫堡（Turubell）公式計算出高效氯氰菊酯、辛硫磷、聚維酮碘對河川沙塘鱧幼魚安全濃度分別為0.725 0、0.108 0、270.0 mg/L。

3 小結(jié)與討論

3.1 高效氯氰菊酯對河川沙塘鱧幼魚的毒性評價

高效氯氰菊酯屬于有機氯農(nóng)藥，主要以胃殺和觸殺方式作用在昆蟲和害蟲上，殺蟲范圍廣，且具備高效、低毒的特點，在農(nóng)業(yè)害蟲防治中被廣泛應用。其毒性作用機制是與神經(jīng)膜上的Na+通道相互作用，影響正常Na+流，進而引起毒性反應［21］。在水產(chǎn)養(yǎng)殖過程中，有關高效氯氰菊酯對海水魚類的急性毒性在其他文獻中有報道過，如高效氯氰菊酯對漠斑牙鲆幼魚的安全濃度為0.079 μg/L［22］，對藍點笛鯛幼魚的安全濃度為0.002 8 mg/L［23］。本研究中的常用濃度為0.02～0.03 mg/L，而試驗中得出高效氯氰菊酯對河川沙塘鱧幼魚的安全濃度為0.725 0 mg/L，因此在養(yǎng)殖實踐當中可按照廠家指導用于沙塘鱧養(yǎng)殖的病害防治。

3.2 辛硫磷對河川沙塘鱧幼魚的毒性評價

辛硫磷屬于有機磷農(nóng)藥，為廣譜殺蟲劑，應用范圍廣、價格低，與其他類型農(nóng)藥相比，具有低毒性、易分解等，但對水產(chǎn)動物具有不小的毒害作用。其進入機體后，能夠抑制體內(nèi)一線膽堿酯酶的活性，破壞神經(jīng)系統(tǒng)的正常傳導，引發(fā)中毒［24］。在水產(chǎn)養(yǎng)殖過程中，主要用于治療寄生蟲病及甲殼類或者小型水生生物。目前已有相關文獻報道過關于辛硫磷對魚類急性毒性研究，不同魚類對辛硫磷的耐受能力不同，對金魚的安全濃度為5.49 mg/L［25］，對虹鱒幼魚的安全濃度為0.407 μg/L［26］。本研究中根據(jù)生產(chǎn)廠家提供的辛硫磷常用濃度為0.01～0.012 mg/L，辛硫磷對河川沙塘鱧幼魚的安全濃度為0.108 0 mg/L，因此在養(yǎng)殖生產(chǎn)過程中可以按照廠家指導的常用濃度用于沙塘鱧的寄生蟲病害防治。

3.3 聚維酮碘對河川沙塘鱧幼魚的毒性評價

聚維酮碘是廣譜、高效、低毒性的殺菌劑，是水產(chǎn)養(yǎng)殖常用的消毒藥物之一，對真菌、細菌、病毒等均有殺滅作用，同時對水產(chǎn)病害防治也是具有一定的效果［27］。不同水產(chǎn)生物對聚維酮碘的敏感程度也不同，如聚維酮碘對異育銀鯽的安全濃度為1.34 mg/L［28］，對葛氏鱸塘鱧的安全濃度為21.17 mg/L［29］。本研究結(jié)果表明聚維酮碘對沙塘鱧幼魚的安全濃度為270.0 mg/L，因此聚維酮碘可以作為消毒劑用于河川沙塘鱧養(yǎng)殖生產(chǎn)中。

不同藥物在不同水產(chǎn)動物產(chǎn)生不同藥性，而在實際生產(chǎn)中，藥物使用不當不僅會造成水產(chǎn)動物大面積死亡，而且會破壞生態(tài)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)，在使用過程中應嚴格按照各種藥品對照相應不同魚類的藥物安全濃度來控制使用濃度，結(jié)合考慮外界條件因素，如養(yǎng)殖溫度、溶氧量、有機質(zhì)等，做到科學化、合理化用藥，確保用藥安全有效。本研究結(jié)果對沙塘鱧養(yǎng)殖中正確使用藥品進行消毒、病害防治提供了科學依據(jù)。