俞葉飛 王 盼 陳子林 浦錦寶 胡軼娟 徐 攀 梁衛(wèi)青#

1 浙江省大盤(pán)山國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)管理局 浙江 金華 322300

2 浙江省中醫(yī)藥研究院 浙江 杭州 310007

白芍為毛茛科植物芍藥（Paeonia lactiflora Pall.）的干燥根[1]。本實(shí)驗(yàn)以浙產(chǎn)道地藥材白芍為研究對(duì)象，采用自然曬干、烘箱干燥、真空干燥、微波干燥、微波真空干燥等方式，探討不同干燥方法對(duì)白芍藥材初加工過(guò)程中品質(zhì)的影響。

1 儀器與材料

1.1 儀器：高效液相色譜儀(VARIAN，Prostar 230型三元泵，330型二極管陣列檢測(cè)器，410型自動(dòng)進(jìn)樣器)、色譜柱Hypersil C18柱(250×46mm,5μm)，電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱、真空干燥箱、真空微波干燥儀、酸度計(jì)、電子恒溫水浴鍋、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、十萬(wàn)分子一電子天平。

1.2 材料：白芍采自浙江磐安中藥材種植基地，經(jīng)浦錦寶研究員鑒定為毛茛科植物芍藥Paeonia lactiflora Pall.的干燥根。芍藥苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110736-200833)，苯甲酸對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：100419-200301)，葡萄糖(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110833-200503)。乙腈、甲醇、異丙醇均為色譜純，水為超純水，乙醇、磷酸、氫氧化鈉、冰醋酸均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 加工方法：同一批新鮮白芍藥材除去泥沙，洗凈，除去頭尾和細(xì)根，作為實(shí)驗(yàn)材料備用。每個(gè)加工處理方法重復(fù)3次。鮮品切片曬干（不經(jīng)煮制）：取新鮮白芍樣品，去皮后切片，切片厚度為2.0～3.0mm，平鋪于樣品盤(pán)中，置室外陽(yáng)光下晾曬至干。自然曬干：取新鮮白芍樣品，置沸水中煮制，去皮后切片，平鋪于樣品盤(pán)中，置室外陽(yáng)光下晾曬至干。烘干：取新鮮白芍樣品，置沸水中煮制，去皮后切片，平鋪于樣品盤(pán)中，置干燥箱進(jìn)行干燥。真空干燥：取新鮮白芍樣品煮制，去皮后切片，平鋪于樣品盤(pán)中，置真空干燥箱下進(jìn)行干燥。微波干燥：取新鮮白芍樣品煮制，去皮后切片，平鋪于微波爐專用托盤(pán)上，均勻鋪開(kāi)，于微波下干燥。微波真空干燥：取新鮮白芍樣品煮制，去皮后切片，平鋪于微波爐專用托盤(pán)上，均勻鋪開(kāi)，設(shè)置真空度，于微波下干燥。

2.2 芍藥苷含量測(cè)定：色譜條件：色譜柱：Hypersil C18柱(250mm×46mm，5μm)；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸溶液（14∶86）；流速：1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm；柱溫：30℃，進(jìn)樣量：10μl。參考中華人民共和國(guó)藥典2015年版一部白芍項(xiàng)下，理論塔板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算不應(yīng)低于2000，在此條件下，芍藥苷與相鄰成分達(dá)到基線分離。

標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制：精密稱取芍藥苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含60μg的溶液，即得。供試品溶液的配制：取本品中粉約0.1g，精密稱定，置50ml量瓶中，加稀乙醇35ml，超聲處理30min，放冷，加稀乙醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取濾液，即得。樣品含量測(cè)定：稱取白芍樣品，按上述方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)行分析，測(cè)定樣品中芍藥苷的含量，每個(gè)加工方法重復(fù)測(cè)定3次，取其平均值作為最終結(jié)果，見(jiàn)表1。

2.3 白芍總苷含量測(cè)定：色譜條件：色譜柱：Hypersil C18柱(250mm×46mm，5μm)。流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸-異丙醇-冰乙酸（85∶155∶4∶6）；流速：1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm，柱溫：30℃，進(jìn)樣量：10μl。

標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備：精密稱取苯甲酸對(duì)照品適量，加流動(dòng)相制成每1ml含200μg的溶液，即得。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：分別精密吸取對(duì)照品溶液0.5ml、1ml、2ml、4ml、5ml、10ml置10ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，分別精密吸取10μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積積分值Y為縱坐標(biāo)，苯甲酸量X（μg）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為：Y=2.4657×107X-1.5343×106，r=0.9998。供試品溶液的制備：取本品粉末0.1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入稀乙醇50ml，超聲處理30min，濾過(guò)，水浴揮干，殘?jiān)?%氫氧化鈉溶液5ml溶解，取該溶液0.5ml，置5ml具塞試管中，沸水浴水解2h，取出，冷卻至室溫，加流動(dòng)相至2.5ml，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過(guò)。根據(jù)峰面積測(cè)定苯甲酸的含量，再計(jì)算出白芍總苷的含量，公式為白芍總苷含量=[（水解后總苯甲酸含量-游離苯甲酸含量）×480.27/122.12]×100%。樣品含量測(cè)定：取供試品溶液，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，根據(jù)相應(yīng)線性關(guān)系計(jì)算樣品中白芍總苷的含量，每個(gè)加工方法重復(fù)測(cè)定3次，取其平均值作為最終結(jié)果，見(jiàn)表1。

2.4 多糖含量測(cè)定：標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：精密稱取干燥至恒重的無(wú)水葡萄糖對(duì)照品適量，加蒸餾水溶解制成每1ml含200μg的標(biāo)準(zhǔn)溶液，依次移取0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6ml于10ml棕色具塞試管中，各加蒸餾水至2.0ml，搖勻，另取2.0ml蒸餾水作空白管，然后各管加入5%苯酚1.0ml和濃硫酸5.0ml，混勻，置100℃水浴中加熱15min，取出，置冰水浴中5min，取出，室溫放置10min后，照紫外-可見(jiàn)分光光度法（2015版中國(guó)藥典一部附錄VA），在490nm波長(zhǎng)處以空白溶液做參比，測(cè)定吸光度。以葡萄糖濃度(μg/ml)為橫坐標(biāo)，吸光度（A）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：Y=0.05900X+0.1299(r=0.9989)。供試品溶液的制備：稱取白芍粉末約1.0g，分別加水100ml水，精密稱定重量，加熱回流提取2h，提取完成后放冷，用蒸餾水補(bǔ)足重量，過(guò)濾，精密吸取濾液5.0ml，加入無(wú)水乙醇20ml，混勻5min，3000r/min離心5min，沉淀用80%乙醇洗滌數(shù)次，用水溶解并轉(zhuǎn)移50 ml容量瓶，定容至刻度，即得。樣品測(cè)定：精密吸取供試品溶液2.0ml于10ml棕色具塞試管中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下顯色，于490nm下掃描，測(cè)定吸光度值，以相應(yīng)試劑為空白，按標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中多糖含量。每個(gè)加工方法重復(fù)測(cè)定3次，取其平均值作為最終結(jié)果，見(jiàn)表1。

表1 樣品含量測(cè)定結(jié)果（n=3）

結(jié)果顯示，不同干燥方法對(duì)白芍藥材中芍藥苷、白芍總苷、多糖、苯甲酸的含量均有影響。不同加工干燥方法樣品的芍藥苷和白芍總苷含量存在一定差異，但水煮與否的加工方法對(duì)芍藥苷和白芍總苷含量差異較大，尤其是游離苯甲酸的含量降低較為明顯，同時(shí)，微波真空干燥方法大大縮短了白芍藥材的干燥時(shí)間。

3 討論

3.1 白芍水煮與否對(duì)白芍藥材質(zhì)量的影響：從芍藥、白芍總苷、游離苯甲酸、多糖的含量變化來(lái)看，白芍水煮與否對(duì)白芍藥材的質(zhì)量有明顯差異，且對(duì)芍藥苷和白芍總苷含量的影響大于多糖含量的影響。結(jié)果表明，白芍經(jīng)水煮制后，芍藥苷和白芍總苷的含量均有所增加，可能因煮制過(guò)程使酶活力喪失，起到了殺酶保苷作用，同時(shí)多糖含量下降，而作為有害成分的游離苯甲酸則明顯降低，苯甲酸在白芍中視為無(wú)效成分[2]，攝入一定量后還會(huì)增加肝臟的解毒負(fù)擔(dān)，因此，白芍在產(chǎn)地加工過(guò)程中，應(yīng)首先進(jìn)行水煮制，再進(jìn)行去皮切片干燥的方法。

3.2 不同干燥方法對(duì)白芍藥材質(zhì)量的影響：從芍藥苷、白芍總苷、總多糖三種指標(biāo)性成分的含量測(cè)定結(jié)果來(lái)看，不同干燥方法對(duì)白芍藥材質(zhì)量產(chǎn)生一定影響[3]，且對(duì)白芍總苷含量的影響大于芍藥苷，加工干燥方法對(duì)白芍質(zhì)量的影響已有一些報(bào)道[4-5]，比較分析的方法各異，結(jié)論也不盡相同。本研究結(jié)果顯示：白芍微波真空干燥加工的芍藥苷和白芍總苷含量都是最高，白芍經(jīng)水煮后多糖含量有部分損失，而不同的干燥方式對(duì)多糖含量的影響相對(duì)較大，真空干燥和微波真空干燥由于在真空狀態(tài)下，干燥溫度低，時(shí)間短，多糖含量的損失較小。因此綜合考慮，選擇不同加工方法時(shí)，為盡可能保留白芍的指標(biāo)性成分，同時(shí)又提高白芍的干燥效率，還是采用微波真空干燥法作為白芍的干燥加工方法較好。