T細(xì)胞、NKT細(xì)胞與NK細(xì)胞在肺結(jié)核患者外周血中的表達(dá)與臨床意義

李杰

當(dāng)前我國(guó)實(shí)行的《結(jié)核病分類WS196-2017》標(biāo)準(zhǔn)將結(jié)核病患者分為活動(dòng)性肺結(jié)核、非活動(dòng)性肺結(jié)核、結(jié)核分枝桿菌潛伏期感染三大類。據(jù)WHO 的報(bào)道數(shù)據(jù)顯示,全球范圍內(nèi)活動(dòng)性肺結(jié)核感染患者數(shù)量為2000 萬(wàn),每年因肺結(jié)核病死亡患者數(shù)量高達(dá)300 萬(wàn)人,每年新發(fā)肺結(jié)核患者約為800～1000 萬(wàn)人次［1］。且截止目前,臨床并未明確結(jié)核病的發(fā)病機(jī)制,亦未能完全闡明人體對(duì)結(jié)核感染的免疫機(jī)制。但有相關(guān)研究表明結(jié)核病的發(fā)生過程實(shí)質(zhì)上是宿主免疫細(xì)胞與結(jié)核分枝桿菌相互作用的復(fù)雜過程,免疫功能紊亂后可導(dǎo)致結(jié)核分枝桿菌的體內(nèi)擴(kuò)散,引發(fā)結(jié)核病。本文基于此,分析T 細(xì)胞、NKT 細(xì)胞與NK 細(xì)胞在肺結(jié)核患者外周血中的表達(dá)與臨床意義,現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2018年7月～2019年12月收治的60例肺結(jié)核患者作為研究組,其中男38例,女22例；年齡19～64 歲,平均年齡(40.68±7.94)歲；初治肺結(jié)核43例,復(fù)治肺結(jié)核17例；病情嚴(yán)重程度：輕癥17例,中癥24例,重癥19例。另選取本院同期60例體檢健康者作為參照組,其中男36例,女24例；年齡20～66 歲,平均年齡(40.75±8.89)歲。兩組性別、年齡等一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),具有可比性。

肺結(jié)核患者納入標(biāo)準(zhǔn)：患者均伴有不同程度咳嗽、胸悶、咳痰等基本癥狀,經(jīng)痰抗酸桿菌涂片證實(shí)為肺結(jié)核,胸肺部X 線可見肺部病灶。參照組納入標(biāo)準(zhǔn)：近期均無(wú)結(jié)核病患者接觸史；胸肺部X 透視結(jié)果正常；結(jié)核菌素試驗(yàn)為陰性或弱陽(yáng)性。排除標(biāo)準(zhǔn)：糖尿病患者；免疫系統(tǒng)缺陷患者；良惡性腫瘤疾病患者；非結(jié)核分枝桿菌感染患者。兩組研究對(duì)象均知情并自愿加入本次研究。

1.2 檢測(cè)儀器及方法 本次所用試驗(yàn)儀器為美國(guó)Becton Dickinson 公司生產(chǎn)的Accuri C6 型流式細(xì)胞儀,CD3-FITC/CD(16+CD56)-PE 雙標(biāo)記單克隆抗體。分別取兩組空腹?fàn)顟B(tài)下外周靜脈血3 ml,置于肝素鈉抗凝管中待檢,使用CD3-FITC/CD(16+CD56)-PE 抗體進(jìn)行熒光標(biāo)記,室溫反應(yīng)20 min。溶血試劑為OptiLyse C 溶血素,使用PBS 洗滌重懸細(xì)胞。后采用EPICS XL System II TM 分析系統(tǒng)分析前向散射及側(cè)向散射細(xì)胞分群。

1.3 觀察指標(biāo) 對(duì)比兩組外周血T 細(xì)胞、NKT 細(xì)胞與NK 細(xì)胞表達(dá)水平；研究組輕癥、中癥、重癥患者外周血T 細(xì)胞、NKT 細(xì)胞與NK 細(xì)胞表達(dá)水平；初治及復(fù)治肺結(jié)核患者外周血T 細(xì)胞、NKT 細(xì)胞與NK 細(xì)胞表達(dá)水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示,采用t/F 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組外周血T 細(xì)胞、NKT 細(xì)胞與NK 細(xì)胞表達(dá)水平對(duì)比 參照組外周血T 細(xì)胞、NKT 細(xì)胞與NK 細(xì)胞表達(dá)水平分別為(53.89±8.02)%、(2.03±0.22)%、(3.95±0.36)%；研究組外周血T 細(xì)胞、NKT 細(xì)胞與NK細(xì)胞表達(dá)水平分別為(54.67±7.94)%、(7.58±0.46)%、(4.02±0.41)%。兩組外周血T 細(xì)胞、NK 細(xì)胞表達(dá)水平對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.535、0.994,P=0.593、0.322＞0.05)；研究組外周血NKT 細(xì)胞表達(dá)水平高于參照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=84.311,P=0.000＜0.05)。

2.2 研究組輕癥、中癥、重癥患者外周血T 細(xì)胞、NKT 細(xì)胞與NK 細(xì)胞表達(dá)水平對(duì)比 輕癥患者外周血T 細(xì)胞、NKT 細(xì)胞與NK 細(xì)胞表達(dá)水平分別為(42.17±6.25)%、(7.74±0.72)%、(3.85±0.41)%；中癥患者外周血T 細(xì)胞、NKT 細(xì)胞與NK 細(xì)胞表達(dá)水平分別 為(51.36±6.78)%、(7.55±0.69)%、(4.16±0.52)%；重癥患者外周血T 細(xì)胞、NKT 細(xì)胞與NK 細(xì)胞表達(dá)水平分別為(62.43±7.16)%、(8.03±0.64)%、(4.02± 0.38)%。輕癥、中癥、重癥患者外周血T 細(xì)胞表達(dá)水平對(duì)比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=40.647,P=0.000＜0.05)；輕癥、中癥、重癥患者外周血NKT 細(xì)胞、NK 細(xì)胞表達(dá)水平對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=2.622、2.368,P=0.081、0.103＞0.05)。

2.3 研究組初治及復(fù)治肺結(jié)核患者T 細(xì)胞、NKT細(xì)胞與NK 細(xì)胞表達(dá)水平對(duì)比 43例初治肺結(jié)核患者T 細(xì)胞、NKT 細(xì)胞與NK 細(xì)胞表達(dá)水平分別為(51.40±6.29)%、(7.65±2.07)%、(4.08±1.13)%；17例復(fù)制肺結(jié)核患者T 細(xì)胞、NKT 細(xì)胞與NK 細(xì)胞表達(dá)水平分別為(62.95±7.11)%、(7.31±2.14)%、(3.79± 1.09)%。初治、復(fù)治肺結(jié)核患者外周血T 細(xì)胞表達(dá)水平對(duì)比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=6.177,P=0.000＜0.05)；初治、復(fù)治肺結(jié)核患者外周血NKT 細(xì)胞與NK 細(xì)胞表達(dá)水平對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.560、0.919,P=0.578、0.362＞0.05)。

3 討論

T 細(xì)胞是機(jī)體免疫應(yīng)答功能的重要細(xì)胞成分,亦是淋巴系統(tǒng)免疫功能的執(zhí)行者。NKT 細(xì)胞是細(xì)胞表面具有T 細(xì)胞受體、NK 細(xì)胞受體的特殊T 細(xì)胞亞群,發(fā)揮著抗感染、抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)等功能。臨床報(bào)道稱,T 細(xì)胞受體及NK 細(xì)胞受體雖為NKT 細(xì)胞的表型指標(biāo),但NKT 細(xì)胞是相對(duì)較為復(fù)雜的異質(zhì)性群體。從細(xì)胞免疫學(xué)角度分析來(lái)看,結(jié)核桿菌為胞內(nèi)寄生菌,對(duì)該類結(jié)核桿菌清除過程亦依賴于細(xì)胞免疫,且基于細(xì)胞免疫的過繼免疫療法是當(dāng)前結(jié)核病研究的全新領(lǐng)域。

NKT 細(xì)胞的特征表現(xiàn)為T 細(xì)胞受體基因表達(dá)的恒定性及細(xì)胞因子產(chǎn)生的迅速性,且現(xiàn)代研究表明活化的NKT 細(xì)胞多伴有T 細(xì)胞及NK 細(xì)胞活化,對(duì)免疫應(yīng)答具有重要影響［2］。本次研究結(jié)果顯示：研究組外周血NKT 細(xì)胞表達(dá)水平(7.58±0.46)%高于參照組的(2.03±0.22)%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=84.311,P=0.000＜0.05)。該結(jié)果證實(shí)NKT 細(xì)胞表達(dá)升高是肺結(jié)核患者免疫功能異常的特征表現(xiàn)之一,可為臨床進(jìn)行潛伏期感染及活動(dòng)性肺結(jié)核的定性診斷提供參考依據(jù)。CD8+T 細(xì)胞在抗結(jié)核免疫過程中發(fā)揮重要作用,可識(shí)別靶細(xì)胞抗原并促進(jìn)CD45Rlo CD8+細(xì)胞增殖,在溶解喪失免疫活性的巨噬細(xì)胞釋放活化吞噬細(xì)胞。而多數(shù)情況下結(jié)核菌可對(duì)CD8+T 細(xì)胞的免疫反應(yīng)啟動(dòng)機(jī)制產(chǎn)生抑制,且NKT 細(xì)胞可加速樹突細(xì)胞成熟［3］。

T 細(xì)胞主要通過Th1 產(chǎn)生γ-干擾素(IFN-γ)及CD8+T 細(xì)胞滅殺結(jié)核菌［4］,在本次研究中,兩組外周血T 細(xì)胞表達(dá)水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),分析其主要原因可能有以下兩點(diǎn)：①同非結(jié)核菌感染的檢查體檢者相比,肺結(jié)核患者CD4+T 細(xì)胞表達(dá)降低,同時(shí)CD8+T 細(xì)胞表達(dá)增加,而本次研究所測(cè)定的為T 細(xì)胞亞群變化總和,造成其同健康體檢者水平相當(dāng)。②外周血T 細(xì)胞并未完全代表病灶局部變化、初診患者T 細(xì)胞水平偏低。本次結(jié)果亦表明,輕癥、中癥、重癥患者外周血T 細(xì)胞表達(dá)水平對(duì)比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=40.647,P=0.000＜0.05),重癥患者外周血T細(xì)胞表達(dá)水平明顯高于中癥、輕癥患者,說明T 細(xì)胞表達(dá)水平與疾病嚴(yán)重程度呈正相關(guān),但NKT 及NK 細(xì)胞表達(dá)水平無(wú)明顯差異。且初治、復(fù)治肺結(jié)核患者外周血T細(xì)胞表達(dá)水平對(duì)比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=6.177,P=0.000＜0.05),復(fù)治肺結(jié)核患者外周血T 細(xì)胞表達(dá)高于初治肺結(jié)核患者,提示致敏細(xì)胞反復(fù)暴露于病原菌后增生反應(yīng)增強(qiáng),且復(fù)治肺結(jié)核患者免疫反應(yīng)涉及T 細(xì)胞各亞群,并非均局限于單一CD4+T 細(xì)胞,可將其用于肺結(jié)核患者病情嚴(yán)重程度的區(qū)分劃定及預(yù)后情況的判定,亦可助于了解患者治療后復(fù)發(fā)情況［5,6］。

綜上所述,NKT 細(xì)胞、T 細(xì)胞是誘導(dǎo)結(jié)核菌特異性免疫的主要因素,亦是細(xì)胞免疫的重要組成部分,借助外周血NKT細(xì)胞可有效進(jìn)行肺結(jié)核疾病的定性診斷,而T 細(xì)胞檢測(cè)則可輔助進(jìn)行不同類型及不同嚴(yán)重程度肺結(jié)核的區(qū)別診斷。