吳茱萸的化學(xué)及藥理毒理學(xué)研究進(jìn)展

孟婉婷，蘇曉

(上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬市中醫(yī)醫(yī)院，上海 200071)

0 引言

吳茱萸為蕓香科(Rutaceae)植物吳茱萸Euodiarutaecarpa (Juss) Benth. 或石虎 E. rutaecarpa (Juss) Benth. var. officinalis (Dode) Huang 或疏毛吳茱萸 E. rutaecarpaBenth. (Juss) var. bodinieri (Dode) Huang 的干燥近成熟果實[1]。吳茱萸是一種非常受歡迎的多用途草本植物，最早見于《神農(nóng)本草經(jīng)》中記載，其味苦，歸肝、脾、胃、腎經(jīng)，功能散寒止痛，降逆止嘔，助陽止瀉[2]。在傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中常用于治療頭痛、腹痛、產(chǎn)后出血、痢疾和閉經(jīng)。吳茱萸商品藥材主要來源于栽培，野生較少，以湖南產(chǎn)吳茱萸質(zhì)量最好，為道地藥材。經(jīng)過多年實驗和臨床研究發(fā)現(xiàn)吳茱萸的主要成分為吳茱萸堿和吳茱萸次堿。越來越多的證據(jù)表明吳茱萸堿可通過抑制多種腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移，誘導(dǎo)多種腫瘤細(xì)胞的凋亡，在體外和體內(nèi)都具有抗癌活性[3]。

1 吳茱萸的化學(xué)成分

梁彩霞等人[4]對吳茱萸全成分進(jìn)行指紋圖譜分析，該指紋圖譜共指認(rèn) 17個成分，包括 3 個酚酸，2 個黃酮，1 個檸檬苦素，11 個生物堿(6 個吲哚類及 5 個喹諾酮類)，共 4 種化學(xué)結(jié)構(gòu)類型，能夠綜合全面反映吳茱萸藥材的質(zhì)量。其具有高效、分離度好、信息豐富、特征性強等特點?？傻贸鰠擒镙侵饕猩飰A、苦味素、揮發(fā)油和黃酮等化學(xué)成分，其中生物堿是吳茱萸的主要化學(xué)成分。

1.1 生物堿

從吳茱萸中分離出吳茱萸堿(evodiamine) 、吳茱萸次堿(dihydrorutaecarpine) 、二氫吳茱萸次堿、甲酰二氫吳茱萸次堿、羧基吳茱萸堿(carboxyevodiamine) 、N，N -二甲基- 5 -甲氧基色胺、吳茱萸酰胺甲[Ⅰ]、吳茱萸酰胺乙[Ⅱ]、吳茱萸酰胺[Ⅲ]、吳茱萸酰胺[Ⅵ]、去甲吳茱萸 酰 胺[Ⅳ]、β-carboline、1，2，3，4 -tetrahydro- 1 - OXO -β-carboline[5]，丙酮基吳茱萸堿(acetonylevodiamine)[6]、吳茱萸新堿(evodiaxinine)[7]。其中，吳茱萸堿、吳茱萸次堿和去氫吳茱萸堿是吳茱萸中的活性成分，也是研究相對比較深入的物質(zhì)[8]。其中也含有多種喹諾酮類生物堿，包括：1 -methyl- 2 -nonyl-4 -(1H) -quinolone，吳茱萸卡品堿 (evocarpine) 、二氫吳茱萸卡品堿 (dihydroevocarpine) 、1 -甲基- 2 -十五烷基- 4(1H) 喹諾酮、 1 -甲基- 2 -[(Z) - 6 -十一烯基]- 4(1H) 喹諾酮、1 -甲基- 2 -[(Z) - 6 -十五烯基]- 4(1H) 喹諾酮、1 -甲基- 2 -[(Z) - 10 -十五烯基]- 4(1H) 喹諾酮、1 -甲基- 2 -[(6Z，9Z) - 6，9 -十五烷二烯基]- 4(1H) 喹酮、1 -甲基- 2 -[(4Z，7Z) - 4，7 -十三烷二烯基]- 4 (1H) 喹等[9]。

1.2 苦味素

目前為止，從吳茱萸中分離鑒定出來的苦味素大多數(shù)為檸檬苦素類，檸檬苦素類主要包括檸檬苦素、12 -α-羥基檸檬苦素、6 -α-乙酰氧基- 5 -表檸檬苦素、吳茱萸苦素、吳茱萸內(nèi)酯醇、吳茱萸苦素乙酯、12 -α-吳茱萸內(nèi)酯醇、6 -β-乙酰氧基- 5 -表檸檬苦素等，這類化合物也是吳茱萸的重要活性成分之一[10]。

1.3 揮發(fā)油

揮發(fā)油也是吳茱萸里的一類成分。王銳等[11]采用毛細(xì)管氣相色譜儀從吳茱萸中檢測到 84 種揮發(fā)油成分，并采用質(zhì)譜鑒定了其中的 63 個揮發(fā)油成分。

2 吳茱萸藥理作用

2.1 抗腫瘤作用

吳茱萸堿是從吳茱萸果實中分離得到的一種喹諾酮類生物堿，具有多種生物學(xué)活性，如抗炎、抗肥胖、血管擴(kuò)張、體溫調(diào)節(jié)和子宮緊張性作用[12]。關(guān)于吳茱萸堿對人結(jié)腸癌細(xì)胞和肝母細(xì)胞瘤細(xì)胞株的細(xì)胞毒作用和對人結(jié)腸癌細(xì)胞的抑制作用的研究表明，吳茱萸堿對人結(jié)腸癌細(xì)胞株和肝母細(xì)胞瘤細(xì)胞株的細(xì)胞毒作用最強，對人結(jié)腸癌細(xì)胞的遷移抑制作用最強[13]。研究表明吳茱萸堿通過激活caspase啟動子(caspase-8和9)或效應(yīng)子caspase(caspase-3)，改變抗凋亡的Bcl-2和促凋亡的Bax蛋白表達(dá)的平衡，誘導(dǎo)多種腫瘤細(xì)胞的凋亡。Judah Folkman等[14]提出腫瘤生長依賴于血管生成，其“喚醒”血管內(nèi)皮細(xì)胞，并加速分裂，促進(jìn)腫瘤以每天1mm的速度生長。而 Ogasawara[15]在研究中發(fā)現(xiàn)當(dāng)腫瘤細(xì)胞在含有吳茱萸堿的纖維素結(jié)合板上培養(yǎng)時，其擴(kuò)散受到明顯抑制。Shyu等[16]用含吳茱萸堿的培養(yǎng)基培養(yǎng)人臍靜脈上皮細(xì)胞(HUVEC)，發(fā)現(xiàn)吳茱萸堿能直接抑制 HUVEC 細(xì)胞微管的形成與侵襲，局部運用吳茱萸堿能抑制雞絨膜尿囊血管生成，表明吳茱萸堿是一個潛在的血管生成抑制劑。

2.2 對中樞神經(jīng)神經(jīng)作用

張明發(fā)等[17-18]最早對吳茱萸水煎液的藥理作了研究，發(fā)現(xiàn)對熱刺激和醋酸所致的疼痛有抑制作用，且隨劑量增大而延長。陰健等[19]指出其鎮(zhèn)痛成分主要為吳茱萸堿、吳茱萸次堿、異吳茱萸堿及吳茱萸內(nèi)酯(即檸檬苦素) 等。

2.3 擴(kuò)張血管及降血壓作用

研究發(fā)現(xiàn)[20]吳茱萸堿能減少人腎上腺球狀帶(ZG)細(xì)胞醛固酮的基礎(chǔ)水平及血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)誘導(dǎo)的醛固酮釋放，并且降低3H-孕烯諾龍孵育的ZG細(xì)胞中3H-皮質(zhì)酮和3H-醛固酮的放射活性。提示吳茱萸堿通過AngⅡ相關(guān)通路和降低醛固酮生成途徑中11β-羥化酶(一種使脫氧皮質(zhì)酮變成皮質(zhì)酮的酶)的活性，而影響大鼠腎上腺ZG細(xì)胞中醛固酮的釋放，從而對血壓產(chǎn)生影響。吳茱萸堿部分內(nèi)皮依賴性能發(fā)揮血管舒張作用，在不含Ca2+液中加入CaCl2后吳茱萸堿對腎上腺素所致收縮反應(yīng)的抑制作用較加入K+去極化液時強。結(jié)果表明吳茱萸堿主要是通過受體門控性Ca2+通道減少血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)Ca2+ 內(nèi)流介導(dǎo)血管舒張作用[21]。

3 吳茱萸毒理學(xué)研究

3.1 急性毒性

吳茱萸堿及吳茱萸次堿作為吳茱萸中主要的藥理活性成分，盡管在體外試驗中顯示一定的毒性，但急性毒性試驗結(jié)果顯示上述2種成分為實際無毒級[22]。

3.2 肝毒性

吳茱萸水提組分在1.1～32.5g/kg劑量范圍內(nèi)，在藥后2h檢測，可使血清ALT、AST值顯著升高，呈現(xiàn)明顯的劑量依賴性；吳茱萸水提組分各劑量組有升高肝臟指數(shù)的趨勢，但只有劑量1組肝臟指數(shù)與水對照組比較呈顯著性差異，其余無明顯差異。小鼠單次灌服吳茱萸水提組分可造成小鼠一定的急性肝損傷，其對肝損傷程度呈現(xiàn)有一定的“量-時-毒”關(guān)系[23]。

黃偉等人[24]使用吳茱萸水提組分對大鼠給藥35d造成的慢性毒性損傷部位以肝損傷為主，水提組分在按含生藥量計算分別為2.0～8.0g/kg(相當(dāng)于人用量的31.2～124.5倍)時，可產(chǎn)生明顯的毒性損傷，經(jīng)過20d恢復(fù)期觀察，仍有部分病變不可逆。

尹利順等[25]考察了吳茱萸揮發(fā)油對大鼠的長期毒性，為臨床上應(yīng)用吳茱萸可能的潛在毒性提出預(yù)警。吳茱萸揮發(fā)油對大鼠給藥35天造成的慢性毒性損傷部位以肝損傷為主，揮發(fā)油在(按含生藥量計算)分別為0.012～0.12mL·kg時，可產(chǎn)生明顯的毒性損傷，經(jīng)過20天恢復(fù)期觀察，仍有部分病變不可逆。

3.3 遺傳毒性

楊秀偉[26]實驗證明在無論有無活化系統(tǒng)(S-9混合液)存在情況下，ERWE和EREE對 TA97，TA98，TA100和 TA1024種菌株各劑量組回復(fù)突變菌落數(shù)均接近自發(fā)突變，與陰性對照組相比無顯著性差異，也無劑量反應(yīng)關(guān)系。結(jié)果提示ERwE和 EREE在體外 Ames試驗未發(fā)現(xiàn)致突變作用。在試驗劑量范圍內(nèi)，未發(fā)現(xiàn)對試驗小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞有致突變作用，也未發(fā)現(xiàn)對試驗小鼠精子有損傷作用。吳茱萸中含單胺類物質(zhì)，所以大劑量應(yīng)用吳茱萸對中樞神經(jīng)系統(tǒng)有興奮作用，或可引起視力障礙等副作用。

4 結(jié)論

吳茱萸的化學(xué)成分主要為生物堿、苦味素、揮發(fā)油和黃酮等，其中生物堿是吳茱萸的主要化學(xué)成分。吳茱萸急性毒性試驗結(jié)果表明，10g/kg吳茱萸水提物或70%乙醇提取物未對小鼠產(chǎn)生毒性作用或造成小鼠死亡，其急性毒性實際為無毒級。而其揮發(fā)油卻經(jīng)實驗證實存在肝臟毒性，按照其無致毒劑量來計算人體的安全劑量為1.2g/d(人體平均體重為60kg)。體外、體內(nèi)基因及染色體變異試驗顯示吳茱萸提取物無遺傳毒性。

本文對吳茱萸化學(xué)成分以及其藥理作用和其毒理學(xué)研究做了簡單概述，但由于中藥的生產(chǎn)地、生產(chǎn)批次不同，甚至農(nóng)藥污染，重金屬污染等都會造成其實驗結(jié)果的部分差異，況且目前只對其化學(xué)成分的幾種進(jìn)行驗證，而其他成分有無毒性，甚至是不同成分之間的作用機(jī)制還需要長期的動物學(xué)實驗進(jìn)行驗證。

日常生活中人們使用吳茱萸多以復(fù)方為主，還應(yīng)注意其不同成分之間的相互作用，盡量安全用藥，嚴(yán)格按照使用說明，將其毒副作用降至最低。