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      不同免疫方式對雞群抗體消長規(guī)律的影響

      2021-01-09 05:38:08王雪敏李明珠李佳佳薛曉陽周守長河北邯鄲華裕農(nóng)業(yè)科技有限公司057150
      今日畜牧獸醫(yī) 2020年11期
      關(guān)鍵詞:移液器離心管血凝

      王雪敏,李明珠,李佳佳,薛曉陽,周守長(河北邯鄲華裕農(nóng)業(yè)科技有限公司 057150)

      1 實驗?zāi)康?/h2>

      對不同兩個場區(qū), 分別用兩種方法進(jìn)行同一種疫苗免疫,通過HI 抗體檢測,評價免疫方法。

      2 實驗材料及雞群

      試驗雞群,某種雞場A301 批次,420 日齡;某種雞場B301批次,415 日齡。 免疫疫苗,T3 新支二聯(lián)活疫苗 (VGGA+ma5+QX)。

      3 實驗分組

      3.1 試驗分組

      試驗組一(A 場):某種雞場A301 批次中固定30 只雞,用T3 新支二聯(lián)活疫苗(VGGA+ma5+QX)進(jìn)行點眼免疫,免疫劑量為1 羽份,另固定飲水免疫的30 只雞作為試驗對比對象,免疫劑量為2 羽份。

      試驗組二 (B 場): 某種雞場B301 批次中固定30 只雞,用T3 新支二聯(lián)活疫苗(VGGA+ma5+Q)進(jìn)行點眼免疫,免疫劑量為1 羽份,另固定飲水免疫的30 只雞作為試驗對比對象,免疫劑量為2 羽份。

      3.2 檢測時間

      分別在免疫前1d、免疫后16d、免疫后30d 檢測進(jìn)行采樣,采樣雞只包括固定的30 只點眼雞只,以及固定的飲水免疫的30只雞,通過HI 抗體檢測。

      4 檢測方法

      4.1 物品準(zhǔn)備

      一次性96 孔V 型反應(yīng)板,移液器(配有一次性槍頭;待檢血清; 試驗抗原; 生理鹽水; 公雞紅細(xì)胞;100μL 單道移液器;100μL 八道移液器; 一次性移液器吸頭;9cm 直徑玻璃平皿;一次性96 孔v 型板;微量振蕩器;離心機(jī);10mL 離心管;一次性手套、一次性口罩、記號筆等材料。 )

      4.2 抗凝劑、1%雞紅細(xì)胞配比

      采血:5mL 注射器吸取1mL 配置好濃度為3.8%的檸檬酸鈉抗凝劑,采用翼根靜脈方法進(jìn)行采血。

      紅細(xì)胞的洗滌:將采集好的抗凝血注射到10mL 離心管中,向離心管中加滿生理鹽水并混勻, 放入離心機(jī)內(nèi)配平,3000rpm離心3min 后,棄掉上清,重復(fù)清洗3 次,離心后得到的紅細(xì)胞沉淀加入生理鹽水后放置4℃冷藏備用。

      抽出所需的生理鹽水, 并從中抽出棄去紅細(xì)胞所占量,即紅細(xì)胞與生理鹽水比例為1∶100,用移液器插入含有紅細(xì)胞離心管的底部進(jìn)行抽取紅細(xì)胞,加入生理鹽水,反復(fù)吹吸混勻備用。

      4.3 實驗操作細(xì)則

      4.3.1 血液凝集(HA)試驗采用96 孔板微量法操作。

      4.3.1.1 在微量反應(yīng)板上, 從第1 孔加生理鹽水, 依次加到12 孔,每孔分別加入生理鹽水0.025mL。

      4.3.1.2 在第1 孔按照生理鹽水與抗原1∶1 的比例加入25μL 的抗原,充分震蕩成均勻的混懸液。

      4.3.1.3 第一孔混懸液震蕩均勻后, 從第1 孔吸取25μL 混懸液加入到第12 孔,依次倍比倍稀釋至11 孔,再從第11 孔吸出25μL 懸液連同槍頭一起丟棄。

      4.3.1.4 體積分?jǐn)?shù)為1%雞紅細(xì)胞懸液, 每孔依次加入25μL充分震蕩混勻。

      4.3.1.5 振蕩混勻后,在25℃的室溫下靜置20min 后觀察其結(jié)果,陽性對照孔的紅細(xì)胞完全凝集。

      4.3.1.6 結(jié)果判定: 微量板靜置20min 后,2min 內(nèi)讀取血液凝集結(jié)果, 紅細(xì)胞凝集抑制呈現(xiàn)明顯的淚滴流淌狀。 完全血凝(不流淌)的抗原最高稀釋倍數(shù)代表一個血凝單位(HAU)。

      4.3.2 血凝抑制(HI)試驗(微量法)

      4.3.2.1 根據(jù)1 試驗結(jié)果配制4HAU 的病毒抗原。 以完全血凝的抗原最高稀釋倍數(shù)作為一個抗原的效價, 稀釋倍數(shù)除以4即為含4HAU 的抗原的稀釋倍數(shù)。 例如:如果血凝的終點滴度為1∶256,則4HAU 抗原的稀釋倍數(shù)應(yīng)是1∶64(256 除以4)。

      4.3.2.2 在一次性板的1~12 孔加入25μL 的生理鹽水。

      4.3.2.3 抽取25 微升血清加入第1 孔內(nèi), 充分混勻后吸取25μL 于第2 孔,依次對倍稀釋至11 孔,從第11 孔吸取25μL 棄去。

      4.3.2.4 1~11 孔均加入含4HAU 混勻的抗原液25μL, 振蕩混勻,室溫(約20℃~25℃)靜置25min。

      4.3.2.5 每孔加入25μL 體積分?jǐn)?shù)為1%的雞紅細(xì)胞懸液,振蕩混勻,室溫(約20℃~25℃)靜置25min,對照孔紅細(xì)胞將呈明顯紐扣狀沉于孔底。

      4.3.2.6 結(jié)果判定

      以完全抑制4 個抗原的血清最高稀釋倍數(shù)作為HI 滴度。

      附錄HA 和HI 試驗用溶液的配制

      1%雞紅細(xì)胞懸液制備:

      采集至少3 只無免疫的健康公雞的血液與抗凝劑4∶1 混合,用生理鹽水洗滌3 次左右,前兩次用2000r/min 離心3min,最后一次以2500r/min 離心3min,洗滌后用生理鹽水配成體積分?jǐn)?shù)為1%紅細(xì)胞懸液,4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

      5 試驗結(jié)果

      試驗結(jié)果詳見表1。 通過表1 可見:在本次試驗中,使用飲水免疫后,ND 抗體水平未有明顯變化, 抗體離散度從數(shù)值上看有下降趨勢,但從抗體滴度跨度看,沒有顯著影響。 使用點眼免疫后,ND 抗體均呈現(xiàn)小幅度升高趨勢, 且離散度得到較好的改變。

      表1 不同免疫方式抗體效果規(guī)律

      6 結(jié)果分析

      6.1 當(dāng)ND 抗體水平在8~9 時,不管采取飲水免疫或點眼免疫,均不能使抗體水平獲得較大幅度的提高。

      6.2 從抗體上升幅度以及離散度改善程度看,本次飲水免疫均未起到明顯的效果,可認(rèn)為是免疫失敗。 而點眼免疫在改善離散度方面起到較好的作用。

      6.3 本次飲水免疫的失敗,可能由以下兩方面導(dǎo)致:當(dāng)前的規(guī)模和設(shè)備不適合使用飲水免疫的方法。 飲水免疫操作失敗。

      6.4 在當(dāng)前規(guī)模養(yǎng)殖條件下, 飲水免疫存在較大的不確定性,如何提高飲水免疫效果,需要探討。

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