李君艷

（漯河市郾城區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河南 漯河 462000）

近年來，隨著生豬養(yǎng)殖量的不斷增加，豬場常見多發(fā)的細(xì)菌病也日益引起關(guān)注。筆者對養(yǎng)殖場和獸醫(yī)門診進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查時(shí)特意收集了1個(gè)養(yǎng)殖場連續(xù)4個(gè)月的36份臨床病料，并對這些病料進(jìn)行了一次集中的細(xì)菌學(xué)檢測，現(xiàn)將該次調(diào)查方法、檢測結(jié)果及心得體會陳述如下，以期為豬場細(xì)菌性疾病的防控和正確消毒提供參考。

1 調(diào)查材料

1.1 調(diào)查背景

漯河市某豬場占地面積為350畝（1畝≈667 m2），總建筑面積為32 000 m2，主要從事優(yōu)良種豬的引進(jìn)、繁育和銷售工作。目前，該豬場年出欄生豬50 000頭以上，其中商品豬有46 000頭，優(yōu)質(zhì)種豬4 000頭。

1.2 主要培養(yǎng)基及試劑

本次培養(yǎng)細(xì)菌所用的培養(yǎng)基主要有血液瓊脂糖培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基、沙門氏菌培養(yǎng)基、胰蛋白胨大豆瓊脂等。所用試劑主要有瓊脂粉、牛肉膏、蔗糖、乳糖、碳酸氫鈉、甘油、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸、犢牛血清等。

1.3 主要儀器設(shè)備

恒溫培養(yǎng)箱、二級生物安全柜、高壓滅菌鍋、恒溫?fù)u床、電子天平、恒溫水浴鍋、一次性無菌接種環(huán)等。

1.4 樣品采集

所檢測樣品均采集于該豬場因病死亡的豬，其中有仔豬、保育豬和育肥豬。將采集的病料進(jìn)行標(biāo)記、編號并存放于-20 ℃冰箱，檢測時(shí)提前3 h 將其從冰箱中取出，放在二級生物安全柜中解凍。

2 實(shí)驗(yàn)室檢測

將樣品在無菌條件下接種于血液瓊脂培養(yǎng)基上，37 ℃條件下培養(yǎng)24 h，并用革蘭氏染色法對菌落進(jìn)行初步篩查和歸類，將不同種屬的細(xì)菌接種到不一樣的培養(yǎng)基中：將眼觀半透明狀的疑似副豬嗜血桿菌的菌種接種到TSA培養(yǎng)基上，在厭氧條件下進(jìn)行培養(yǎng)24 h；將疑似沙門氏菌的菌種接種到沙門氏菌培養(yǎng)基上；將疑似大腸桿菌的菌種接種到麥康凱培養(yǎng)基上；將疑似豬鏈球菌的菌種接種到血液培養(yǎng)基中。

3 生化鑒定

將上述單個(gè)菌落重新劃板接種于所對應(yīng)的培養(yǎng)基中進(jìn)行菌種的純化，和上述步驟一樣，置于恒溫培養(yǎng)箱24 h收菌，并將菌落保存于10%的甘油管中，放在4 ℃保存，備用。

4 試驗(yàn)和消毒藥物調(diào)查結(jié)果

本次對采集的36 份樣品集中進(jìn)行細(xì)菌分離和鑒定，發(fā)現(xiàn)在麥康凱培養(yǎng)基上出現(xiàn)紅色的菌落，判定為大腸桿菌；在沙門氏菌培養(yǎng)基上出現(xiàn)無色透明、光滑的、中心有黑色圓點(diǎn)的菌落，判定為沙門氏菌；在血液培養(yǎng)基上出現(xiàn)了2種菌落，一種是水滴狀態(tài)的小菌落，沒有溶血現(xiàn)象，判定為巴氏桿菌，另一種是灰白色，表面光滑，邊緣整齊且有溶血現(xiàn)象的菌落為鏈球菌；在TSA培養(yǎng)基上出現(xiàn)了表面光滑，邊緣整齊的橢圓形的小菌落，為副豬嗜血桿菌。

經(jīng)對豬場流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，該豬場常用的消毒藥物主要為季銨鹽類消毒藥，消毒方法包括噴霧、浸泡等。每周大清潔1次，清潔出的污物進(jìn)行堆積發(fā)酵，清潔過后用消毒藥對圈舍的地面、墻面和房頂進(jìn)行噴霧消毒，對于常用的飼料運(yùn)送車、鏟子、衣物等進(jìn)行浸泡消毒。經(jīng)過為期3個(gè)月左右的時(shí)間，該場的病死豬數(shù)量大大減少。

5 分子生物學(xué)檢測

用細(xì)菌分離和顯微鏡觀察的方法并不能完全確定所看到的菌落就是所判定的結(jié)果。為了精準(zhǔn)判定結(jié)果，對分離的菌落用PCR 的方法進(jìn)行了鑒定，所用引物均來自每種細(xì)菌病對應(yīng)的國家標(biāo)準(zhǔn)上的引物。經(jīng)過PCR 鑒定后，其鑒定結(jié)果與顯微鏡觀察判定結(jié)果一致。

6 討論

通過對該豬場4 個(gè)月的病料進(jìn)行收集和檢測，發(fā)現(xiàn)該豬場近期大量的豬死亡并非是由于重大傳染病引起的，而是一些常見多發(fā)的細(xì)菌病，如大腸桿菌、沙門氏菌、副豬嗜血桿菌、鏈球菌等。大腸桿菌主要引起仔豬黃痢和仔豬水腫病，其臨床上主要表現(xiàn)為腹瀉、嘔吐、眼瞼水腫、脫水等癥狀。豬鏈球菌病多發(fā)生于育肥豬，發(fā)病后豬常常表現(xiàn)為關(guān)節(jié)腫大或化膿，因此，一旦發(fā)生要及時(shí)排出關(guān)節(jié)內(nèi)的膿液。本豬場副豬嗜血桿菌病的發(fā)病率相對較高，臨床上常表現(xiàn)為呼吸困難、被毛紊亂，剖檢可見纖維素性胸膜炎、纖維素性關(guān)節(jié)炎等，此病與豬瘟、藍(lán)耳病常常合并感染，因此要格外注意。

經(jīng)過本次對豬場的流行病學(xué)調(diào)查，筆者認(rèn)為引起豬場細(xì)菌病流行的主要原因如下：一是豬場長期使用同一種抗生素對發(fā)病豬進(jìn)行治療，導(dǎo)致一些細(xì)菌產(chǎn)生很強(qiáng)的耐藥性，以至于控制不住而使疫情蔓延。二是混合感染嚴(yán)重。在本次對病料進(jìn)行細(xì)菌分離的時(shí)候發(fā)現(xiàn)，單純性的細(xì)菌感染所占比例非常低，80%以上是混合感染?；旌细腥境３蛑委熞环N病后控制不住另一種病，導(dǎo)致治療不徹底，從而難以控制疾病的發(fā)生和蔓延。三是對消毒工作的認(rèn)識不到位。該豬場技術(shù)人員專業(yè)知識儲備有限，對豬場消毒工作認(rèn)識不到位，經(jīng)調(diào)查和談話發(fā)現(xiàn)其對消毒工作幾乎處于忽視的狀態(tài)。

另外，筆者因長期從事動(dòng)物疫病流行病學(xué)調(diào)查工作，結(jié)合工作實(shí)際發(fā)現(xiàn)漯河市該養(yǎng)豬場大腸桿菌等感染比較嚴(yán)重，此次對該豬場的消毒調(diào)查認(rèn)為豬場在消毒方面存在幾點(diǎn)誤區(qū)：一是很多養(yǎng)殖戶認(rèn)為發(fā)病的時(shí)候再消毒可以有效防控疾病的發(fā)生，未發(fā)病的時(shí)候消毒沒有必要；二是消毒前不做清潔工作，直接拿著消毒劑噴霧或者浸泡；三是消毒工作趨于形式，不能全覆蓋式的消毒。