八角精油對(duì)三黃雞生長(zhǎng)免疫性能及腸道菌群的作用

歐瑩 熊曉妍 覃振斌 虞霖田

（廣西農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，廣西 南寧530007）

八角精油亦稱八角茴香油，是通過(guò)水蒸氣蒸餾法、索氏提取法及CO2超聲波等方法從植物八角（Illicium verum Hook.f.）的莖葉或果實(shí)中提取出的揮發(fā)油。經(jīng)氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MS）分析，其主要成分為反式茴香腦、草篙腦、檸檬烯、芳樟醇、大茴香醛等［1］。有研究報(bào)道，八角精油具有抗菌、鎮(zhèn)痛、抗病毒等藥理學(xué)作用［2］，能抑制大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、黑曲霉等多種細(xì)菌、真菌，具有廣譜抑菌效果［3］。張赟彬等［4］在對(duì)比八角精油與各主要單體（大茴香醛、檸檬烯、反式茴香腦）對(duì)大腸桿菌抑菌效果時(shí)發(fā)現(xiàn)，單體檸檬烯和八角精油效果最佳。另外，八角精油具有誘導(dǎo)動(dòng)物進(jìn)食，促進(jìn)腸道發(fā)育，刺激腸胃蠕動(dòng)及消化液分泌，提高動(dòng)物機(jī)體的抗氧化能力和免疫力，增加日食量，改善肉質(zhì)等功能［5］，是替代抗生素作為動(dòng)物飼料添加劑的潛在物質(zhì)。

當(dāng)前，八角精油主要應(yīng)用于藥物、食品以及化妝品等領(lǐng)域，在畜牧生產(chǎn)領(lǐng)域的研究與應(yīng)用較欠缺。本試驗(yàn)探究八角精油對(duì)三黃雞的生長(zhǎng)性能、免疫性能及腸道菌群的影響，旨在為八角精油在三黃雞生產(chǎn)上的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

八角精油（乙醇提）、八角精油（水提）皆由本實(shí)驗(yàn)室通過(guò)索氏提取法，利用乙醇、水為溶劑從廣西八角果實(shí)中提取得到，同時(shí)經(jīng)青島科創(chuàng)質(zhì)量檢測(cè)有限公司進(jìn)行主要成分檢測(cè)，結(jié)果詳見(jiàn)表1；氟苯尼考粉（主要成分氟苯尼考占比為98%）購(gòu)自山東魯西獸藥有限公司；禽類免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM）ELISA檢測(cè)試劑盒購(gòu)自武漢基因美生物科技有限公司。

表1 八角精油主要成分含量 （單位：%）

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

21天齡三黃雞公雞，購(gòu)自廣西富鳳農(nóng)牧有限公司。

1.3 基礎(chǔ)日糧

基礎(chǔ)日糧為小雞配合飼料，購(gòu)自南寧漓源糧油飼料有限公司，主要原料為玉米、小麥、高粱等谷物或塊根及其加工產(chǎn)品，以及豆粕、魚粉、磷酸氫鈣、石粉、氯化鈉、L-賴氨酸、蛋氨酸羥類似物、維生素A、維生素D3、維生素E、維生素K3、硫酸銅、硫酸亞鐵、硫酸鋅、丙酸鈣等，主要成分詳見(jiàn)表2。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4 .1八角精油對(duì)三黃雞生長(zhǎng)性能的影響將150

只21天齡的三黃雞公雞，隨機(jī)分成5組，每組30只（3個(gè)重復(fù)，10只/重復(fù)）：試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組、試驗(yàn)Ⅲ組、試驗(yàn)Ⅳ組和空白對(duì)照組（C）。這5組基礎(chǔ)日糧中分別添加八角精油（乙醇提）0.4g/kg、八角精油（水提）0.4g/kg、八角精油（水提）0.8g/kg及抗生素（氟苯尼考粉）0.06g/kg，C組僅飼喂基礎(chǔ)日糧。試驗(yàn)期間，各組雞自由采食與飲水，連續(xù)飼喂21天。試驗(yàn)開(kāi)始和結(jié)束時(shí)，試驗(yàn)雞禁食（自由飲水）12h后稱重，記錄初始重和末重，統(tǒng)計(jì)耗料量。計(jì)算各組的日增重（ADG）、日耗料（ADFI）和料重比（F/G）。

表2 基礎(chǔ)日糧主要成分

1.4.2 八角精油對(duì)三黃雞免疫功能的影響在飼喂后第21天，各試驗(yàn)組每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取2只雞（共30只）采血并測(cè)定血清中免疫球蛋白IgA、IgG和IgM含量，測(cè)定方法嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。

1.4.3 八角精油對(duì)三黃雞腸道菌群的影響在飼喂后第21天，各試驗(yàn)組每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取1只雞（共15只）進(jìn)行直腸糞便取樣，共取15個(gè)樣，每個(gè)糞樣稱取1.0 g連續(xù)梯度稀釋至10-3、10-7濃度，每個(gè)稀釋度糞樣設(shè)兩個(gè)重復(fù)，分別接種營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基、MRS固體培養(yǎng)基，于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后進(jìn)行芽孢桿菌、大腸桿菌和乳酸菌計(jì)數(shù)。大腸桿菌在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上呈粉紅色或紫紅色圓形菌落；在營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上呈灰白色的光滑小菌落；芽孢桿菌在營(yíng)養(yǎng)瓊脂上呈白色的圓形菌落，邊緣不規(guī)則，且表面有裂紋；乳酸桿菌在MRS瓊脂上的菌落呈圓形，中等大小，凸起，微白色，濕潤(rùn)，邊緣整齊。

1.5 數(shù)據(jù)處理

利用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析，Duncan氏法進(jìn)行多重比較等方法對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理。

2 結(jié)果與分析

2.1 八角精油對(duì)三黃雞生長(zhǎng)性能的影響

在試驗(yàn)開(kāi)始前記錄各組雞的初始體重，飼喂后第21天，各組雞稱重、稱料，計(jì)算日增重量（ADG）、日耗料（ADFI）、料重比（F/G）。試驗(yàn)結(jié)果顯示詳見(jiàn)表3，Ⅰ組F/G較Ⅳ組與C組分別降低了6.8%、4.3%（P＞0.05）；Ⅱ組F/G較Ⅳ組與C組分別降低了5.7%、3.1%（P＞0.05）；Ⅲ組F/G較Ⅳ組與C組分別降低了12.9%、10.5%（P＜0.05）且ADG略高于其他組（P＞0.05），ADFI較C組降低了9.3%（P＜0.05）。試驗(yàn)結(jié)果表明八角精油能提高三黃雞的日增重，降低日耗料，提高料重比。

表3 八角精油對(duì)三黃雞生產(chǎn)性能的影響

2.2 八角精油對(duì)三黃雞免疫功能的影響

在試驗(yàn)開(kāi)始后的第21天，對(duì)各組雞采血并測(cè)定血清中免疫球蛋白IgA、IgG和IgM含量。試驗(yàn)結(jié)果顯示，Ⅰ組IgG含量較Ⅳ組與C組分別提高了19.5%、15.2%（P＞0.05）；Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組IgA含量較Ⅳ組分別提高了10.7%、24.2%、29.4%（P＞0.05），Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組IgA含量較C組分別提高了24.5%（P＞0.05）、36.4%（P＜0.05）、44.9%（P＜0.05）；免疫球蛋白IgM指標(biāo)中，八角精油組較空白對(duì)照組并無(wú)提高，較抗生素組稍有提高，各組差異不顯著（見(jiàn)表4），試驗(yàn)結(jié)果表明八角精油能提高三黃雞血清IgA、IgG含量，提高免疫性能。

表4 八角精油對(duì)三黃雞免疫指標(biāo)的影響

2.3 八角精油對(duì)三黃雞腸道菌群的影響

在飼喂后第21天，各組雞直腸糞便細(xì)菌計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，試驗(yàn)組大腸桿菌數(shù)均較空白組低，I、II、III組較空白組分別降低48.71%、49.88%和53.23%，而抗生素組的大腸桿菌數(shù)量則降低了58.31%；試驗(yàn)組芽孢桿菌數(shù)較空白組稍有提高，I、II、III組較空白組分別提高2.33%、14.82%和9.65%，而IV組芽孢桿菌的數(shù)量較其他組低；此外，各實(shí)驗(yàn)組雞只糞樣中乳酸菌數(shù)差異不顯著，而IV組乳酸菌數(shù)量較其他組低（見(jiàn)表5）。試驗(yàn)結(jié)果表明飼料中添加八角精油能降低三黃雞腸道內(nèi)大腸桿菌數(shù)，且有利于芽孢桿菌數(shù)量增殖。

表5 八角精油對(duì)三黃雞腸道菌群數(shù)量的影響

3 討論及結(jié)論

本研究結(jié)果顯示八角精油水提組ADG較空白對(duì)照組均有提高，該結(jié)果與Soltan等人［6］的相似，表明八角精油對(duì)三黃雞的生長(zhǎng)有一定的促進(jìn)作用，并且呈現(xiàn)劑量效應(yīng)。八角精油0.8g/kg水提組與抗生素氟苯尼考組相比，ADG提高8.3%（P＞0.05），ADFI降低5.5%（P＞0.05），F(xiàn)/G降低了12.9%（P＜0.05），這表明八角精油對(duì)雛雞促生長(zhǎng)作用較氟苯尼考強(qiáng)，氟苯尼考主要是通過(guò)調(diào)節(jié)腸道菌群起到促生長(zhǎng)作用，而八角精油除了可以調(diào)節(jié)腸道菌群外，還能提高十二指腸的絨毛高度［7］，并且八角作為芳香類植物，還具有刺激肝臟、胰腺和腸黏膜消化酶的產(chǎn)生來(lái)增加膽汁流量，從而促進(jìn)小腸對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收的作用［8］，這說(shuō)明了八角精油對(duì)三黃雞促生長(zhǎng)性能的作用不完全是通過(guò)調(diào)節(jié)腸道細(xì)菌所引起。丁曉［9］等研究發(fā)現(xiàn)0.2g/kg八角精油組的雞ADFI顯著提高，其十二指腸相對(duì)重量和空腸相對(duì)長(zhǎng)度顯著提高。于彩云［10］研究發(fā)現(xiàn)日糧添加八角茴香油0.2g/kg、0.4g/kg、0.6g/kg使蛋雞ADFI顯著提高。而本研究八角精油水提0.8g/kg組的ADFI顯著低于對(duì)照組，與丁曉、于彩玉等研究不同，可能是本研究水提八角精油濃度較高，影響了飼料的適口性，導(dǎo)致了ADFI降低，但其有效成分相對(duì)較高，對(duì)胃腸的蠕動(dòng)和消化吸收有促進(jìn)作用，降低料重比，提高了飼料利用率與經(jīng)濟(jì)效益。另外，Osman［11］等發(fā)現(xiàn)肉仔雞添加八角油提取物和丁香混合物可以降低F/G。本研究結(jié)果與Osman的相似，八角精油水提0.8g/kg組F/G顯著低于抗生素組及空白對(duì)照組（P＜0.05），表明了高劑量水提八角精油降低了三黃雞料重比。本研究還發(fā)現(xiàn)在反式茴香腦相同的情況下，三黃雞的F/G指標(biāo)中，水提八角精油組較乙醇提組明顯降低，可能與它們的其他主要成分差異有關(guān)，水提八角精油的主要成分中，芳樟醇、草蒿腦、檸檬烯、桉樹(shù)腦等單體成分均高于乙醇提八角精油，可能是以上單體物質(zhì)或混合物起到了降低三黃雞F/G的作用，具體原因還需要進(jìn)一步探究。

目前，八角精油在畜牧生產(chǎn)中的研究與應(yīng)用不多，且集中在哺乳動(dòng)物上，八角精油對(duì)雞甚至家禽免疫功能調(diào)節(jié)的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。劉艷君［12］發(fā)現(xiàn)在斷奶仔豬飼料中添加八角精油，仔豬血清免疫球蛋白IgA、IgG、IgM的濃度顯著提高；此外，學(xué)者發(fā)現(xiàn)八角茴香提取液能促進(jìn)小鼠脾臟的發(fā)育以及鼠脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)［13］。因此，當(dāng)前研究表明了八角精油對(duì)哺乳動(dòng)物的免疫系統(tǒng)具有調(diào)節(jié)作用。丁曉等［14］在雞日糧中添加八角精油（0.5g/kg）進(jìn)行研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)雛雞的肝臟和血清中的超氧化物歧化酶（SOD）以及谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）活力均顯著提高，而丙二酸（MDA）含量顯著降低，脾臟指數(shù)顯著提高；但是該研究尚未探究八角精油對(duì)雞免疫球蛋白的作用。然而，本研究結(jié)果表明了水提八角精油能顯著提升雛雞血清中IgA含量（P＜0.05），對(duì)IgG的含量有提升趨勢(shì)但不顯著，而對(duì)IgM水平無(wú)提高。

本試驗(yàn)中，在雛雞21天齡時(shí)采樣檢測(cè)，結(jié)果顯示試驗(yàn)組八角精油飼喂的雞腸道中的大腸桿菌數(shù)量均有所降低，其中水提八角油組下降最為明顯，然而，八角精油對(duì)雛雞腸道乳酸菌的數(shù)量并沒(méi)有提升。表明八角精油能抑制21天齡三黃雞腸道中大腸桿菌體，且水提法優(yōu)于乙醇提取法。于彩云等人研究發(fā)現(xiàn)八角精油蛋雞組較其他組間盲腸大腸桿菌和乳酸菌數(shù)量無(wú)顯著差異（P＞0.05），但隨著日糧中八角精油含量的增加，盲腸內(nèi)大腸桿菌數(shù)量呈線性降低［15］。本研究結(jié)果與于彩云研究一致，八角精油水提0.8g/kg組雛雞腸道中大腸桿菌數(shù)量較0.4g/kg組的低；八角精油對(duì)腸道中的乳酸菌數(shù)量無(wú)作用，而卻能提升雛雞腸道中枯草芽孢桿菌數(shù)量。因此，本試驗(yàn)表明了八角精油對(duì)三黃雞雛雞腸道菌群具有調(diào)節(jié)作用，然而對(duì)腸道微生物的種類的調(diào)節(jié)具有選擇性，并且呈現(xiàn)出劑量效應(yīng)。

本研究發(fā)現(xiàn)水提八角精油組大腸桿菌數(shù)量低于乙醇提組，表明水提八角精油對(duì)大腸桿菌的體內(nèi)抑制作用比乙醇提強(qiáng)，這可能與兩者單體成分含量不同有關(guān)，水提八角精油中的芳樟醇和檸檬烯含量較多，可能是這兩種單體物質(zhì)對(duì)雞腸道大腸桿菌的體內(nèi)抑制效果較好。姜冬梅等［16］發(fā)現(xiàn)芳樟醇具有抗菌、抗炎、抗腫瘤等藥理活性，張赟彬等［4］發(fā)現(xiàn)檸檬烯的體外抑菌效果較反式茴香腦、大茴香醛等好。八角精油對(duì)雞腸道大腸桿菌有一定的抑制作用，今后可開(kāi)發(fā)復(fù)方制劑，引入肉桂［17］、止痢草［18］等提取物，聯(lián)合運(yùn)用以增強(qiáng)抑菌效果。

綜上所述，三黃雞日糧中添加濃度0.8g/kg的水提八角精油，可顯著降低日采食量和料重比（P＜0.05），顯著提高血清中免疫球蛋白IgA水平（P＜0.05），有抑制腸道大腸桿菌的作用（P＞0.05）。因此，水提八角精油可提高三黃雞生產(chǎn)性能，提高部分血清免疫球蛋白水平，優(yōu)化腸道菌群，具有潛在的作為動(dòng)物飼料添加劑價(jià)值。目前，通過(guò)水提法從八角莖、葉及果實(shí)提取的八角精油已商品化生產(chǎn)，該油市場(chǎng)價(jià)格約300元/kg，本試驗(yàn)中八角精油添加劑量?jī)H為0.1～0.8g/kg，成本低。添加八角精油組較空白對(duì)照組料重比降低了4.3%～10.5%，有效的提高了經(jīng)濟(jì)效益。廣西是全國(guó)養(yǎng)雞的重要地區(qū)，特別是優(yōu)質(zhì)三黃雞的生產(chǎn)基地，2019年1～5月累計(jì)增長(zhǎng)幅度達(dá)到了535.3萬(wàn)噸［19］。因此，八角精油在雞飼料中的應(yīng)用能夠降低雞的料重比，這將對(duì)廣西養(yǎng)雞業(yè)產(chǎn)生可觀的經(jīng)濟(jì)效益。