吳凡，劉繼華，周蘭，李宏，王光燦

2-（鄰乙氧基苯氧基）溴乙烷是鹽酸坦洛新的合成中間體，四丁基溴化銨（TBAB）作為催化劑可用于其合成。TBAB 為白色晶體或粉末，具有特殊氣味，可溶于水、醇和丙酮。TBAB 作為表面活性劑廣泛用于日用化工產品生產中［1］，但其吸入、攝取和皮膚接觸均有一定毒性，可刺激皮膚、眼睛和呼吸系統(tǒng)。本研究建立液質聯(lián)用法［2-4］并用于檢測2-（鄰乙氧基苯氧基）溴乙烷中TBAB 的殘留量，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 AB Sciex QTRAP?4500 液質聯(lián)用儀，CPA225D 電子天平，超聲儀（Fungilab SK10GT，頻率53 kHz）。

1.2 試劑 甲醇為色譜純，水為純化水，甲酸為優(yōu)級純，TBAB（國藥集團化學試劑有限公司生產，生產批號：20150827）為分析純，2-（鄰乙氧基苯氧基）溴乙烷（昆明積大制藥股份有限公司生產，生產批號：160302、160102、160502）。

2 方法與結果

2.1 溶液的制備（1）對照品儲備液：精密稱取TBAB，采用甲醇制成每1 ml 中含有TBAB 1 μg 的溶液。（2）對照品溶液：精密稱取對照品儲備液，采用甲醇稀釋成濃度約為10 ng/ml 的溶液。（3）系統(tǒng)適用性溶液：精密稱取TBAB 及2-（鄰乙氧基苯氧基）溴乙烷，采用甲醇稀釋成每1 ml 含有TBAB 約20 ng 及2-（鄰乙氧基苯氧基）溴乙烷20 ng 的溶液。（4）樣品溶液：精密稱取供試品0.1 g，精密加甲醇5 ml，超聲2 min 使其溶解，搖勻。

2.2 液質條件 液相條件：色譜柱為Welch Xtimate UHPLC C18（GD），2.1 mm×50 mm，1.8 μm；柱溫40 ℃，流動相：甲醇∶0.1%的甲酸水溶液（50 ∶50），流速：0.2 ml/min；進樣量：1 μl。質譜條件：多反應離子檢測（MRM）；正離子檢測模式，氣動輔助電噴霧離子化（ESI）；毛細管電壓：5.50 kV，去簇電壓：80.00 V，離子源溫度：550 ℃。

TBAB 分子式為（CH3CH2CH2CH2）4NBr，（C16H36BrN），分子量為322.3。取TBAB 對照品儲備溶液注入質譜儀，獲得m/z 為242.3 的分子離子峰，即TBAB 脫去溴的離子；碎片離子中以m/z 為142.1 及100.0 較強，故選取m/z 為242/142 的離子對作為監(jiān)測對象［5］。2-（鄰乙氧基苯氧基）溴乙烷選擇m/z為245/165 的離子對進行檢測，調節(jié)流動相使TBAB 與2-（鄰乙氧基苯氧基）溴乙烷達到良好分離。檢測樣品時為避免高濃度的2-（鄰乙氧基苯氧基）溴乙烷污染離子源，故將2-（鄰乙氧基苯氧基）溴乙烷部分做閥切換分流使其不進入質譜檢測器，進而達到僅檢測TBAB 的目的。TBAB 的質譜圖見圖1，TBAB 與2-（鄰乙氧基苯氧基）溴乙烷的分離圖見圖2。

圖1 TBAB 的質譜圖

圖2 TBAB 與2-（鄰乙氧基苯氧基）溴乙烷的分離圖

2.3 方法學考察

2.3.1 標準曲線 精密量取對照品儲備液，分別采用甲醇稀釋成約為54.0、21.6、10.8、5.4、2.16、1.08、0.54 ng/ml的對照品溶液，按“2.2”項下方法進行測定，記錄液質譜圖，以濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標作圖，得到回歸方程：Y=3.65e+5x-4.37e+4（R2=0.998 8），表明濃度在0.54～54.0 ng/ml 范圍內呈良好線性關系。

2.3.2 精密度試驗 精密度試驗取標準曲線項下的10.8 ng/ml的TBAB 溶液，按“2.2”項下方法測定，平行試驗5 次，測得的峰面積RSD%為1.4%，提示精密度良好。

2.3.3 方法重復性試驗 取同一批次2-（鄰乙氧基苯氧基）溴乙烷適量，按“2.1”項下方法制備6 份樣品溶液，按“2.2”項下液質條件測定TBAB 的殘留量，檢出TBAB 平均值為638.2 ng/g，RSD%為1.8%。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗 取標準曲線項下濃度為10.8 ng/ml 的溶液，分別于0、2、4、6、8 h進樣，以峰面積計算得RSD%為1.8%，提示該溶液8 h 內穩(wěn)定。

2.3.5 檢測限及定量限 取TBAB 對照品溶液逐級稀釋，以3倍信噪比計，檢測限為0.1 pg；以10 倍信噪比計，定量限為0.5 pg。見圖3。

圖3 檢測限與定量限圖

2.3.6 回收率試驗 精密稱取同一批次2-（鄰乙氧基苯氧基）溴乙烷適量，共9 份，分別精密加入TBAB 對照品溶液（20 ng/ml）2.0 ml、2.5 ml、3.0 ml，加甲醇至5 ml，按“2.1”項下方法制備樣品溶液，并按“2.2”項下條件進行測定，計算回收率。測得平均回收率為105.91%（見表1），RSD%為2.68%，提示方法準確性較好，可準確測定2-（鄰乙氧基苯氧基）溴乙烷中TBAB 的殘留量。

表1 回收率的測定結果

2.4 樣品測定 取3 批2-（鄰乙氧基苯氧基）溴乙烷適量，按“2.1”項下方法制備樣品溶液，并按“2.2”項下條件進行測定，3 批樣品中均檢測到TBAB，含量分別為647.5、623.8、617.5、665.3、392.6、365.7 ng/g。見圖4。

圖4 2-（鄰乙氧基苯氧基）溴乙烷中TBAB 殘留量的液質圖譜

3 討論

TBAB 為季銨鹽型陽離子表面活性劑，因其無紫外吸收，也不具有揮發(fā)特性，故無法采用液相色譜或氣相色譜等常規(guī)方法進行測定。當TBAB 作為催化劑使用時，成品中殘留量較少。液質聯(lián)用法具有液相的高分離能力與質譜的強鑒定能力，采用液相分離2-（鄰乙氧基苯氧基）溴乙烷與TBAB，將2-（鄰乙氧基苯氧基）溴乙烷部分做閥切換分流使其不進入質譜檢測器，而僅讓TBAB 進入質譜檢測器，故無需提取即可達到富集TBAB 的作用。本研究主要目的是建立測定2-（鄰乙氧基苯氧基）溴乙烷中TBAB 殘留量的液質聯(lián)用法，該方法專屬性強，其標準曲線、定量范圍、精密度、準確度、樣品穩(wěn)定性及回收率等均符合要求，表明該方法靈敏、準確、可靠，可用于檢測2-（鄰乙氧基苯氧基）溴乙烷中TBAB 的殘留量，以利于藥品質量標準的提高及控制。