長沙市第一醫(yī)院普通外科 湖南 長沙 410005

據(jù)最新數(shù)據(jù)顯示[1],2018年,全球乳腺癌發(fā)病患者新增約208.9萬人,發(fā)病率約11.6%。乳腺癌的主要治療方法有手術(shù)治療、化學(xué)藥物治療、內(nèi)分泌治療、放療、靶向藥物等[2]。但部分病人全身情況差不能耐受化療,因此開發(fā)新型中藥對治療乳腺癌具有重要的意義[3-6]。而牛蒡子苷元作為一種中藥對乳腺癌具有一定的抗癌作用,同時對人體細胞的影響較小,能夠減少化療并發(fā)癥對患者的傷害[7-11],本文主要討論明牛蒡子苷元對乳腺癌細胞MCF-7的生長抑制作用,為牛蒡子苷元抗癌提供了一定的實驗及理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器設(shè)備 超低溫冰箱(-80℃)(Thermo Scientific Forma公司);冰箱(4℃)、低溫冰箱(-20℃)(海爾公司);制冰機(Scotsman公司);牛蒡子苷元、RPMI1640培養(yǎng)基(Gibcobrl公司);乳腺癌細胞MCF-7(ATCC公司);DMEM/F12培養(yǎng)基(Invirtrogen公司);胎牛血清FBS(Gibco公司)。

1.2 試驗方法

1.2.1 培養(yǎng)方式

1.培養(yǎng)液環(huán)境如下:溫度37℃,二氧化碳濃度為5%,濕度飽和,10%胎牛血清FBS(Fetal Bovine Serum)抗生素(100U/ml青霉素及100ug/ml鏈霉素)。

2.生長方式:貼壁生長,傳代周期(2～3天)。

3.試驗方式:制成乳腺癌細胞MCF-7懸液

1.2.2 用藥組與對照組 取乳腺癌細胞MCF-7懸液,統(tǒng)計懸液乳腺癌細胞濃度(1×107個/ml)。利用96孔板將懸液分成4組(每組包含6孔),隨機分配對照組和用藥組,并將其編碼處理,對照組(1組),用藥組(2～3組)。其中1組加入0.02%二甲亞砜溶液。2～3組分別加入濃度為0.5、1.0、1.5mg/ml牛蒡子苷元溶液(采用0.02%二甲亞砜進行溶解)。4組均培養(yǎng)72小時。

1.2.3 光吸值A(chǔ)和增值抑癌率的檢測 為了定量描述牛蒡子苷元對乳腺癌細胞的生長作用,在此可以用乳腺癌細胞MCF-7的光吸收值A(chǔ)以及其增值抑癌率ZMCF-7對其作用進行定量表述,其中光吸收值A(chǔ)越小表明乳腺癌細胞活性越低而牛蒡子苷元對乳腺癌細胞的生長抑制作用越明顯。反之則作用越小。光吸收值A(chǔ)的測定方法:選擇濃度為5mg/ml的MTT溶液;波長選擇在570nm處測定光吸收值A(chǔ);每隔24小時測定一次;所有數(shù)值測定3次取平均值記錄。

2 結(jié)果

2.1 牛蒡子苷元對乳腺癌細胞生長影響的定量描述 下表3記錄了1～4組每24小時測定的吸收光值A(chǔ)。

表1 每24小時MTT法檢測1～4組的光吸收值A(chǔ)(A570,±s)

表1 每24小時MTT法檢測1～4組的光吸收值A(chǔ)(A570,±s)

組別 24h 48h 72h F值 P值對照組(1組)1.332±0.345 1.251±0.258 0.998±0.055 137.75 0.000 0.5 mg/l(2組)0.812±0.055#0.778±0.053#0.596±0.049#206.64 0.000 1.0mg/l(3組)0.762±0.044#0.678±0.043#0.488±0.039#170.97 0.000 5.0mg/l(4組)0.484±0.023#0.457±0.022#0.397±0.021#538.95 0.000

注:#vs對照組,P<0.05

2.2 不同濃度的牛蒡子苷元對乳腺癌細胞的生長作用 表4可以通過表3的光吸收值A(chǔ)以及計算公式(1)計算得來,表4定量的表述不同濃度的牛蒡子苷元對于乳腺癌細胞MCF-7生長的抑制作用。即隨著牛蒡子苷元濃度的增加,其抑癌增值率值增加,即抑制效果越明顯。

表2 不同濃度牛蒡子苷元的抑癌增值率

3 討論

根據(jù)現(xiàn)有的研究及臨床經(jīng)驗表明,治療乳腺癌最有效的方式是進行手術(shù)切除。但是對于年老體弱或癌細胞已經(jīng)擴散的病人來說,手術(shù)治療的風險及費用都是極高,因此使用藥物治療才是最合適這類人群的選擇。從生物學(xué)的角度來說,乳腺癌細胞的生長和擴散本質(zhì)上都依賴于外界的營養(yǎng)輸入。而這些營養(yǎng)輸送的通道就是乳腺癌腫瘤表面分布著的血管。而關(guān)于血管的生長機制有研究表明存在多種因子共同作用。根據(jù)以上癌細胞生長機制,有臨床實驗表明,目前存在一種很好的化療方案,即使用VEGF配體和VEGF受體來阻斷癌細胞血管生成的大分子靶向藥物貝伐單抗聯(lián)合化療。治療效果較好[12-15],但是抑制血管內(nèi)皮因子VEGF藥物的研發(fā)和生產(chǎn)成本極高[16]。普通病人無法承受使用該藥物的經(jīng)濟壓力。而本文采用的牛蒡子苷元為一種中藥,具有成本低廉,副作用較小,抗癌效果有一定的優(yōu)勢。

綜上所述,牛蒡子苷元在乳腺癌細胞MCF-7的生長過程中起到抑制作用,且濃度的越大而抑制效果越好。本研究不足之處對照組較少,還需要進一步增加對照組以證實本研究結(jié)論。