高 嵩，李 旭，于春雷，溫 健，李瑞春，孫文松*

（1.遼寧省經(jīng)濟(jì)作物研究所，遼寧遼陽 111000；2.遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院藥用植物研究所，遼寧遼陽 111000）

龍膽（Gentianascabra B ge.）為龍膽科多年生草本植物[1]，根莖入藥，是我國傳統(tǒng)中藥材，味苦，性寒。歸肝、膽經(jīng)。有清熱燥濕，瀉肝膽實(shí)火的功效[2]。國內(nèi)外對龍膽屬植物做了大量的研究，從中分離鑒定出多種化學(xué)成分，主要為環(huán)烯醚萜苷類、裂環(huán)環(huán)烯醚萜苷類和黃酮類成分[3]，這些成分均受烘干溫度影響。為了利于運(yùn)輸與保存，龍膽草以干燥的根莖入藥，干燥處理是目前最主要的加工方式。然而，在加工企業(yè)生產(chǎn)中，龍膽草沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)加工干燥處理溫度，龍膽草質(zhì)量參差不齊。關(guān)于龍膽草烘干溫度的研究少有報道。該研究通過對主產(chǎn)區(qū)清原縣生產(chǎn)龍膽草采用不同溫度烘干后的品質(zhì)特性，采用高效液相色譜法檢測龍膽苦苷等有效成分含量，力求尋找最佳烘干溫度，為龍膽草的初加工提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)準(zhǔn)備

1.1.1 試驗(yàn)儀器。高效液相色譜儀（K2025，山東悟空儀器有限公司），高速萬能粉碎機(jī)（F W100，天津市泰斯特儀器有限公司），分析天平（Y P502N，上海菁海儀器有限公司），K Q-500E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（D GG-9203A，上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）。

1.1.2 試驗(yàn)材料。龍膽苦苷（批號：B20763）、獐牙菜苷（批號：B21643）、獐牙菜苦苷（批號：B21644），對照品均購自上海源葉生物科技有限公司，純度≥98%；甲醇、乙腈、磷酸（色譜純，賽默飛世爾科技有限公司），純凈水（杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司）。栽培的龍膽草鮮藥材采集于撫順市清原縣英額門鎮(zhèn)椽子溝村（40°11′10.27″N，125°08′22.45″E），經(jīng)遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院藥用植物研究所鑒定為龍膽（Gentiana scabra B ge.）。

1.2 方法

1.2.1 樣品制備。以新鮮龍膽草根莖為原料，清水清洗后，自然風(fēng)干。在電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)采用不同溫度進(jìn)行烘干處理。烘干溫度分別為40℃、50℃、60℃、70℃共4個處理，標(biāo)記為G4、G5、G6、G7，自然陰干為對照C K。每個烘干溫度用材料500 g，重復(fù)3次，在烘干處理后期，每隔1 h進(jìn)行稱重，直至恒重。統(tǒng)計(jì)不同烘干溫度下龍膽草藥材干燥所需的時間。

1.2.2 折干率測定。測定不同烘干溫度下龍膽草的折干率，以含水量為0計(jì)算折干率。水分測定參照《2020版中國藥典》中水分的測定要求進(jìn)行。

龍膽草折干率=烘干后龍膽草的重量/新鮮龍膽草的重量×100%

1.2.3 有效成分含量測定。

（1）對照品溶液的制備。精密稱定獐牙菜苦苷8.6 mg于10 m L容量瓶中，以甲醇定容，為獐牙菜苦苷對照品母液；精密稱定獐牙菜苷9.0 mg于50 m L容量瓶中，以甲醇定容，為獐牙菜苷對照品母液；精密稱定龍膽苦苷13.1 mg，再分別精密吸取獐牙菜苦苷對照品溶液2 m L、獐牙菜苷對照品溶液1 m L于同一10 m L容量瓶中，以甲醇定容，配制成含獐牙菜苦苷、龍膽苦苷、獐牙菜苷分別為0.172 0、1.310 0、0.001 8 mg/m L的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液，備用。

（2）供試品溶液的制備。精密稱定烘干加工的龍膽草樣品0.25 g于10 m L容量瓶中，加入甲醇10 m L，超聲提取（250 W，20 kH z）30 min，取出冷卻至室溫，加甲醇至刻度線，搖勻，離心，取上層清液過0.45μm微孔濾膜，即得。

（3）色譜條件。色譜柱：V enusil M P-C18（4.6mm×250mm，5μm）；流動相：甲醇（A），水（B）為流動相，梯度洗脫（0～45min，15%A～80%A），檢測波長240nm，流速0.9m L/min，柱溫35℃。樣品進(jìn)樣量10μL。對照品和樣品H P LC見圖1。

圖1 混合對照品（A）及龍膽樣品（B）色譜

1.2.4 線性關(guān)系考察。精密吸取混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液，分別進(jìn)樣4、6、8、10、12、15μL。按照色譜條件進(jìn)行測定，以進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積（A）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（表1）。

表1 線性回歸方程

1.2.5 精密度試驗(yàn)。精密吸取“1.5.1”項(xiàng)下混合對照品溶液10μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積，獐牙菜苦苷、龍膽苦苷、獐牙菜苷的R S D分別為0.97%、1.02%、0.92%，均小于2%，表明儀器性能良好。

1.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)。精密吸取同一龍膽樣品溶液，分別在第0、2、4、6、8、12 h進(jìn)行測定，其峰面積結(jié)果為獐牙菜苦苷1.72%、龍膽苦苷1.64%、獐牙菜苷1.40%，結(jié)果表明龍膽供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

1.2.7 重復(fù)性試驗(yàn)。精密稱取同一龍膽樣品粉末6份，每份0.25 g，按“1.2.2”項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備供試品溶液，測定峰面積，獐牙菜苦苷、龍膽苦苷、獐牙菜苷的R S D分別為1.98%、1.72%、1.22%，均小于3%，表明該方法重復(fù)性良好。

1.2.8 加樣回收率試驗(yàn)。精密稱定6份已知含量的龍膽粉末0.125 g，加入適量混合對照品儲備液，按“1.2.2”項(xiàng)下方法制備龍膽樣品供試液，按“1.2.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行含量測定，計(jì)算獐牙菜苦苷、龍膽苦苷、獐牙菜苷的加樣回收率平均值分別為95.10%、102.3%、98.6%，R S D值分別為1.72%、1.67%、1.84%。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同烘干溫度對龍膽草烘干時間和折干率的影響

從表2可以看出，不同烘干溫度對龍膽草烘干時間的影響差異很大。隨著烘干溫度升高，烘干時間顯著減少。烘干溫度低，所需的烘干時間增加。當(dāng)烘干溫度為60℃以上，隨溫度增加，烘干時間不再縮短。隨著烘干溫度的升高，折干率降低。陰干對照處理的折干率61.24%最高，40℃處理次之，50℃處理折干率與40℃處理相差不多，而60℃處理折干率與70℃處理折干率顯著低于其他處理。

表2 烘干溫度對龍膽草烘干時間的影響

2.2 不同烘干溫度對龍膽草有效成分的影響

從表3可以看出，不同烘干溫度下的龍膽苦苷、獐牙菜苷含量均有顯著差異，而獐牙菜苦苷含量差異性不大。隨烘干溫度增加，龍膽草主要成分龍膽苦苷、獐牙菜苷和獐牙菜苦苷均表現(xiàn)為逐漸增加，并在50℃烘干溫度出現(xiàn)拐點(diǎn)，龍膽苦苷和獐牙菜苷均在烘干溫度50℃時有效成分含量最高。隨溫度再增加，龍膽草有效成分龍膽苦苷和獐牙菜苷呈下降趨勢。而獐牙菜苦苷則表現(xiàn)不同，在70℃烘干條件下，獐牙菜苦苷表現(xiàn)最高成分含量，而50℃處理的獐牙菜苦苷含量次之?？傮w來說，50℃烘干溫度處理的龍膽草有效成分含量最高。

表3 烘干溫度對龍膽草有效成分的影響

2.3 烘干溫度與龍膽草有效成分相關(guān)分析

利用S P SS 20.0對烘干溫度與龍膽草有效成分含量做P e a rson相關(guān)性分析，結(jié)果見表4，獐牙菜苦苷含量與烘干溫度呈極顯著正相關(guān)關(guān)系，獐牙菜苷含量與烘干溫度呈顯著正相關(guān)關(guān)系，而龍膽苦苷含量與烘干溫度無顯著相關(guān)關(guān)系。

表4 烘干溫度與龍膽草有效成分相關(guān)性分析

3 討論

由于中藥材在干燥過程受溫度影響，極易引起外觀性狀、有效成分及生物活性的轉(zhuǎn)變，直接影響到中藥材藥用價值與經(jīng)濟(jì)價值。因此，研究干燥過程中藥材質(zhì)量變化機(jī)制，全面分析中藥材的物理性質(zhì)和化學(xué)成分在干燥過程中的動態(tài)變化規(guī)律，對指導(dǎo)中藥材干燥具有重要意義[4]。前人研究發(fā)現(xiàn)，在20℃～100℃烘干時，秦艽中龍膽苦苷含量逐漸升高，在100℃最高。由于溫度升高，秦艽細(xì)胞中分解酶失活的速度就越快，龍膽苦苷含量就會越高，因此，秦艽在加工過程中，烘干溫度應(yīng)在100℃為宜[5]。該研究發(fā)現(xiàn)龍膽草根莖部分在50℃烘干處理下，其有效成分龍膽苦苷和獐牙菜苷均表現(xiàn)為最佳，并且這一處理?xiàng)l件下，烘干時間較短，折干率相對較高。而高溫60℃和70℃處理下，烘干時間同樣相對短，但折干率低，生產(chǎn)實(shí)踐損耗大，產(chǎn)生生產(chǎn)價值低，而且，龍膽草的有效成分含量也相對較低。陰干處理成本低且耗能小，生產(chǎn)出的龍膽草折干率高，產(chǎn)量大，但龍膽草的有效成分含量低。因此，本著節(jié)約資源的原則，龍膽草初加工中，如若量少，可采用陰干的初加工方式；如若量大，50℃為龍膽草的最佳烘干溫度，可應(yīng)用于指導(dǎo)龍膽草的加工生產(chǎn)。