利用蜂蜜接合酵母合成海藻糖

張敏倩,劉功良*,費(fèi)永濤,白衛(wèi)東,艾連中,俞劍燊

1(仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院 輕工食品學(xué)院,廣東 廣州,510225) 2(上海理工大學(xué) 醫(yī)療器械與食品學(xué)院,上海,200093)3(上海金楓酒業(yè)股份有限公司,上海,200120)

海藻糖是一種甜度較低的非還原性二糖,在生物細(xì)胞中與蛋白質(zhì)或脂質(zhì)之間形成的氫鍵在脅迫條件下具有穩(wěn)定細(xì)胞膜和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的特性[1-2]。相較葡萄糖等其他糖類,化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定,可以通過影響細(xì)胞壁的合成而對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)和毒力產(chǎn)生影響[3]。由于海藻糖的特殊性,在食品領(lǐng)域不僅可以作為食品添加劑與其他甜味劑混合使用來降低甜味劑產(chǎn)生齲齒的副作用,還可以防止食品中的蛋白質(zhì)在干燥或冷凍環(huán)境中發(fā)生變性[4]；在化妝品領(lǐng)域,海藻糖由于自身所具有的保濕性而廣泛應(yīng)用于化妝品中,可有效地緩解皮膚的干燥問題[5]；在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域,可制成衍生物用于抗癌劑[6]、抗腫瘤劑[7]中,作為功能糖可防止代謝綜合癥[8]、緩解亨廷頓病[9]和有助于治療許多涉及氧化應(yīng)激和自噬功能障礙的慢性疾病[10]；在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域,海藻糖可增強(qiáng)農(nóng)作物的抗逆性[11-12],運(yùn)用轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育耐鹽堿型農(nóng)作物、抗凍果蔬等[13]。

目前主要通過化學(xué)合成、微生物發(fā)酵和提取、酶合成方法制備海藻糖[11,14]。其中酶合成法大多與基因工程技術(shù)聯(lián)用[15-18],雖然該方法可有效提高海藻糖的合成率,但應(yīng)用于食品等領(lǐng)域因涉及轉(zhuǎn)基因問題,需要引起人們的特別重視。從食品級(jí)微生物如釀酒酵母或面包酵母中提取或通過發(fā)酵的方法來合成海藻糖的研究受到廣泛重視[19-20]。研究表明,在干燥、高溫、高滲透等惡劣環(huán)境下,酵母內(nèi)的應(yīng)激物代謝機(jī)制導(dǎo)致其胞內(nèi)海藻糖積累量會(huì)明顯上升[21-23],改變細(xì)胞培養(yǎng)條件是提高海藻糖產(chǎn)量的關(guān)鍵之一。

因此,為實(shí)現(xiàn)利用食品級(jí)微生物并通過微生物發(fā)酵這一途徑合成海藻糖的目的,本研究以從蜂蜜中分離并經(jīng)保藏的耐高糖酵母LGL-2為研究對(duì)象,由于該酵母具有耐高滲的特性,應(yīng)激物代謝更為活躍使其具有高產(chǎn)海藻糖的能力[24],并通過單因素和響應(yīng)面試驗(yàn)確定其高產(chǎn)海藻糖的最優(yōu)培養(yǎng)條件,為該菌株的產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)菌株

蜂蜜接合酵母LGL-2,保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心,菌種保藏號(hào)為：CCTCC M 2016787。

1.2 試劑與儀器

葡萄糖,廣東環(huán)凱微生物科技股份有限公司；無水亞硫酸鈉、蒽酮,天津市福晨化學(xué)試劑廠；濃硫酸,天津市大茂化學(xué)試劑廠；苯酚,西隴科學(xué)股份有限公司；3,5-二硝基水楊酸(3,5-dinitrosalicylic acid,DNS),天津市永大化學(xué)試劑有限公司；酒石酸鉀鈉,天津市百世化工有限公司；以上試劑均為分析純。

高速冷凍離心機(jī)(Neo15R),上海力申科學(xué)儀器有限公司；雙光束紫外可見分光光度計(jì)(TU-1901),北京普析通用儀器有限責(zé)任公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 菌種的活化與擴(kuò)培

從超低溫冰箱中取出蜂蜜接合酵母LGL-2,于28 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)30 min。制備糖質(zhì)量濃度為700 g/L的試管斜面固體培養(yǎng)基,挑取1環(huán)酵母在培養(yǎng)基斜面劃線培養(yǎng)96 h,直至出現(xiàn)菌落。從斜面中挑取2環(huán)活化的菌株于10 mL糖質(zhì)量濃度為400 g/L的培養(yǎng)液中,28 ℃、180 r/min恒溫?fù)u床培養(yǎng)48 h后,將10 mL發(fā)酵液倒入90 mL糖質(zhì)量濃度為400 g/L的培養(yǎng)液中,28 ℃、180 r/min恒溫?fù)u床培養(yǎng)48 h,即成接種液。

1.3.2 酵母細(xì)胞中海藻糖的提取

將100 mL發(fā)酵液分成2份,參照酵母細(xì)胞中海藻糖的提取方法[25],利用高溫使酵母的細(xì)胞壁破裂,使其胞內(nèi)海藻糖流出。處理完后取1 g酵母泥加入10 mL去離子水,經(jīng)水浴和離心即得酵母海藻糖提取液。

1.3.3 海藻糖的測(cè)定

蒽酮-硫酸比色法結(jié)合DNS比色法測(cè)得的非還原糖含量與高效液相色譜法測(cè)得的結(jié)果相似[26],可用來簡(jiǎn)便地測(cè)量海藻糖含量。

1.3.3.1 DNS比色法測(cè)還原糖

取1 mL待測(cè)液,采用DNS法[27]測(cè)定發(fā)酵液中的還原糖質(zhì)量濃度(ρ1),單位為mg/mL。

1.3.3.2 蒽酮-硫酸比色法測(cè)總糖

取待測(cè)溶液2 mL,參照蒽酮-硫酸比色法[28]檢測(cè)發(fā)酵液中的吸光度A。

1.3.3.3 海藻糖的含量計(jì)算

標(biāo)準(zhǔn)曲線方程如表1所示。

表1 比色法的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程及相關(guān)系數(shù)Table 1 Standard curve equation and correlation coefficient of colorimetry

海藻糖的含量按公式(1)計(jì)算：

(1)

式中：ρ,海藻糖含量,mg/g；f,海藻糖提取液的稀釋倍數(shù)；m,所得酵母泥的干質(zhì)量,g；10,酵母泥的稀釋倍數(shù)。

1.3.4 單因素試驗(yàn)

1.3.4.1 發(fā)酵時(shí)間對(duì)蜂蜜接合酵母積累海藻糖的影響

以體積分?jǐn)?shù)為10%的接種量將蜂蜜接合酵母接種在糖質(zhì)量濃度為400 g/L的培養(yǎng)液中,在28 ℃,180 r/min的搖床中分別培養(yǎng) 48、60、72、84 和96 h,發(fā)酵結(jié)束后按照1.3.2和1.3.3小節(jié)中的方法對(duì)酵母胞內(nèi)海藻糖進(jìn)行提取和測(cè)定。

1.3.4.2 接種量對(duì)蜂蜜接合酵母積累海藻糖的影響

分別以體積分?jǐn)?shù)為4%、6%、8%、10%和12%的接種量,將蜂蜜接合酵母接種在糖質(zhì)量濃度為400 g/L的培養(yǎng)液中,在28 ℃,180 r/min的搖床中培養(yǎng)84 h,發(fā)酵結(jié)束后按照1.3.2和1.3.3小節(jié)中的方法對(duì)酵母胞內(nèi)海藻糖進(jìn)行提取和測(cè)定。

1.3.4.3 培養(yǎng)溫度對(duì)蜂蜜接合酵母積累海藻糖的影響

以最適接種量將蜂蜜接合酵母接種在糖質(zhì)量濃度為400 g/L的培養(yǎng)液中,分別在20、24、28、30 和32 ℃和180 r/min的搖床中分別培養(yǎng)84 h,發(fā)酵結(jié)束后按照1.3.2和1.3.3小節(jié)中的方法對(duì)酵母胞內(nèi)海藻糖進(jìn)行提取和測(cè)定。

1.3.4.4 葡萄糖初始質(zhì)量濃度對(duì)蜂蜜接合酵母積累海藻糖的影響

以最適接種量將蜂蜜接合酵母接種在糖質(zhì)量濃度分別為300、400、500、600和700 g/L的培養(yǎng)液中,在最適溫度和180 r/min的搖床中分別培養(yǎng)84 h,發(fā)酵結(jié)束后按照1.3.2和1.3.3小節(jié)中的方法對(duì)酵母胞內(nèi)海藻糖進(jìn)行提取和測(cè)定。

1.3.4.5 轉(zhuǎn)速對(duì)蜂蜜接合酵母積累海藻糖的影響

以最適接種量將蜂蜜接合酵母接種在最適糖質(zhì)量濃度的培養(yǎng)液中,以最適溫度,在搖床轉(zhuǎn)速分別為90、120、150、180和210 r/min的搖床中分別培養(yǎng)84 h,發(fā)酵結(jié)束后按照1.3.2和1.3.3小節(jié)中的方法對(duì)酵母胞內(nèi)海藻糖進(jìn)行提取和測(cè)定。

1.3.5 Box-Behnken響應(yīng)面試驗(yàn)

選取發(fā)酵時(shí)間、培養(yǎng)溫度、葡萄糖初始質(zhì)量濃度3個(gè)因素,借助實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)軟件Design-Expert(Version 8.0.6),以海藻糖的產(chǎn)量為響應(yīng)值,設(shè)計(jì)3因素3水平的響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn)。再擬定回歸方程確定蜂蜜接合酵母積累海藻糖的最佳參數(shù)。利用響應(yīng)面模型優(yōu)化的最佳培養(yǎng)條件進(jìn)行發(fā)酵實(shí)驗(yàn),以海藻糖最高產(chǎn)量的試驗(yàn)組進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。

1.4 數(shù)據(jù)處理

每個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次,取平均值。采用SPSS 17.0進(jìn)行單因素方差分析與顯著性差異分析,運(yùn)用Origin 9.0軟件進(jìn)行作圖,Design-Expert 8.0.6進(jìn)行Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素試驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 發(fā)酵時(shí)間對(duì)蜂蜜接合酵母積累海藻糖的影響

由圖1可知,在酵母的發(fā)酵時(shí)間由48 h增加到84 h的過程中,酵母積累代謝產(chǎn)生的海藻糖隨發(fā)酵時(shí)間的增加而明顯增多,發(fā)酵84 h時(shí),海藻糖積累量達(dá)到最大值,此時(shí)的海藻糖含量為65.27 mg/g；當(dāng)發(fā)酵時(shí)間大于84 h時(shí),隨著發(fā)酵時(shí)間的增加，海藻糖的積累量不再呈上升趨勢(shì),因此,選取84 h為蜂蜜接合酵母的最佳發(fā)酵時(shí)間。根據(jù)以往研究,該酵母在50 h左右進(jìn)入平穩(wěn)期,開始積累代謝產(chǎn)物,84 h時(shí)代謝產(chǎn)物積累量達(dá)到最大,菌體開始進(jìn)入衰亡期。王玲等[29]研究了菠蘿果酒酵母菌的生長(zhǎng)曲線,發(fā)現(xiàn)在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)海藻糖幾乎沒有積累,但當(dāng)?shù)竭_(dá)穩(wěn)定期時(shí),酵母細(xì)胞內(nèi)的海藻糖-6-磷酸合成酶的活性大幅度提高,本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與其一致,解釋了海藻糖含量在48～84 h內(nèi)的激增原因。

圖1 發(fā)酵時(shí)間對(duì)蜂蜜接合酵母積累海藻糖的影響Fig.1 Effects of fermentation time on trehalose production in yeast

2.1.2 接種量對(duì)蜂蜜接合酵母積累海藻糖的影響

由圖2可知,當(dāng)酵母的接種量從4%(體積分?jǐn)?shù))提升到10%時(shí),酵母積累代謝產(chǎn)生的海藻糖隨著接種量的提高而逐漸增加,接種量為10%時(shí)海藻糖積累量達(dá)到最大值,此時(shí)的海藻糖含量為68.22 mg/g；當(dāng)接種量大于10%時(shí),海藻糖的積累量隨著接種量的提高反而明顯下降,因此,選取10%接種量為蜂蜜接合酵母的最佳接種量。當(dāng)接種的酵母數(shù)量過多時(shí),在基質(zhì)濃度一定的培養(yǎng)環(huán)境中,酵母菌得不到足夠的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),反而會(huì)導(dǎo)致其生長(zhǎng)代謝受限制,同時(shí),海藻糖作為細(xì)胞的代謝產(chǎn)物有可能作為供能物質(zhì)而被消耗,致使海藻糖含量降低；當(dāng)接種的酵母數(shù)量過少時(shí),菌體的群體數(shù)量相對(duì)減少,導(dǎo)致整體的發(fā)酵速度緩慢,積累代謝產(chǎn)生海藻糖的量也隨之減少。柴麗紅等[30]以釀酒酵母為實(shí)驗(yàn)材料,研究了接種量對(duì)其海藻糖積累量的影響,發(fā)現(xiàn)當(dāng)接種量為10%時(shí),酵母中海藻糖產(chǎn)量達(dá)到最大值,說明過高或過低的接種量都會(huì)導(dǎo)致海藻糖的產(chǎn)量下降。

圖2 接種量對(duì)蜂蜜接合酵母積累海藻糖的影響Fig.2 Effects of inoculum on trehalose production in yeast

2.1.3 培養(yǎng)溫度對(duì)蜂蜜接合酵母積累海藻糖的影響

由圖3可知,當(dāng)培養(yǎng)溫度在20～28 ℃范圍內(nèi)上升時(shí),酵母積累代謝產(chǎn)生的海藻糖隨著培養(yǎng)溫度的上升而逐漸增加,培養(yǎng)溫度為28 ℃時(shí)海藻糖積累量達(dá)到最大值,此時(shí)的海藻糖含量為71.10 mg/g；當(dāng)培養(yǎng)溫度達(dá)到32 ℃時(shí),海藻糖的積累量沒有明顯的變化,但超過32 ℃后,海藻糖累積量隨著培養(yǎng)溫度的升高反而明顯下降,考慮能耗問題,選取28 ℃為蜂蜜接合酵母的最佳培養(yǎng)溫度。過低的溫度會(huì)抑制酵母細(xì)胞內(nèi)與海藻糖合成相關(guān)酶的活性,導(dǎo)致海藻糖的積累量降低；而這些酶的活性會(huì)隨著溫度的升高而增強(qiáng),逐漸積累海藻糖；但過高的溫度也會(huì)影響酵母的生長(zhǎng)繁殖,因此,要在適當(dāng)范圍內(nèi)提高培養(yǎng)溫度。趙玉巧[31]在5 L發(fā)酵罐中研究溫度對(duì)釀酒酵母積累海藻糖的影響,發(fā)現(xiàn)在37 ℃時(shí)海藻糖產(chǎn)量達(dá)到最高為182 mg/g,而菌體生物量則在27 ℃時(shí)達(dá)到最大,說明海藻糖積累的最適溫度與菌株的最適生長(zhǎng)溫度不一致,這與海藻糖需要在苛刻環(huán)境下才會(huì)在微生物體內(nèi)大量積累的結(jié)論相吻合[32]。

圖3 培養(yǎng)溫度對(duì)蜂蜜接合酵母積累海藻糖的影響Fig.3 Effects of culture temperature on trehalose production in yeast

2.1.4 葡萄糖初始質(zhì)量濃度對(duì)蜂蜜接合酵母積累海藻糖的影響

由圖4可知,當(dāng)發(fā)酵液的起始糖質(zhì)量濃度由300 g/L升高至400 g/L時(shí),酵母積累代謝產(chǎn)生的海藻糖隨著葡萄糖初始質(zhì)量濃度的升高而逐漸增加,發(fā)酵液的起始糖質(zhì)量濃度為400 g/L時(shí)海藻糖積累量達(dá)到最大值,此時(shí)的海藻糖含量為42.47 mg/g；當(dāng)葡萄糖初始質(zhì)量濃度高于400 g/L時(shí),海藻糖的積累量隨著糖質(zhì)量濃度的提高反而明顯下降,因此,選取400 g/L為蜂蜜接合酵母的最佳葡萄糖初始濃度。海藻糖是重要的抗高滲保護(hù)劑,在一定范圍內(nèi)的高滲環(huán)境脅迫下,蜂蜜接合酵母會(huì)應(yīng)激產(chǎn)生更多的海藻糖來對(duì)抗外界的不良環(huán)境；但當(dāng)發(fā)酵液的糖質(zhì)量濃度過高時(shí),外界的高滲透壓就會(huì)對(duì)酵母細(xì)胞產(chǎn)生毒害作用,使酵母的活性減弱,影響酵母的生長(zhǎng)。彭酈等[23]研究了起始糖質(zhì)量濃度對(duì)釀酒酵母生物量和海藻糖積累量的影響,發(fā)現(xiàn)糖質(zhì)量濃度對(duì)細(xì)胞數(shù)量的增長(zhǎng)影響不大,而在180～400 g/L的糖質(zhì)量濃度范圍內(nèi),酵母胞內(nèi)海藻糖的積累量隨著糖質(zhì)量濃度的提高而增加。

圖4 葡萄糖初始質(zhì)量濃度對(duì)蜂蜜接合酵母積累海藻糖的影響Fig.4 Effects of glucose initial concentration on trehalose production in yeast

2.1.5 轉(zhuǎn)速對(duì)蜂蜜接合酵母積累海藻糖的影響

由圖5可知,搖床的轉(zhuǎn)速由90 r/min升高至210 r/min時(shí),酵母積累代謝產(chǎn)生的海藻糖隨著搖床轉(zhuǎn)速的增加而逐漸增加,搖床轉(zhuǎn)速為210 r/min時(shí)海藻糖積累量達(dá)到最大值,此時(shí)的海藻糖含量為42.99 mg/g；雖然海藻糖含量在210 r/min時(shí)達(dá)到最大,但與轉(zhuǎn)速在180 r/min時(shí)相差不大,考慮成本等問題,選用180 r/min為最適搖床轉(zhuǎn)速。搖床轉(zhuǎn)速的增加有利于加速氧的溶解,發(fā)酵前期為酵母的生長(zhǎng)期,氧氣的快速溶解有利于酵母的大量生長(zhǎng)繁殖,因此,發(fā)酵后期海藻糖的積累量也增多；當(dāng)搖床轉(zhuǎn)速達(dá)到180 r/min時(shí),酵母的生長(zhǎng)量已經(jīng)達(dá)到了極限,因此,再增加轉(zhuǎn)速對(duì)酵母的生長(zhǎng)繁殖影響不大。鄭輝杰等[33]研究了搖床轉(zhuǎn)速對(duì)釀酒酵母積累海藻糖的影響,發(fā)現(xiàn)海藻糖的產(chǎn)量隨著搖床轉(zhuǎn)速的增加而增加,即使轉(zhuǎn)速達(dá)到240 r/min,對(duì)海藻糖的積累并無不利的影響。

圖5 轉(zhuǎn)速對(duì)蜂蜜接合酵母積累代謝產(chǎn)生海藻糖的影響Fig.5 Effects of rotational speed on trehalose production inyeast

2.2 響應(yīng)面優(yōu)化

根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果,綜合考慮各因素對(duì)海藻糖積累量的影響,選取發(fā)酵時(shí)間、葡萄糖初始質(zhì)量濃度、培養(yǎng)溫度作為試驗(yàn)因素,海藻糖含量作為響應(yīng)值設(shè)計(jì)試驗(yàn),共17個(gè)設(shè)計(jì)點(diǎn)。響應(yīng)面的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果見表2。

表2 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table The response surface with results

使用Design-Expert(Version8.0.6)軟件對(duì)以海藻糖含量為響應(yīng)值進(jìn)行二次多項(xiàng)式回歸擬合分析,得到回歸方程預(yù)測(cè)模型：Y=47.77+21.14A-3.95B-12.75C-1.23AB-2.94AC+10.47BC+9.88A2-4.00B2-15.32C2。

對(duì)模型進(jìn)行方差分析得到的結(jié)果見表3。由表3可知,模型的P<0.05,表明該模型顯著以及各因素對(duì)響應(yīng)值有顯著影響；失擬項(xiàng)P值為0.269 3>0.05,表明失擬項(xiàng)不顯著,二次模型是合理的；R2=0.877 2,表明因變量與所考察的自變量之間的線性關(guān)系顯著,該模型能解釋87.72%響應(yīng)值的變化。從F值的大小可知,各因素對(duì)海藻糖產(chǎn)量影響的強(qiáng)弱順序?yàn)椋篈-發(fā)酵時(shí)間>C-葡萄糖初始濃度>B-培養(yǎng)溫度,單因素A、C的P值遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于0.05,說明發(fā)酵時(shí)間和葡萄糖初始質(zhì)量濃度對(duì)蜂蜜接合酵母積累代謝海藻糖的產(chǎn)量有顯著影響。各因素交互作用的響應(yīng)面及等高線見圖6。

表3 響應(yīng)面方差分析Table 3 Analysis of variance in the response surface

圖6 各因素交互作用對(duì)蜂蜜接合酵母中海藻糖產(chǎn)量影響的響應(yīng)面圖Fig.6 Response surface diagram of the effects of interaction of various factors on trehalose yield in yeast

2.3 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

根據(jù)所建立的數(shù)學(xué)模型,用Design-Expert 8.0.6軟件對(duì)方程進(jìn)行求解,得到蜂蜜接合酵母積累代謝產(chǎn)生海藻糖的最佳發(fā)酵條件為：發(fā)酵時(shí)間96 h,培養(yǎng)溫度24 ℃,葡萄糖初始質(zhì)量濃度300 g/L。結(jié)合響應(yīng)面試驗(yàn)中海藻糖最高產(chǎn)量的試驗(yàn)組進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn),結(jié)果表4所示,優(yōu)化后的海藻糖含量為92.32 mg/g。安寧[25]以釀酒酵母SC2為實(shí)驗(yàn)菌株,對(duì)其進(jìn)行紫外和硫酸二乙酯逐級(jí)誘變處理,胞內(nèi)海藻糖含量由48.1 mg/g提高至64.3 mg/g,后續(xù)實(shí)驗(yàn)可研究蜂蜜接合酵母LGL-2通過誘變、融合、基因重組等方法選育出海藻糖產(chǎn)量更高的菌株。

表4 驗(yàn)證試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table 4 Verify test design and results

3 結(jié)論

本文以蜂蜜接合酵母LGL-2為實(shí)驗(yàn)菌株,通過單因素試驗(yàn),確定發(fā)酵時(shí)間、葡萄糖初始質(zhì)量濃度與培養(yǎng)溫度是影響海藻糖的積累量的主要因素。通過響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn),得到最佳發(fā)酵條件為：發(fā)酵時(shí)間96 h、種量10%、葡萄糖初始質(zhì)量濃度300 g/L、溫度24 ℃、轉(zhuǎn)速180 r/min。經(jīng)優(yōu)化后海藻糖的產(chǎn)量達(dá)到了92.32 mg/g,相比優(yōu)化前提高了29.34%。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果中24 ℃并非該酵母的最適生長(zhǎng)溫度,但從驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)中可知該溫度下的海藻糖產(chǎn)量更高,說明了低溫與高滲環(huán)境對(duì)酵母的應(yīng)激物代謝機(jī)制具有一定影響。