液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定果蔬中的氟蟲腈及其代謝物

趙海濤，王磊，劉會會，周彥成，曹慧慧，王帥

1. 唐山市食品藥品綜合檢驗檢測中心（唐山 063000）；2. 河北省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測技術創(chuàng)新中心（唐山 063000）；3. 唐山市功能性農(nóng)產(chǎn)品產(chǎn)業(yè)技術研究院（唐山 063000）

氟蟲腈殺蟲譜廣，具有觸殺、胃毒和中度內(nèi)吸作用，主要用于農(nóng)作物害蟲和動物寄生蟲的消殺[1]。其既能防治地下害蟲，又能防治地上害蟲，被廣泛應用于蔬菜、水果病蟲害防治。氟蟲腈及其代謝物會殘留在農(nóng)作物和土壤表面，通過滲慮、農(nóng)業(yè)徑流、雨水洪災或動物接觸，影響和危害環(huán)境、生態(tài)系統(tǒng)和人類的安全[2]。

GB 2763—2019中氟蟲腈的殘留量判定以本體計，但現(xiàn)有檢測標準分散，本體與代謝物不在同一檢測標準內(nèi)，導致檢測過程復雜，結(jié)果判定誤差大。GB 23200.8—2016《食品安全國家標準水果和蔬菜中500種農(nóng)藥及相關化學品殘留量的測定氣相色譜-質(zhì)譜法》中雖能準確地測出蔬菜、水果中氟蟲腈的含量，但未提及其代謝物。且前處理操作步驟繁瑣，使用有機試劑毒性強，安全性低[3-5]。

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法多用于禽蛋、動物肌肉、內(nèi)臟和蛋制品中氟蟲腈及其代謝物殘留的檢測[6]，但在植物源性食品中同時檢測氟蟲腈及其代謝物的方法少有提及[7-8]。試驗利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對果蔬中氟蟲腈及其代謝物殘留量同時測定，達到用同一種方法檢測本體和代謝物的目的。該方法提高檢測工作效率，也使得檢測結(jié)果更加準確。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器

LCMS-8040液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（配有電噴霧離子源（ESI），日本島津公司）；氨基固相萃取

1.2 試驗方法

1.2.1 標準曲線測定方法

每個濃度的混合標準溶液均進樣2 μL，獲得相應質(zhì)量濃度（x，mg/L）對應的色譜峰面積（y），將這些數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計處理，可獲得各供試農(nóng)藥的標準曲線及其線性響應情況和相關系數(shù)（R）。

1.2.2 精密度測定方法

取空白果蔬樣品，添加農(nóng)藥混合標準溶液，加標量為0.01和0.02 mg/kg，每個濃度做6個平行，根據(jù)式（1）計算樣品精密度。

式中：δRSD為相對標準偏差；S為標準偏差；x為算數(shù)平均數(shù)；xi為樣品測定值；n為樣品重復測定次數(shù)。

1.2.3 檢出限測定方法

即為試驗方法的最低檢測含量。

1.2.4 回收率測定方法

式中：C0為回收質(zhì)量濃度，μg/mL；C1為樣品添加質(zhì)量濃度，μg/mL。

1.2.5 樣品前處理

樣品取可食部分，經(jīng)切割后采用四分法取樣放入攪拌機內(nèi)打碎，用天平準確稱取25.0 g樣品，加入乙腈50 mL，放于高速勻漿機內(nèi)，勻漿提取2 min，轉(zhuǎn)入柱（北京迪馬科技有限公司）；T25均質(zhì)器（IKA公司）；TTL-DC Ⅱ型氮吹儀（北京同泰聯(lián)科技發(fā)展有限公司）；SZ13022-NY 0.2 μm有機濾膜（天津市領航實驗設備股份有限公司）；GM-K06格明加熱破壁料理機（格明電器實業(yè)有限公司）；T-200電子天平（常熟雙杰儀器制造廠）；PDI超純水器（上海和泰儀器有限公司）。

1.1.2 試劑與材料

標準品氟蟲腈、氟蟲腈砜、氟蟲腈硫醚、氟甲腈（購于農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護科研監(jiān)測所）；乙腈、二氯甲烷、甲醇（均為色譜純）；氯化鈉（分析純，購于MREDA公司）；0.05%甲酸溶液；5 mmol/L甲酸銨溶液；蒸餾水（屈臣氏）；果蔬樣品為番茄、黃瓜、韭菜、馬鈴薯、西瓜、蘋果、橙子（唐山市批發(fā)市場）。

1.1.3 標準溶液的配制

混合標準儲備液：分別吸取100 μ L質(zhì)量濃度1 000μg/mL氟蟲腈、氟蟲腈砜、氟蟲腈硫醚、氟甲腈標準品，用甲醇定容至10 mL，得到質(zhì)量濃度10 μg/mL混合標準溶液，于4 ℃冰箱內(nèi)保存。

混合標準工作溶液：用甲醇逐級稀釋成質(zhì)量濃度分別為0.01，0.02，0.04，0.08，0.12，0.16和0.32 μg/mL的混合標準溶液，于4 ℃冰箱內(nèi)保存。到100 mL裝有6.0 g氯化鈉的具塞量筒中（氯化鈉量以足量飽和即可），劇烈振蕩約30 s，在室溫下靜置30 min，使乙腈相和水相分層。

凈化：從乙腈層中吸取10.0 mL溶液放入10 mL刻度試管中，在80 ℃氮吹儀上緩慢吹至近干，加2 mL二氯甲烷+甲醇（95+5）定容，在漩渦振蕩儀上振蕩30 s，取氨基固相萃取柱，用3 mL淋洗液淋洗柱子，加2 mL樣品于柱內(nèi)，用12 mL二氯甲烷+甲醇（95+5）分3次洗脫試管，收集洗液，在50 ℃氮吹儀上緩慢吹到近干，用2 mL甲醇定容，定容后液體過0.22 μm有機濾膜，裝入進樣小瓶待測。

1.2.6 加標回收試驗

在樣品中分別添加氟蟲腈及其代謝物，添加濃度分別為0.01和0.02 mg/kg，每個添加水平重復6次。

1.3 色譜條件

色譜柱Phenomenex H18（50 mm×3.00 mm，2.60 μm）；柱溫40 ℃；流速0.40 mL/min；進樣量2 μL；流動相采用A相5 mmol/L甲酸銨+0.05%甲酸水溶液、B相純甲醇；洗脫程序梯度洗脫見表1。

表1 梯度洗脫程序

1.4 質(zhì)譜條件

電噴霧離子源（ESI）；霧化氣流量3.00 L/min；干燥氣流量15.00 L/min；DL管溫度250 ℃；氟蟲腈采用負電離模式，其他質(zhì)譜條件見表2。

表2 方法的質(zhì)譜參數(shù)

2 結(jié)果與討論

2.1 液相色譜條件的優(yōu)化

比對流動相為甲醇和乙腈，以及介質(zhì)為甲醇和乙腈的情況。由圖1和圖2可知，當流動相為甲醇時，氟蟲腈及其代謝物峰形較好，基線穩(wěn)定。

由表3可知，當流動相為甲醇、介質(zhì)為甲醇時，除氟蟲腈硫醚外，其余氟蟲腈及其代謝物響應值均較高。因此，綜合考慮選用甲醇作為流動相和介質(zhì)。

圖1 氟蟲腈和氟蟲腈砜譜圖

圖2 氟蟲腈硫醚和氟甲腈譜圖

表3 不同流動相、不同介質(zhì)氟蟲腈及其代謝物響應值

2.2 方法的線性關系、回收率、精密度及檢出限

2.2.1 方法的線性關系

根據(jù)1.2.1中標準曲線測定公式可得出4種農(nóng)藥的線性方程，見圖3～圖6。

圖3 氟蟲腈標準曲線圖

圖4 氟蟲腈砜標準曲線圖

圖5 氟蟲腈硫醚標準曲線圖

圖6 氟甲腈標準曲線圖

2.2.2 樣品回收率、精密度和檢出限

取空白果蔬樣品，添加農(nóng)藥混合標準溶液，加標量為0.01和0.02 mg/kg，每個濃度重復6次。結(jié)果見表4和表5。氟蟲腈、氟蟲腈砜、氟蟲腈硫醚和氟甲腈在水果（西瓜、蘋果和橙子）中平均回收率為81.67%～117.67%，相對標準偏差（δRSD）為0.31%～8.78%；在蔬菜（番茄、黃瓜、馬鈴薯和韭菜）中平均回收率為81.00%～97.33%，相對標準偏差（δRSD）為0.30%～8.43%。結(jié)果表明重現(xiàn)性均較好，方法準確可靠。

表4 水果樣品的回收率、精密度和檢出限

表5 蔬菜樣品的回收率、精密度和檢出限

2.3 方法應用

2017—2019年從市場采集283份果蔬樣品進行氟蟲腈及其代謝物添加回收試驗，δRSD值均小于10%，回收率均在70%～120%之間，符合檢測要求。

3 結(jié)論

試驗建立液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定果蔬中氟蟲腈及其代謝物的方法。樣品前處理操作簡便、快速，提高檢測工作的效率，保證定性及定量結(jié)果的準確性。為本體和代謝物檢測方法分散、判定結(jié)果以本體計的農(nóng)藥檢測提供技術支撐。結(jié)果經(jīng)多次驗證，方法精密度、準確度高，線性關系好，定量下限低于國家農(nóng)藥殘留限量標準，能夠滿足國家對蔬菜、水果中氟蟲腈及其代謝物大規(guī)模的篩查和定量分析。