劉晶晶，江 丹，陳 搏，張繼斌，陳 陽(yáng)，陳志元

（勁牌持正堂藥業(yè)有限公司，湖北黃石 435000）

綠茶是我國(guó)的主要茶類之一[1]，主要分布在四川、安徽、湖北、福建等省份。茶多酚、茶多糖、茶氨酸是綠茶中主要的化學(xué)成分和活性物質(zhì)[2-4]，其含量、配比的不同，在相當(dāng)程度上決定著茶葉色、香、味等品質(zhì)，甚至是某些藥理功效[5]。質(zhì)量指標(biāo)是綠茶理化品質(zhì)的重要部分，包括水分、灰分、有害重金屬含量、農(nóng)藥殘留量等[6]。

試驗(yàn)對(duì)四川、湖北、福建3 個(gè)綠茶主產(chǎn)地的16 個(gè)樣品進(jìn)行了主要成分含量和質(zhì)量指標(biāo)的檢測(cè)分析，利用紫外分光光度計(jì)、高效液相色譜、原子吸收色譜等儀器對(duì)綠茶的茶多酚、茶多糖、茶氨酸、灰分、水分、重金屬、農(nóng)藥殘留含量進(jìn)行了測(cè)定，并利用SPSS 分析軟件對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，對(duì)比不同產(chǎn)地綠茶在主要成分含量和質(zhì)量指標(biāo)方面的差異，為綠茶的原料選擇、加工貯藏等提供技術(shù)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

綠茶，不同產(chǎn)地市售；對(duì)照品L -茶氨酸（純度98%，批號(hào)DST170621-021，成都德斯特生物技術(shù)有限公司提供；無(wú)水D - 葡萄糖（純度99.9%）、L -半乳糖（純度100%）、沒(méi)食子酸，中檢所提供；乙腈（TEDIA，色譜純）；無(wú)水乙醇、福林酚、無(wú)水碳酸鈉、苯酚、硫酸等，均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

T9 型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，北京普析通用有限公司產(chǎn)品；AB135-S 型分析天平，梅特勒-托利多公司產(chǎn)品；水浴鍋，上海申生科技有限公司產(chǎn)品；H1850 型離心機(jī)，湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開(kāi)發(fā)有限公司產(chǎn)品。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 茶多酚含量測(cè)定

參照GB/T 31740.2《茶制品第2 部分：茶多酚》[7]，以吸光度為縱坐標(biāo)（Y）、沒(méi)食子酸的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=0.110 15X-0.021 78，R2=0.999 9。

1.3.2 茶氨酸含量測(cè)定

測(cè)定方法參照文獻(xiàn)所示方法[8]。

1.3.3 茶多糖方法學(xué)研究

（1）對(duì)照品溶液制備。精密稱取L - 半乳糖和D -葡萄糖對(duì)照品適量，加水稀釋至適宜質(zhì)量濃度。

（2）供試品溶液的制備。供試品溶液參照文獻(xiàn)[9]所示方法制備。

（3）最大吸收波長(zhǎng)確定。移取1.3.3（1）對(duì)照品溶液和1.3.3（2）供試品溶液，苯酚- 硫酸法顯示后，采用紫外光譜全波長(zhǎng)掃描（200～800 nm），其中L - 半乳糖和D - 葡萄糖的最大吸收波長(zhǎng)均為490 nm±1 nm。茶多糖是一種雜多糖，不同產(chǎn)地、季節(jié)采收的綠茶，其茶多糖的單糖組成與占比均不相同，文獻(xiàn)報(bào)道的茶多糖測(cè)定方法和單糖配比等無(wú)統(tǒng)一定法[10-12]。

不同產(chǎn)地綠茶的最大吸收波長(zhǎng)見(jiàn)表1。

表1 不同產(chǎn)地綠茶的最大吸收波長(zhǎng)

由表1 可知，不同產(chǎn)地綠茶的最大吸收波長(zhǎng)大體上集中在483 nm±2 nm，以葡萄糖為對(duì)照品，顯色后于490 nm 處測(cè)定不同產(chǎn)地綠茶的茶多糖含量，雖然無(wú)法準(zhǔn)確測(cè)定其真實(shí)含量，但在一定程度上，可以反映不同產(chǎn)地綠茶的茶多糖含量之間的差異。

（4）線性范圍試驗(yàn)。精密移取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0.20，0.40，0.80，1.00，1.20，1.60，2.00 mL 于 10 mL具塞比色管中，補(bǔ)水至2 mL，移取5%苯酚溶液1 mL，濃硫酸5 mL，混勻后置沸水浴15 min，冰浴冷卻，做空白對(duì)照，于波長(zhǎng)490 nm 處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)（Y），葡萄糖的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo) （X），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線為 Y=0.060 2X+0.003 97，R2=0.999 9。

（5）精密度試驗(yàn)。取 1.3.3（1）對(duì)照品溶液適量，按1.3.3（4）方法顯色后，于波長(zhǎng)490 nm 處比色測(cè)定，連續(xù)測(cè)定6 次，計(jì)算吸光度的RSD 值為0.02%，表明儀器的精密度良好。

（6）穩(wěn)定性試驗(yàn)。精密稱定綠茶粉末1 g，按照1.3.3（2）制備供試品溶液，苯酚-硫酸法顯色后于波長(zhǎng)490 nm 處比色測(cè)定。分別在0，5，10，15，20，25，30 min 測(cè)定吸光度，吸光值的RSD 值為0.13%，表明供試品溶液30 min 內(nèi)顯色穩(wěn)定。

（7）重復(fù)性試驗(yàn)。精密稱取綠茶粉末1 g，按照1.3.3（2）制備供試品溶液，苯酚-硫酸法顯色后于波長(zhǎng)490 nm 處比色測(cè)定。根據(jù)測(cè)定結(jié)果計(jì)算綠茶中茶多糖含量均值為1.77%，RSD 值為2.26%，表明檢測(cè)結(jié)果重復(fù)性良好。

（8）加標(biāo)回收試驗(yàn)。精密稱取綠茶粉末9 份，按照1.3.3（2）制備供試品溶液，分別以供試品溶液多糖含量的50%，100%，150%加入葡萄糖對(duì)照品溶液各3 份，苯酚-硫酸法顯色后于波長(zhǎng)490 nm 處比色測(cè)定，計(jì)算綠茶多糖含量檢測(cè)平均回收率為101.10%，RSD 值為2.40%。表明檢測(cè)方法的準(zhǔn)確度良好。

綠茶茶多糖的加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 綠茶茶多糖的加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果

1.3.4 質(zhì)量指標(biāo)測(cè)定

質(zhì)量指標(biāo)的測(cè)定主要包括水分、灰分、重金屬、農(nóng)藥殘留。采用快速水分測(cè)定儀測(cè)定綠茶的水分含量，參照《中國(guó)藥典》 （2015 版）測(cè)定綠茶灰分含量[13]，參照最新版國(guó)標(biāo)方法測(cè)定綠茶中5 種重金屬的含量，參照GB/T 5009.19—2008《食品中有機(jī)氯多組分殘留量的測(cè)定》測(cè)定綠茶的農(nóng)藥殘留[14]。

1.3.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

利用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)不同產(chǎn)地綠茶樣品的主要成分含量及質(zhì)量指標(biāo)（灰分、水分）差異進(jìn)行顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同產(chǎn)地綠茶的主要成分含量差異分析

不同產(chǎn)地綠茶中主要成分含量檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表3，不同產(chǎn)地綠茶主要成分含量分布圖見(jiàn)圖1。

表3 不同產(chǎn)地綠茶中主要成分含量檢測(cè)結(jié)果/%

圖1 不同產(chǎn)地綠茶主要成分含量分布圖

表4 不同產(chǎn)地綠茶主要成分的差異分析

由表3 和圖1 可知，茶多酚、茶多糖與茶氨酸是綠茶中的主要活性物質(zhì)，其含量的高低與茶葉的品質(zhì)密切相關(guān)，其中茶氨酸是茶葉中的主要游離氨基酸，是綠茶湯特殊風(fēng)味和鮮爽味的主要來(lái)源，與綠茶滋味等級(jí)呈強(qiáng)正相關(guān)，已成為評(píng)價(jià)高級(jí)綠茶的重要標(biāo)志之一[15-17]。由表3 和圖1 可知，綠茶的茶多酚含量分布范圍為9%～19%，茶多糖含量分布范圍為1%～3%，茶氨酸含量最高可以達(dá)到1.19%，部分地區(qū)綠茶中茶氨酸含量低于檢出限，顯示未檢出；茶多酚、茶多糖、茶氨酸含量最高的分別為宜賓市、峨眉山市、眉山市（編號(hào)3）。不同地區(qū)綠茶主要成分含量的差異可能是由于氣候、土壤等自然條件的不同引起的，而同一省份不同樣品的差異可能與茶樹(shù)種類、加工工藝等的不同有關(guān)[18]。

由表4 可知，茶多酚、茶多糖、茶氨酸含量均值最高的省份依次為福建、四川、四川，其中四川產(chǎn)綠茶的茶氨酸含量顯著高于湖北，而茶多酚、茶多糖含量3 個(gè)省份差異不顯著。

2.2 不同產(chǎn)地綠茶的質(zhì)量指標(biāo)差異分析

茶葉的灰分、水分、重金屬及農(nóng)藥殘留是茶葉及茶制品化學(xué)分析中的常規(guī)檢測(cè)指標(biāo)。水分是茶葉的重要質(zhì)量指標(biāo)，茶葉含水率的高低直接影響茶葉的儲(chǔ)存方式、貯藏品質(zhì)及質(zhì)量穩(wěn)定性?；曳质遣枞~中無(wú)機(jī)鹽和其氧化物含量的體現(xiàn)，直接關(guān)系到茶葉的品質(zhì)[19]。其中，綠茶灰分和水分含量大體分布在3%～6%，4%～9%。

不同產(chǎn)地綠茶的質(zhì)量指標(biāo)測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表5，不同產(chǎn)地綠茶的質(zhì)量指標(biāo)含量分布圖見(jiàn)圖2，不同產(chǎn)地綠茶質(zhì)量指標(biāo)的差異分析見(jiàn)表6。

由表6 可知，湖北產(chǎn)綠茶的灰分含量顯著高于四川與福建，水分含量顯著低于四川。不同地區(qū)16 個(gè)綠茶樣品的重金屬含量和農(nóng)藥殘留均符合食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的要求。

3 結(jié)論

不同產(chǎn)地綠茶的主要成分含量存在差異，四川產(chǎn)綠茶的茶氨酸含量顯著高于湖北，其中眉山市（編號(hào)3）的茶氨酸含量最高，部分地區(qū)茶氨酸含量顯示未檢出。不同省份間的茶多酚和茶多糖含量差異不顯著，其中茶多酚和茶多糖含量最高的地區(qū)分別為峨眉山市、宜賓市。

對(duì)綠茶主產(chǎn)區(qū)的16 個(gè)樣品進(jìn)行質(zhì)量指標(biāo)檢測(cè)，結(jié)果表明湖北產(chǎn)綠茶的灰分含量顯著高于四川與福建，水分顯著低于四川；3 個(gè)省份的16 個(gè)樣品中重金屬和農(nóng)藥殘留均符合食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，其中重金屬銅離子的含量為10～17 mg/kg，綠茶的深加工過(guò)程中，對(duì)有效成分的精制純化，可能會(huì)形成銅離子的富集，存在安全風(fēng)險(xiǎn)?；趯?duì)不同產(chǎn)地綠茶關(guān)鍵指標(biāo)的對(duì)比分析，可以更好地為綠茶加工及深加工領(lǐng)域的原料選擇、產(chǎn)地評(píng)價(jià)等提供科學(xué)依據(jù)。

表6 不同產(chǎn)地綠茶質(zhì)量指標(biāo)的差異分析