石喆 任珊 戴文斌

【摘要】 乳腺癌是全世界女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，高危型人乳頭瘤病毒（human papillomavirus， HPV）已被證實(shí)存在于乳腺癌及其癌前病變和正常乳腺組織中，但也有研究結(jié)果得出相反的結(jié)論。HPV與乳腺癌病因?qū)W的關(guān)系仍存在較大的爭(zhēng)議，慢性炎癥可以通過(guò)病毒致癌微生物途徑在腫瘤微環(huán)境中啟動(dòng)，Toll樣受體（Toll-like receptors， TLRs）介導(dǎo)的核因子-κB（nuclear factor kappa B， NF-κB）和干擾素調(diào)節(jié)因子（interferon regulatory factors， IRFs）的激活是炎癥與癌癥之間的重要聯(lián)系，激活TLRs/NF-κB信號(hào)通路有助于腫瘤進(jìn)展，TLRs基因多態(tài)性與乳腺癌的易感性有關(guān)，可促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的增殖、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移，進(jìn)而影響乳腺癌的發(fā)生發(fā)展。TLR可能成為乳腺癌治療的潛在藥物治療靶點(diǎn)。本文結(jié)合最新文獻(xiàn)，對(duì)HPV感染及其與TLRs關(guān)系的研究進(jìn)展予以闡述。

【關(guān)鍵詞】 乳腺癌 人乳頭瘤病毒 TLR NF-κB

[Abstract] Breast cancer is one of the most common malignancies in women worldwide. High-risk human papillomavirus （HPV） has been identified in human breast cancer， precancerous lesions and normal breast tissue， but some studies have shown the opposite conclusion. The relationship between HPV and the etiology of human breast cancer is still controversial， chronic inflammation can be initiated in the tumor microenvironment through the cancer-causing microorganisms of the virus， toll-like receptors （TLRs）-mediated activation of nuclear factor kappa B （NF-κB） and interferon regulatory factors （IRFs） is an important link between inflammation and cancer. Activation of TLRs/NF-κB signaling pathway contributes to tumor progression， TLRs gene polymorphism is related to the susceptibility of breast cancer， which can promote the proliferation， invasion and metastasis of breast cancer cells， and then affect the occurrence and development of breast cancer. TLR may be a potential therapeutic target for breast cancer， based on the latest literature， the research progress of HPV infection and its relationship with TLRs was reviewed.

[Key words] Breast cancer Human papillomavirus TLR NF-κB

First-author’s address： Liuzhou People’s Hospital， Liuzhou 545001， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2021.17.045

乳腺癌是威脅我國(guó)女性健康最主要的惡性腫瘤之一，根據(jù)國(guó)際癌癥研究署（International Agency for Research on Cancer， IARC）2012全球癌癥發(fā)布報(bào)告，中國(guó)女性乳腺癌發(fā)病例數(shù)和死亡例數(shù)分別占全球發(fā)病和死亡的11.19%和9.2%，在世界范圍位居前列[1]。2014年全國(guó)登記數(shù)據(jù)表明，2014年女性乳腺癌新發(fā)病例約27.89萬(wàn)例，占女性惡性腫瘤發(fā)病的16.51%，位居女性惡性腫瘤發(fā)病的首位;女性乳腺癌死亡病例約6.60萬(wàn)例，占女性惡性腫瘤死亡的7.82%，位居女性惡性腫瘤死亡的第5位，且年齡有向年輕化發(fā)展的趨勢(shì)，防控形勢(shì)十分嚴(yán)峻，是我國(guó)惡性腫瘤防控工作中的重點(diǎn)[2]。

乳腺癌病因?qū)W及病理發(fā)生機(jī)制仍不甚明確，這一疾病的一些危險(xiǎn)因素已經(jīng)確定，包括年齡、激素、酒精、飲食、環(huán)境污染、家族史以及乳腺癌既往史。然而，在50%～80%的乳腺癌患者中缺乏可識(shí)別的危險(xiǎn)因素，其根本病因尚不清楚，研究者們需要尋找新的導(dǎo)致乳腺癌發(fā)病的危險(xiǎn)因素。1943年Bittner報(bào)道了小鼠乳腺腫瘤病毒（mouse mammary tumor virus， MMTV）導(dǎo)致小鼠乳腺癌發(fā)生，這激起了人們的靈感，推測(cè)病毒也可能是人乳腺癌的致病原因。在侵襲性乳腺癌中通過(guò)全基因組測(cè)序鑒定了40多種不同的病毒[3]，已知這些病毒中只有四種在乳腺癌中具有潛在的致癌作用，分別為MMTV、牛白血病病毒（bovine leukemia virus， BLV）、EB病毒及致癌性高危型人乳頭瘤病毒（human papilloma virus， HPV）。Lawson等[4]的研究證實(shí)在27例乳腺良性病變手術(shù)患者的樣本中檢測(cè)出上述四種病毒以單獨(dú)或不同的組合方式存在，在隨后的11年間這些患者發(fā)生乳腺癌后組織樣本仍檢測(cè)出同種的病毒。

1 HPV在人乳腺組織中的作用

大量證據(jù)表明高風(fēng)險(xiǎn)HPV在乳腺癌中具有潛在作用。在多個(gè)國(guó)家進(jìn)行的22項(xiàng)研究的薈萃分析表明，高風(fēng)險(xiǎn)HPV感染與乳腺癌風(fēng)險(xiǎn)增加相關(guān)，總體優(yōu)勢(shì)比為5.4，各國(guó)之間存在顯著差異。在來(lái)自17個(gè)國(guó)家和4大洲進(jìn)行的30項(xiàng)研究中，已經(jīng)在乳腺癌中發(fā)現(xiàn)了癌癥高風(fēng)險(xiǎn)HPV，其中最常見(jiàn)的是HPV33型，占14%，但主要局限于亞洲女性，其次是HPV18（7%）和HPV16（7%）。在10項(xiàng)病例對(duì)照研究中，乳腺癌中HPV的患病率顯著高于對(duì)照組（OR=3.60）?；加蠬PV相關(guān)子宮頸腫瘤的女性可以在以后發(fā)展為HPV相關(guān)的乳腺癌。一些研究提出不能證實(shí)HPVs與乳腺癌的關(guān)系，原因：（1）由于人體免疫缺陷感染或器官移植治療后的免疫功能低下患者，雖然這些患者中HPV相關(guān)的子宮頸癌和頭頸癌的患病率增加了2～6倍，但是乳腺癌的患病率并沒(méi)有增加[5]。（2）與子宮頸癌中的HPV相比，乳腺癌中HPV病毒載量極低（約低2 000倍），這使得HPV與人乳腺癌關(guān)系的爭(zhēng)議不斷[6-8]。

確定高風(fēng)險(xiǎn)HPV在乳腺癌中具有重要因果作用的證據(jù)包括（1）HPV可使乳腺上皮細(xì)胞永生化，及出現(xiàn)形態(tài)學(xué)改變發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。（2）HPV位于乳腺癌細(xì)胞核中。（3）HPVE6癌蛋白已在乳腺癌中被鑒定出。（4）高危HPVs已經(jīng)在乳腺癌細(xì)胞培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn)致癌能力：①病毒可以感染人乳腺上皮細(xì)胞;②病毒可轉(zhuǎn)化人類(lèi)乳腺上皮細(xì)胞，出現(xiàn)上皮細(xì)胞形態(tài)學(xué)的改變;③在動(dòng)物模型中病毒可誘發(fā)惡性腫瘤;④HPV陽(yáng)性乳腺癌患者在年輕人中比老年女性更常見(jiàn)，這一觀察結(jié)果與HPV在性活躍的年輕女性中的性傳播有關(guān);⑤在乳腺癌患者中檢測(cè)到的病毒標(biāo)志物水平高于正常對(duì)照組;⑥HPV陽(yáng)性的挖空細(xì)胞已在乳腺癌中被鑒定出來(lái);⑦已經(jīng)證實(shí)在發(fā)展為HPV陽(yáng)性乳腺癌之前，這些患者的正?；蛄夹匀橄俳M織中存在同型高風(fēng)險(xiǎn)HPV;⑧高風(fēng)險(xiǎn)HPV表達(dá)具有生物學(xué)活性的E6、E7病毒癌基因蛋白。

Lawson等[8]用癌癥基因組圖譜（TCGA）RNA-seq數(shù)據(jù)分析鑒定乳腺癌中的HPVRNA序列。基于聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）回顧性分析來(lái)自澳大利亞原乳腺活檢良性病變女性檔案標(biāo)本中有HPV，隨后發(fā)生乳腺癌的病例。通過(guò)免疫組織化學(xué)（IHC）檢測(cè)致癌蛋白HPV E7的表達(dá)評(píng)估乳腺癌中的HPV是否具有生物學(xué)活性。結(jié)果顯示，在TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)的855例乳腺癌患者樣本中發(fā)現(xiàn)了30例（3.5%）低危和20例（2.3%）高危型HPV，高危型包括HPV18（48%）、HPV113（24%）、HPV16（10%）、HPV52（10%）。來(lái)自PCR隊(duì)列研究的數(shù)據(jù)表明，HPV18型是乳腺癌標(biāo)本中最常見(jiàn)的類(lèi)型（占40例乳腺癌標(biāo)本中的55.0%），其次是HPV16（13.0%）。在15例乳腺良性病變患者和其隨后發(fā)生的乳腺癌中均鑒定出同型的HPV，在72%的良性乳腺標(biāo)本和59%的浸潤(rùn)性乳腺癌標(biāo)本中鑒定出HPVE7蛋白，這證實(shí)了：（1）通過(guò)NGS和PCR確認(rèn)乳腺癌中存在高風(fēng)險(xiǎn)HPV基因序列;（2）同一患者中良性乳腺標(biāo)本與其隨后發(fā)生的乳腺癌中檢測(cè)出同型高風(fēng)險(xiǎn)HPV，兩者之間有相關(guān)性;（3）乳腺癌中的HPV可能具有生物學(xué)活性（如HPV DNA轉(zhuǎn)錄為RNA并表達(dá)HPV E6、E7蛋白）;（4）HPV致癌影響可能是乳腺癌發(fā)生的早期事件。Lawson等[9]采用免疫組織化學(xué)方法觀察32例澳大利亞患者良性和隨后發(fā)生乳腺癌標(biāo)本中的HPV E7致癌蛋白表達(dá)，良性標(biāo)本中的23例（72%）、乳腺癌標(biāo)本中的20例（62.5%）可檢測(cè)出HPV E7癌蛋白，其中23例HPV E7癌蛋白陽(yáng)性的良性標(biāo)本對(duì)應(yīng)的乳腺癌標(biāo)本僅有7例（30%）沒(méi)有HPV E7蛋白表達(dá)，提出HPV致癌影響發(fā)生在乳腺癌發(fā)生的早期階段。

2016年，Lawson等[10]報(bào)道采用聚合酶鏈反應(yīng)和免疫組化技術(shù)對(duì)同一患者的子宮頸癌前病變和隨后發(fā)生的乳腺癌進(jìn)行回顧性研究，在28例患者中，13例（46%）子宮頸和乳腺標(biāo)本均發(fā)現(xiàn)相同的高風(fēng)險(xiǎn)HPV類(lèi)型，以HPV18型最為常見(jiàn)，證實(shí)高危HPV相關(guān)的宮頸癌前病變的婦女可能在幾年后發(fā)展為HPV相關(guān)的乳腺癌。這些患者在子宮頸癌前病變后被診斷患有乳腺癌的平均年齡為51歲，而其他乳腺癌患者的平均年齡為60歲，研究結(jié)果表明，HPV相關(guān)子宮頸癌前病變后發(fā)生HPV相關(guān)乳腺癌在年輕女性中更為常見(jiàn)。Cavalcante等[11]采用分子檢測(cè)技術(shù)調(diào)查巴西東北地區(qū)婦女乳腺癌和正常乳腺組織樣本中人乳頭瘤病毒DNA和基因型的存在情況，檢測(cè)103例乳腺癌和95例正常乳腺樣本，結(jié)果顯示：乳腺癌51例（49.5%）和正常乳腺15例（15.8%）檢測(cè)到人乳頭瘤病毒DNA（P<0.000 1）。在所有樣本中，15.2%的人乳頭瘤病毒基因型6和11。認(rèn)為乳腺癌樣本中人乳頭瘤病毒感染的高頻率表明這種病毒在乳腺癌發(fā)生中的潛在作用。任占平等[12]采用免疫組化技術(shù)，檢測(cè)53例女性乳癌中HPV16/18E6蛋白，結(jié)果陽(yáng)性率為56.6%（30/53），正常組陽(yáng)性率15.0%（3/20）。2014年，任占平等[13]采用原位雜交和免疫組織化學(xué)法檢測(cè)30例正常乳腺組織、30例乳腺腺病、30例乳腺非典型導(dǎo)管增生、20例乳腺導(dǎo)管原位癌和68例乳腺癌組織標(biāo)本中HPV16/18DNA和p53、RB、MCM7蛋白的表達(dá)，結(jié)果顯示乳腺癌組織中HPV16/18DNA的陽(yáng)性率為58.8%，明顯高于正常乳腺、乳腺腺病和乳腺非典型導(dǎo)管增生組。在乳腺非典型導(dǎo)管增生、乳腺導(dǎo)管原位癌和乳腺癌組織中HPV16/18DNA與p53和RB蛋白的表達(dá)均呈負(fù)相關(guān)（P<0.05），而乳腺癌組中HPV16/18DNA與MCM7蛋白表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.750，P<0.05）。癌組中組織學(xué)G2、G3級(jí)，pTNMⅡ、Ⅲ期以及有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中HPV16/18DNA和MCM7蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率均顯著高于組織學(xué)G1級(jí)和pTNMⅠ期以及無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（P<0.05），與之相反，p53和RB蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率則顯著降低（P<0.05）。提出HPV16/18感染通過(guò)對(duì)p53、RB和MCM7蛋白表達(dá)調(diào)控的影響可能在高危型HPV感染后乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移進(jìn)程中起到重要的作用[13-14]。

與此相反，Vernet-Tomas等[15]所使用石蠟包埋樣品，采用SPF-10廣譜引物，進(jìn)行脫氧核糖核酸酶免疫分析和逆行探針基因分型技術(shù)，結(jié)果：在78個(gè)樣本（2個(gè)良性腫瘤和76個(gè)不同的組織學(xué)亞型的乳腺癌）未能檢測(cè)到HPV。Sara等[16]檢測(cè)193名被診斷患有乳腺癌的丹麥女性（1998-2012）。在乳腺癌之前，有93名女性患有宮頸上皮內(nèi)瘤變3級(jí)或更差（CIN3+）。對(duì)照組為100名未事先發(fā)生子宮頸發(fā)育不良的女性。使用SPF10 PCR-DEIA-LiPA25和內(nèi)部半Q-PCR測(cè)定進(jìn)行HPV測(cè)試和基因分型，結(jié)果在乳腺癌中HPV的總體患病率為1.55%[95%CI（0.32，4.48）]和0.52%[95%CI（0.01，2.85）]。病例和對(duì)照組之間的HPV患病率沒(méi)有差異。HPV陽(yáng)性者患乳腺癌的患病率非常低，表明HPV與乳腺癌之間沒(méi)有病因?qū)W相關(guān)性。

此外，一些研究提出，在免疫受損患者（例如器官移植免疫抑制或人類(lèi)免疫缺陷病毒的患者）中，HPV陽(yáng)性乳腺癌的患病率并沒(méi)有增加。如果HPV在乳腺癌中具有因果作用，則應(yīng)當(dāng)發(fā)生預(yù)期乳腺癌的患病率的增加，因?yàn)檫@些免疫功能低下患者中其他HPV相關(guān)癌癥（如子宮頸癌）的患病率較非免疫功能低下者高出2～6倍。一些研究解釋認(rèn)為，與子宮頸癌相比，乳腺癌中存在不同的HPV致癌機(jī)制。（1）HPV可能存在于乳腺癌中，但大部分不是致癌的，因此不受免疫抑制的影響。（2）HPVs在乳腺癌中的致癌機(jī)制可能與子宮頸癌不同，其作用可能發(fā)生在早期階段，可能不受免疫抑制的影響。在子宮頸癌相關(guān)的HPV機(jī)制中，主要涉及HPV E6和E7癌蛋白的影響，其通過(guò)結(jié)合和抑制p53和p110RB腫瘤抑制基因協(xié)同以破壞細(xì)胞周期調(diào)節(jié)，抑制細(xì)胞凋亡和激活細(xì)胞周期進(jìn)程。文獻(xiàn)[17]提出HPV在乳腺癌中的致病機(jī)制與子宮頸癌和頭頸癌中的HPV不同，并證明（1）具有高ER蛋白的乳腺癌細(xì)胞與高HPV感染顯著相關(guān);（2）HPV似乎激活癌癥基因組DNA（gDNA）脫氨酶APOBEC3B導(dǎo)致基因組不穩(wěn)定，異常APOBEC3B蛋白表達(dá)與乳腺癌風(fēng)險(xiǎn)增加有關(guān)。這些致癌影響發(fā)生在乳腺癌發(fā)生多步驟，多因素的早期階段。此外，Moody等[18]表明，基因組不穩(wěn)定性的誘導(dǎo)是HPV誘導(dǎo)的癌癥的早期事件，發(fā)生在病毒整合到宿主染色體之前。這些早期的致癌機(jī)制可能不會(huì)在免疫系統(tǒng)的后期受到影響。文獻(xiàn)[9]提出，與同一患者后續(xù)發(fā)生乳腺癌細(xì)胞核中的HPV E7表達(dá)相比，其良性乳腺細(xì)胞核中HPV E7蛋白表達(dá)水平可能更高。這些結(jié)果支持HPV可能參與乳腺癌發(fā)生早期階段的假設(shè)。有作者提出HPV在腫瘤的發(fā)生中僅僅起到“觸發(fā)和脫離”的機(jī)制。

2 HPV感染所致的炎癥激活TLRs/NF-κB信號(hào)通路與乳腺癌

腫瘤的發(fā)生是一個(gè)多基因參與、多步驟發(fā)生的過(guò)程。雖然HPV E6和E7癌蛋白已經(jīng)被證實(shí)在乳腺癌中，然而這些癌蛋白的轉(zhuǎn)錄水平很低，這表明HPVs在乳腺癌中的任何影響都可能是間接的。HPV在乳腺癌發(fā)生和發(fā)展中的作用可以從兩個(gè)方面進(jìn)行討論，（1）直接作用：病毒蛋白與細(xì)胞關(guān)鍵調(diào)節(jié)蛋白的相互作用，此作用點(diǎn)僅僅處于細(xì)胞周期調(diào)控初期階段，即通過(guò)靶向p53和RB，HPV的癌蛋白如E6和E7可以破壞細(xì)胞周期，導(dǎo)致p53滅活和pRb磷酸化，使E2F蛋白擺脫pRb的束縛進(jìn)而活化核因子-κB（nuclear factor kappa B， NF-κB）調(diào)控因子，促進(jìn)更多的癌基因轉(zhuǎn)錄，使細(xì)胞進(jìn)入S期，引起腫瘤細(xì)胞過(guò)度增殖。（2）間接作用：一些流行病學(xué)和臨床研究表明，導(dǎo)致持續(xù)感染的某些病原體與癌癥患病率密切相關(guān)，炎癥已被證明與乳腺癌的發(fā)展有關(guān)，HPV可以由于其某些特征（包括產(chǎn)生致癌蛋白）而誘導(dǎo)炎癥。由持續(xù)病毒感染引起的慢性炎癥可通過(guò)TLRs途徑激活不同的細(xì)胞因子和活性氧氮物種（RONS）介導(dǎo)，從而抑制抗腫瘤免疫，導(dǎo)致組織重塑，生長(zhǎng)因??子的誘導(dǎo)和血管生成，促進(jìn)轉(zhuǎn)移和腫瘤進(jìn)展[19-20]。

Toll樣受體（Toll-like receptors， TLRs）是先天免疫系統(tǒng)的重要組成部分，可保護(hù)宿主免受細(xì)菌和病毒感染。新出現(xiàn)的證據(jù)表明，TLRs通過(guò)病原體相關(guān)分子模式（PAMPs）以及內(nèi)源性分子激活，使得腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor alpha， TNF-α）和白細(xì)胞介素-1（IL-1）被釋放到腫瘤環(huán)境中，并反過(guò)來(lái)激活NF-κB，導(dǎo)致持續(xù)的炎癥細(xì)胞反應(yīng)和腫瘤微環(huán)境中的慢性炎癥。TLRs介導(dǎo)的NF-κB和干擾素調(diào)節(jié)因子（interferon regulatory factors， IRFs）的激活是將炎癥與癌癥聯(lián)系起來(lái)的重要環(huán)節(jié)。此外，NF-κB還控制參與細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、抗凋亡、血管生成、組織侵襲和轉(zhuǎn)移的基因的表達(dá)。通常，NF-κB通過(guò)增加c-myc和細(xì)胞周期蛋白D1、細(xì)胞周期蛋白D2、細(xì)胞周期蛋白D3、細(xì)胞周期蛋白E和CDK2來(lái)調(diào)節(jié)細(xì)胞周期進(jìn)程，通過(guò)產(chǎn)生生長(zhǎng)因子（包括IL-2、IL-6、GM-CSF和CD40L）促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)，通過(guò)調(diào)節(jié)抗凋亡蛋白cIAPs、c-FLP和Bcl-2家族成員來(lái)抑制細(xì)胞凋亡。NF-κB活化可以增加腫瘤中的血管生成，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子等血管生成因子的上調(diào)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。因此，TLR激活的炎癥反應(yīng)促進(jìn)腫瘤從腫瘤發(fā)生到侵襲和轉(zhuǎn)移的所有階段[21-22]。研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌、子宮頸癌、肺癌、前列腺癌等腫瘤細(xì)胞均有TLR的高表達(dá)。最近的報(bào)告表明TLRs/NF-κB信號(hào)通路在乳腺癌發(fā)病機(jī)制和復(fù)發(fā)中起著的重要作用[23]。

2010年，González-Reyes等[24]通過(guò)免疫組織化學(xué)、蛋白質(zhì)印跡和實(shí)時(shí)PCR技術(shù)分析74例乳腺癌患者腫瘤中TLR3、TLR4和TLR9的表達(dá)水平。結(jié)果顯示：復(fù)發(fā)癌樣本中TLR3、TLR4和TLR9的mRNA水平顯著增加。腫瘤細(xì)胞中特別是TLR4和TLR9高水平表達(dá)，具有TLR3高表達(dá)腫瘤或單核炎性細(xì)胞具有高TLR4表達(dá)的腫瘤與更高的轉(zhuǎn)移概率顯著相關(guān)。提出TLR3、TLR4和TLR9的表達(dá)水平作為具有臨床意義的乳腺癌侵襲性指標(biāo)，TLR可代表乳腺癌的治療的新靶標(biāo)。Abdelhabib等[25]對(duì)沙特阿拉伯人群中127名乳腺癌患者和117名對(duì)照組研究了四種TLR4基因多態(tài)性（rs2770150、rs10759931、rs10759932和rs4986790），同時(shí)通過(guò)使用特異性抗TLR4抗體的免疫組織化學(xué)，在組織微陣列的70個(gè)臨床乳腺樣品組中測(cè)定乳腺癌和匹配的正常乳腺組織中TLR4蛋白的表達(dá)。結(jié)果表明，與正常組相比，絕經(jīng)后乳腺癌患者雌激素受體（ER）陰性組中TLR4的表達(dá)增加，與對(duì)照組（26.7%）相比，癌組中單核苷酸多態(tài)性rs10759931的G等位基因頻率顯著高于對(duì)照組（36.7%），表明這種多態(tài)性與該民族人口乳腺癌的發(fā)展密切相關(guān)。此外，TLR4多態(tài)性rs2770150與48歲以上患者的乳腺癌高度相關(guān)。TLR4基因多態(tài)性rs4986790與ER陰性組腫瘤相關(guān)。提出TLR4基因表達(dá)的變異可能影響乳腺癌的發(fā)展，其次是TLR4基因多態(tài)性與ER狀態(tài)密切相關(guān)，為更好地理解TLR4基因多態(tài)性在乳腺腫瘤發(fā)展中的意義以及遴選腫瘤生物標(biāo)志物提供了支持。Jia等[26]的研究證實(shí)，TLR3還通過(guò)共激活β-catenin和NF-κB信號(hào)傳導(dǎo)促進(jìn)乳腺癌干細(xì)胞（CSCs）的誘導(dǎo)。進(jìn)一步鑒定了一種可以同時(shí)抑制β-連環(huán)蛋白和NF-κB信號(hào)的小分子豆蔻明，該豆蔻明能夠在體外有效地消除TLR3活化增強(qiáng)的CSC表型，并成功控制人乳腺癌異種移植物中TLR3刺激誘導(dǎo)的腫瘤生長(zhǎng)。這些發(fā)現(xiàn)可為開(kāi)發(fā)新策略奠定基礎(chǔ)，以防止在癌癥治療期間誘導(dǎo)CSC[27]。Berger等[28]研究TLR9在乳腺癌和卵巢癌細(xì)胞中的表達(dá)和分子活性。證實(shí)轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者（n=18）血清中的低甲基化DNA水平高于同齡無(wú)腫瘤婦女（n=18），在乳腺癌細(xì)胞系和組織中，TLR9mRNA的表達(dá)與ER狀態(tài)相關(guān)（n=124，P=0.005）。在乳腺癌和卵巢癌標(biāo)本中，表達(dá)與腫瘤分級(jí)的增加相關(guān)。福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）乳腺癌組織的免疫組化分析顯示激素受體（HR）陰性標(biāo)本中TLR9蛋白表達(dá)較高（n=116，P<0.001）。通過(guò)體外劃痕試驗(yàn)，觀察到轉(zhuǎn)染過(guò)表達(dá)TLR9的細(xì)胞系在受到CPG DNA刺激時(shí)表現(xiàn)出增加的細(xì)胞遷移。在評(píng)估乳腺癌中TLR9的分子活性時(shí)，發(fā)現(xiàn)NF-κB活性與TLR9 mRNA表達(dá)顯著正相關(guān)（r=0.7，P<0.001），提出在乳腺癌和卵巢癌中TLR9的表達(dá)與低分化有關(guān)，TLR9的過(guò)度表達(dá)和低甲基化DNA的刺激增強(qiáng)了癌細(xì)胞株的遷移能力。

NF-κB最早于B淋巴細(xì)胞的細(xì)胞核中提取的蛋白， 其功能具有多樣性可調(diào)控細(xì)胞增殖、分化、凋亡及惡性轉(zhuǎn)化。在參與癌癥相關(guān)炎癥的全部分子參與者中，眾所周知NF-κB是TLR激活反應(yīng)的關(guān)鍵協(xié)調(diào)者。近年認(rèn)為NF-κB與腫瘤的發(fā)生和癌癥進(jìn)展有直接關(guān)聯(lián)。王玲等[29]的研究證實(shí)Celeeoxib可以通過(guò)下調(diào)NF-κB/p65蛋白的表達(dá)從而阻斷NF-κB信號(hào)途徑，抑制人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞增殖，促進(jìn)其凋亡。Khodabandehlou等[30]通過(guò)聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測(cè)72例乳腺癌患者和31例健康對(duì)照者乳腺標(biāo)本中HPV的存在，并對(duì)陽(yáng)性病例進(jìn)行基因分型。用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA和實(shí)時(shí)PCR技術(shù)）測(cè)量抑癌基因的表達(dá)水平，如p53、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤（RB）、乳腺癌、卵巢癌易感基因（BRCA1、BRCA2）和炎性細(xì)胞因子包括腫瘤壞死因子α（TNF-α）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（TGF-β）、NF-κB和不同白細(xì)胞介素[ILs]（IL-1、IL6和IL-17）水平。結(jié)果證實(shí)在48.6%的乳腺癌樣本中檢測(cè)到HPVDNA，而對(duì)照組中HPV陽(yáng)性僅為16.1%。HPV的陽(yáng)性與炎性細(xì)胞因子（IL-1、IL-6、IL-17、TGF-β、TNF-α和NF-κB）水平和腫瘤進(jìn)展增加有關(guān)。乳腺癌HPV陽(yáng)性病例組中不同炎癥因子（包括IL-1、IL-6、IL-17、TGF-β、TNF-α、NF-κB和RONS）的表達(dá)水平與對(duì)照組樣本和HPV陰性乳腺癌組在統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異顯著。

3 小結(jié)

綜上所述，慢性炎癥可以通過(guò)病毒致癌微生物途徑在腫瘤微環(huán)境中啟動(dòng)，激活TLRs/NF-κB信號(hào)通路有助于腫瘤進(jìn)展，進(jìn)一步開(kāi)展聯(lián)合檢測(cè)人乳腺癌、癌前病變和良性病變以及正常乳腺組織中高危型HPV16/18癌病毒蛋白和TLR4、NF-κB蛋白的表達(dá)以探討高危型HPV感染與人乳腺癌發(fā)生、發(fā)展之間的關(guān)系有助于筆者進(jìn)一步了解HPV感染導(dǎo)致的炎癥與人乳腺癌病因?qū)W之間的關(guān)系。對(duì)TLR信號(hào)通路中關(guān)鍵蛋白的基礎(chǔ)研究可能會(huì)對(duì)預(yù)防乳腺腫瘤的發(fā)生發(fā)展提供幫助。以TLR信號(hào)傳導(dǎo)途徑為靶點(diǎn)的治療方法可與新的或現(xiàn)有的化學(xué)療法、放射療法或免疫療法等方法聯(lián)合使用以治療乳腺癌。針對(duì)多種TLR的未來(lái)研究可能會(huì)為藥物開(kāi)發(fā)和治療乳腺癌提供更有效的治療靶點(diǎn)。

參考文獻(xiàn)

[1] Ferlay J，Soerjomataram I，Dikshit R，et al.Cancer incidence and mortality worldwide： Sources， methods and major patterns in GLOBOCAN 2012[J/OL].Int J Cancer，2015，136（5）：E359-E386.

[2]李賀，鄭榮壽，張思維，等.2014年中國(guó)女性乳腺癌發(fā)病與死亡分析[J].中華腫瘤雜志，2018，40（3）：166-171.

[3] Kenji O，Koji I，Misako Y，et al.In Vivo and In Vitro Studies Suggest a Possible Involvement of HPV Infection in the Early Stage of Breast Carcinogenesis via APOBEC3B Induction[J].PLoS One，2014，9（5）：e97787.

[4] Lawson J S，Glenn W K.Multiple oncogenic viruses are present in human breast tissues before development of virus associated breast cancer[J].Infect Agent Cancer，2017，12（1）：55.

[5] Grulich A E，Vajdic C M.The epidemiology of cancers in human immunodeficiency virus infection and after organ transplantation[J].Semin Oncol，2015，42（2）：247-257.

[6] Bae J M，Kim E H.Human papillomavirus infection and risk of breast cancer： a meta-analysis of case-control studies[J].Infect Agent Cancer，2016，11（1）：14.

[7] Herrera-Romano L，F(xiàn)ernández-Tamayo N，Gómez-Conde E，et al.Absence of human papillomavirus sequences in epithelial breast cancer in a Mexican female population[J].Med Oncol，2012，29（3）：1515-1517.

[8] Lawson J S，Glenn W K，Da Ria S，et al.Human Papilloma Viruses and Breast Cancer[J].Front Oncol，2015，5：277.

[9] Lawson J S，Ngan C，Clay R，et al.Early Human Papilloma Virus （HPV） Oncogenic Influences in Breast Cancer[J].Breast Cancer （Auckl），2015，9：93-97.

[10] Lawson J S，Glenn W K，Daria S，et al.Human Papilloma Virus Identification in Breast Cancer Patients with Previous Cervical Neoplasia[J].Front Oncol，2016，5：298.

[11] Cavalcante J R，Pinheiro L G P，Almeida P R C，et al.Association of breast cancer with human papillomavirus （HPV） infection in Northeast Brazil： molecular evidence[J/OL].Clinics （Sao Paulo），2018，73：e465.

[12]任占平，黃健輝，石喆，等.HPV16、18 E6蛋白在乳腺癌組織中的表達(dá)[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，1999，15（5）：425-426.

[13]任占平，石喆，張芫，等.HPV16 E7、RB和MCM7蛋白在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織中的表達(dá)及意義[J].廣東醫(yī)學(xué)，2014，35（7）：1033-1036.

[14]任占平，石喆，戴文斌，等.HPV16/18DNA和p53、RB、MCM7蛋白在乳腺癌中的表達(dá)及意義[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2014，22（11）：2606-2609.

[15] Vernet-Tomas M，Mena M，Alemany L，et al.Human papillomavirus and breast cancer： no evidence of association in a Spanish set of cases[J].Anticancer Res，2015，35（2）：851-856.

[16] Sara B，Jan B，Torben S，et al.Evidence of No Association Between Human Papillomavirus and Breast Cancer[J].Front Oncol，2018，8：209.

[17] Vieira V C，Leonard B，White E A，et al.Human Papillomavirus E6 Triggers Upregulation of the Antiviral and Cancer Genomic DNA Deaminase APOBEC3B[J].Mbio，2014，5（6）：2234.

[18] Moody C A，Laimins L A.Human papillomavirus oncoproteins： pathways to transformation[J].Nat Rev Cancer，2010，10（8）：550-560.

[19] Prete A D，Allavena P，Santoro G，et al.Molecular pathways in cancer-related inflammation[J].Biochem Med （Zagreb），2011，21（3）：264-275.

[20] Fernandes J V，F(xiàn)ernandes T A A M，Azevedo J C V，et al.Link between chronic inflammation and human papillomavirus-induced carcinogenesis （Review）[J].Oncol Lett，2015，9（3）：1015-1026.

[21] Kawai T，Akira S.The role of pattern-recognition receptors in innate immunity： update on Toll-like receptors[J].Nat Immunol，2010，11（5）：373-384.

[22] Conforti R，Ma Y，Morel Y，et al.Opposing effects of toll-like receptor（TLR3） signaling in tumors can be therapeutically uncoupled to optimize the anticancer efficacy of TLR3 ligands[J].Cancer Res，2010，70（2）：490-500.

[23] Bhatelia K，Singh K，Singh R.TLRs： Linking inflammation and breast cancer[J].Cell Signal，2014，26（11）：2350-2357.

[24] González-Reyes S，Marín L，González L，et al.Study of TLR3， TLR4 and TLR9 in breast carcinomas and their association with metastasis[J].BMC Cancer，2010，10（1）：665.

[25] Abdelhabib S，Maroua J，Reddy P N，et al.Toll-like receptor-4 as a predictor of clinical outcomes of estrogen receptor-negative breast cancer in Saudi women[J].Onco Targets Ther，2017，10：1207-1216.

[26] Jia D，Wang L.The other face of TLR3： A driving force of breast cancer stem cells[J].Mol Cell Oncol，2015，2（4）：e981443.

[27] Jia D，Yang W，Li L，et al.β-Catenin and NF-κB co-activation triggered by TLR3 stimulation facilitates stem cell-like phenotypes in breast cancer[J].Cell death and differentiation，2014，22（2）：298-310.

[28] Berger R，F(xiàn)iegl H，Goebel G，et al.Toll-like receptor 9 expression in breast and ovarian cancer is associated with poorly differentiated tumors[J].Cancer Sci，2010，101（4）：1059-1066.

[29]王玲，劉麗宏，單保恩，等.Celecoxib下調(diào)NF-kB信號(hào)通路促進(jìn)人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞凋亡的體外研究[J].癌癥，2009，28（6）：569-574.

[30] Khodabandehlou N，Mostafaei S，Etemadi A，et al.Human papilloma virus and breast cancer： The role of inflammation and viral expressed proteins[J].BMC Cancer，2019，19（1）：61.

（收稿日期：2021-01-06） （本文編輯：姬思雨）