施靜　周春龍　張海霞　歐雪峰　曾錦婷　張燕　孔秀平

【摘要】 目的：了解不同臨床特征乳腺癌患者血清中血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子（VEGF）、VitD、鐵蛋白（SF）、趨化因子20（CCL20）及結(jié)締組織生長(zhǎng)因子（CTGF）水平表達(dá)情況，并探討其臨床意義。方法：選擇2018年7月-2020年4月在深圳市寶安區(qū)福永人民醫(yī)院和龍華區(qū)人民醫(yī)院婦產(chǎn)科確診為乳腺癌的103例患者作為乳腺癌組，89例乳腺良性腫瘤患者作為乳腺良性腫瘤組，同時(shí)選取120名健康體檢者作為對(duì)照組。分別比較三組血清中VEGF、VitD、SF、CCL20及CTGF水平;比較乳腺癌組中不同臨床特征者VEGF、VitD、SF、CCL20及CTGF水平，并分析各指標(biāo)間的相關(guān)性。結(jié)果：乳腺癌組血清中VEGF、SF、CCL20及CTGF水平均高于乳腺良性腫瘤組和對(duì)照組，而VitD水平明顯低于乳腺良性腫瘤組和對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。乳腺良性腫瘤組SF和CTGF水平均高于對(duì)照組（P<0.05）;Ⅲ、Ⅳ期和癌瘤長(zhǎng)徑>5 cm、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及中、低度組織分化的乳腺癌患者血清中VEGF、SF、CCL20及CTGF水平明顯更高，而VitD水平更低（P<0.05）。乳腺癌患者血清中VEGF、SF、CCL20及CTGF水平兩兩之間均呈正相關(guān)，而VitD水平與各指標(biāo)均呈負(fù)相關(guān)（P<0.05）。結(jié)論：乳腺癌患者血清中VEGF、SF、CCL20及CTGF水平明顯升高，而VitD水平明顯降低，且與乳腺癌的臨床分期、癌瘤長(zhǎng)徑、是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及組織分化嚴(yán)重程度有關(guān)。因此，加強(qiáng)VEGF、VitD、SF、CCL20及CTGF水平檢測(cè)對(duì)乳腺癌的早期診斷及不同臨床特征分析具有一定的參考價(jià)值。

【關(guān)鍵詞】 乳腺癌 血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子 VitD 鐵蛋白 趨化因子20 結(jié)締組織生長(zhǎng)因子

[Abstract] Objective： To investigate the expression levels of vascular endothelial cell growth factor （VEGF）， VitD， ferritin （SF）， chemokine 20 （CCL20） and connective tissue growth factor （CTGF） in serum of breast cancer patients with different clinical characteristics， and to explore their clinical significance. Method： A total of 103 patients diagnosed with breast cancer in the department of obstetrics and gynecology of Shenzhen Baoan District Fuyong Peoples Hospital and Longhua District Peoples Hospital from July 2018 to April 2020 were selected as the breast cancer group， and 89 patients with benign breast tumor were selected as the breast cancer group. Meanwhile， 120 healthy subjects were selected as the control group. The levels of VEGF， VitD， SF， CCL20 and CTGF in serum of the three groups were compared. The levels of VEGF， VitD， SF， CCL20 and CTGF in breast cancer group with different clinical characteristics were compared， and the correlation among the indicators was analyzed. Result： The serum levels of VEGF， SF， CCL20 and CTGF in breast cancer group were higher than those in benign breast tumor group and control group， while the level of VitD was significantly lower than those in benign breast tumor group and control group， with statistical significance （P<0.05）. The levels of SF and CTGF in benign breast tumor group were higher than those in control group （P<0.05）. The serum levels of VEGF， SF， CCL20 and CTGF were significantly higher and the level of VitD was lower in the breast cancer patients with Ⅲ and Ⅳ stage， >5 cm tumor length and diameter， lymph node metastasis and moderate and low tissue differentiation （P<0.05）. The serum levels of VEGF， SF， CCL20 and CTGF in breast cancer patients were positively correlated with each other， while the level of VitD was negatively correlated with each index （P<0.05）. Conclusion： The levels of VEGF， SF， CCL20 and CTGF in serum of breast cancer patients are significantly increased， while the level of VitD is significantly decreased， which are related to the clinical stage of breast cancer， tumor length and diameter， lymph node metastasis and the severity of tissue differentiation. Therefore， strengthening the detection of VEGF， VitD， SF， CCL20 and CTGF levels have certain reference value for the early diagnosis of breast cancer and the analysis of different clinical characteristics.

[Key words] Breast cancer VEGF VitD SF CCL20 CTGF

First-authors address： Shenzhen Baoan District Fuyong Peoples Hospital， Shenzhen 518103， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2021.19.002

乳腺癌是臨床上目前最為常見(jiàn)的一種女性惡性腫瘤之一，其發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，且不斷年輕化，嚴(yán)重影響女性身心健康和生活質(zhì)量[1-3]。乳腺癌發(fā)病病因及機(jī)制目前尚未完全明確，有研究表明，乳腺癌發(fā)病可能與種族、年齡、遺傳、飲食結(jié)構(gòu)及激素水平等多種因素[4-5]。乳腺癌患者致死的主要原因是癌細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移，而癌細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移與腫瘤細(xì)胞的惡性增生、組織新生血管的形成、黏附、遷移及分泌蛋白降解基質(zhì)等多種因素的調(diào)控有關(guān)[6-8]。為此，本研究對(duì)與癌細(xì)胞的增殖、分化、新生血管生成、慢性炎癥及組織纖維化等有關(guān)的血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子（VEGF）、VitD、鐵蛋白（SF）、趨化因子20（CCL20）及結(jié)締組織生長(zhǎng)因子（CTGF）水平在乳腺癌患者中的表達(dá)情況及臨床意義進(jìn)行了探討，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年7月-2020年4月在深圳市寶安區(qū)福永人民醫(yī)院和龍華區(qū)人民醫(yī)院婦產(chǎn)科確診為乳腺癌的103例患者作為乳腺癌組，89例確診為乳腺良性腫瘤患者作為乳腺良性腫瘤組，另選取120名健康體檢者為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：女性;臨床資料完整;乳腺癌組與乳腺良性腫瘤組均經(jīng)臨床體征、影像學(xué)檢查及術(shù)后組織學(xué)活檢確診[9]，均為初次確診;未進(jìn)行放、化療及相關(guān)性治療;未服用VitD補(bǔ)充劑及鈣調(diào)節(jié)劑。排除標(biāo)準(zhǔn)：伴有心、腦、肝及腎等嚴(yán)重疾病者;出血性疾病者;伴有其他腫瘤者;精神疾病及不配合研究患者。所有患者及家屬均知情同意并簽署知情同意書，本研究已經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集及處理 清晨空腹抽取2份靜脈血，每份3～5 mL，室溫靜置30 min后離心分離血清及時(shí)檢測(cè)，不能及時(shí)檢測(cè)者置-20 ℃保存。冰凍標(biāo)本取出后須室溫放置30 min，待其完全復(fù)溶后才能再行檢測(cè)。

1.2.2 VEGF、VitD、SF、CCL20及CTGF水平檢

測(cè) VEGF、CCL20及CTGF水平采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA法）進(jìn)行檢測(cè)，VitD和SF水平分別采用電化學(xué)發(fā)光免疫法和免疫比濁法對(duì)進(jìn)行檢測(cè)。所有操作均嚴(yán)格按儀器及試劑說(shuō)明書進(jìn)行，確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和一致性。

1.3 觀察指標(biāo) （1）比較三組VEGF、VitD、SF、CCL20及CTGF水平。（2）比較乳腺癌組中不同臨床分期、不同癌瘤長(zhǎng)徑、是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及不同組織分化程度者的VEGF、VitD、SF、CCL20及CTGF水平。（3）分析乳腺癌患者血清中VEGF、SF、CCL20及CTGF各水平之間的相關(guān)性及VitD與各指標(biāo)的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 22.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用方差分析;計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗(yàn)。相關(guān)性采用Pearson相關(guān)系數(shù)分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組一般資料比較 乳腺癌組年齡29～62歲，平均（43.85±12.54）歲。臨床分期：Ⅰ、Ⅱ期72例，Ⅲ、Ⅳ期31例;癌瘤長(zhǎng)徑：>5 cm 27例，2～5 cm 37例，<2 cm 29例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移38例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移65例;高組織分化77例，中、低度組織分化26例。乳腺良性腫瘤組年齡28～60歲，平均（42.37±11.93）歲，對(duì)照組年齡27～63歲，平均（41.86±14.62）歲。三組年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

2.2 三組VEGF、VitD、SF、CCL20及CTGF水平比較 乳腺癌組VEGF、SF、CCL20及CTGF水平均高于乳腺良性腫瘤組和對(duì)照組，而VitD水平明顯低于乳腺良性腫瘤組和對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。乳腺良性腫瘤組SF和CTGF水平均高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=3.915 3、5.354 7，P<0.05），而VEGF、VitD、CCL20兩組間比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.884 4、1.206 4、0.526 1，P>0.05）。見(jiàn)表1。

2.3 乳腺癌組中不同臨床特征者VEGF、VitD、SF、CCL20及CTGF水平比較 Ⅲ、Ⅳ期和癌瘤長(zhǎng)徑>5 cm、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及中、低度組織分化的乳腺癌患者血清中VEGF、SF、CCL20及CTGF水平均明顯更高，而VitD水平更低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表2。

2.4 乳腺癌患者VEGF、SF、CCL20、CTGF及VitD水平之間的相關(guān)性分析 乳腺癌患者血清中VEGF、SF、CCL20及CTGF各水平之間均呈正相關(guān)，而VitD水平與各指標(biāo)水平之間均呈負(fù)相關(guān)（P<0.05），見(jiàn)表3。

3 討論

乳腺癌是女性高發(fā)、高度異質(zhì)的一種全身性惡性腫瘤，發(fā)病率高，居女性婦科惡性腫瘤的首位，嚴(yán)重威脅婦女身心健康甚至危及生命，是導(dǎo)致女性死亡的主要原因之一[10-11]。及早發(fā)現(xiàn)和早期確診乳腺癌患者，并及時(shí)采用有效的治療措施，是提高乳腺癌患者療效和術(shù)后生活質(zhì)量的關(guān)鍵。因此，探索乳腺癌、乳腺良性腫瘤及健康人群中某些生化指標(biāo)和/或免疫標(biāo)記物水平表達(dá)情況，對(duì)乳腺癌患者早發(fā)現(xiàn)、早確診和及時(shí)治療具有重要的臨床意義。

VEGF是由腫瘤細(xì)胞所分泌的一種分泌性二聚體糖蛋白，常高表達(dá)于各種腫瘤細(xì)胞中，與其受體結(jié)合后可刺激血管內(nèi)皮增生，從而導(dǎo)致新生血管不斷形成，為腫瘤細(xì)胞提供足夠的營(yíng)養(yǎng)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移。有研究表明，乳腺癌患者VEGF水平升高，且臨床分期越差，VEGF升高越明顯[11-13]。本研究結(jié)果顯示，乳腺癌患者VEGF水平明顯升高，且臨床分期越差、癌瘤長(zhǎng)徑>5 cm、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及組織中、低度分化的乳腺癌患者VEGF水平更高（P<0.05），與有關(guān)研究報(bào)道基本一致[11，13]，這表明VEGF可能與乳腺癌發(fā)生、發(fā)展、侵襲及轉(zhuǎn)移有密切相關(guān)。

VitD是一種脂溶性的類固醇衍生物，其除了具有調(diào)節(jié)血清鈣、磷水平相對(duì)穩(wěn)定和骨代謝生物活性外，還具有維持免疫、神經(jīng)及肌肉的正常功能。另外，VitD還可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、刺激細(xì)胞分化、抑制腫瘤增殖、調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)、抑制炎癥、侵襲、轉(zhuǎn)移及抗血管生成[14-15]。近年研究發(fā)現(xiàn)，25-（OH）D3與VitD受體（VDR）結(jié)合相互作用具有抗癌功能[16-17]。本研究結(jié)果顯示，乳腺癌患者血清中VitD水平明顯降低，且Ⅲ、Ⅳ期、癌瘤長(zhǎng)徑>5 cm、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及中、低度組織分化的乳腺癌患者VitD水平更低（P<0.05），這說(shuō)明乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展可能與體內(nèi)VitD水平降低有關(guān)，可能與VitD的缺乏導(dǎo)致T淋巴細(xì)胞細(xì)胞亞群數(shù)目及功能紊亂，使得機(jī)體的免疫功能下降，促進(jìn)乳腺癌的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)，具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究[17-18]。

SF是人體內(nèi)貯存鐵的一種可溶組織蛋白，主要參與機(jī)體的鐵代謝。有研究表明，惡性腫瘤能促進(jìn)SF異構(gòu)體的合成和分泌，從而導(dǎo)致血清SF水平顯著升高[6，10，19]。本研究結(jié)果顯示，乳腺癌患者血清中SF水平明顯升高（P<0.05），且升高幅度與乳腺癌患者臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、癌瘤長(zhǎng)徑及組織分化程度等密切相關(guān)，乳腺良性腫瘤組SF高于對(duì)照組（P<0.05），與文獻(xiàn)[6，10，19]報(bào)道一致，這表明高水平的SF可能與乳腺癌有關(guān)，輕度升高時(shí)要注意排除乳腺良性腫瘤。

趨化因子是一種分泌性小分子蛋白，可通過(guò)聚集內(nèi)皮細(xì)胞、促進(jìn)血管發(fā)生及促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲性等方式促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖及轉(zhuǎn)移，與炎癥和腫瘤疾病的發(fā)生、發(fā)展有著密切聯(lián)系。其中CCL20是趨化因子大家族中的一員，可趨化淋巴和中性粒細(xì)胞，與多種惡性腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移有密切相關(guān)[20-21]。本研究結(jié)果顯示，乳腺癌組血清中CCL20水平明顯高于乳腺良性腫瘤和對(duì)照組（P<0.05），且與乳腺癌患者高風(fēng)險(xiǎn)的臨床特征有關(guān)，臨床特征越差，CCL20水平升高越明顯，表明乳腺癌患者可能容易造成炎癥反應(yīng)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖及遷移，加速乳腺癌的發(fā)展進(jìn)程。

CTGF是一種細(xì)胞間基質(zhì)蛋白，具有刺激成纖維細(xì)胞增殖與分化、介導(dǎo)多種腫瘤細(xì)胞黏附、遷移及凋亡，促進(jìn)新生血管的生成及組織纖維化，有研究結(jié)果表明，CTGF與多種惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展有密切關(guān)系[22-23]。本研究結(jié)果顯示，乳腺癌患者血清中CTGF水平明顯高于乳腺良性腫瘤組和對(duì)照組，且乳腺良性腫瘤組高于對(duì)照組（P<0.05），這表明CTGF可能與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展及組織纖維化有關(guān)，但輕度升高時(shí)要結(jié)合其他指標(biāo)進(jìn)行綜合性判斷，注意與乳腺良性腫瘤進(jìn)行鑒別。

綜上所述，乳腺癌患者容易新生成腫瘤血管，引發(fā)炎癥，出現(xiàn)纖維化，為腫瘤細(xì)胞的增殖及遷移創(chuàng)造條件。因此，加強(qiáng)乳腺癌患者血清中VEGF、VitD、SF、CCL20及CTGF水平檢測(cè)，對(duì)及時(shí)篩查、早期診斷、判斷病情和組織分化程度及有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有一定的臨床意義，值得臨床推廣應(yīng)用。

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（收稿日期：2020-08-27） （本文編輯：田婧）