張維峰，劉斯貞，隋金倫

（沂南縣畜牧發(fā)展促進(jìn)中心 276300）

1 診斷方法

1.1 RT-PCR診斷檢測(cè)方法

當(dāng)前，動(dòng)物疫病診斷中生物學(xué)檢測(cè)方式是比較常用的方法，由于能檢測(cè)到不同致病源特異性基因片段，因而結(jié)合BVDV保守序列設(shè)計(jì)通用性或者結(jié)合不同基因差異序列設(shè)計(jì)分型的檢測(cè)引物，以此鑒定并分型研究BVDV病毒。相關(guān)學(xué)者結(jié)合GenBank中宣布的BVDV高度保守UTR序列有效設(shè)計(jì)鑒定與分型引物，構(gòu)建BVDV鑒定RT-PCR診斷方法與分型診斷方法，鑒定引物能夠?qū)VDV-1與BVDV-2型分別延伸出288bp的特異性片段，而分型異物可分別將BVDV-1與BVDV-2衍生出316bp與110bp兩種特異性片段，其在BVDV流行病學(xué)調(diào)查與臨床病料檢測(cè)中有一定的適用性，因而應(yīng)用前景廣闊。

1.2 熒光定量診斷檢測(cè)方法

該診斷方法是基于常規(guī)PCR方法中融合光譜技術(shù)發(fā)展而成的核酸定量檢測(cè)方法，其具有很強(qiáng)的敏感性。相關(guān)學(xué)者構(gòu)建的BVDVSYBRGreen熒光定量診斷方法，其敏感性與特異性好，其中敏感性達(dá)到最低檢測(cè)下限10拷貝，與牛副流感病毒3型及牛傳染性鼻氣管炎病毒不會(huì)發(fā)生交叉反應(yīng)，但其不能鑒別診斷豬瘟病毒。而基于BVDV-1與BVDV-2構(gòu)建的雙重TaqMan熒光定量PCR鑒別診斷方法，是結(jié)合牛病毒性腹瀉病毒UTR而設(shè)計(jì)的一種引物鑒別診斷方法，其與豬瘟、牛傳染性鼻氣管炎及口蹄疫等病毒不存在交叉反應(yīng)。對(duì)于BVDV-1與BVDV-2該診斷方法最低檢測(cè)下限分別是10拷貝/μL與100拷貝/μL，因而在BVDV臨床診斷與分型診斷檢測(cè)中比較適用。

1.3 LAMP診斷方法

其屬于一種環(huán)介導(dǎo)等溫技術(shù)，屬于新型核酸等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)，操作方便且現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)用靈活等特點(diǎn)，能夠快速診斷臨床疾病。優(yōu)化反應(yīng)時(shí)間與溫度，基于BVDV5′UTR基因序列有效設(shè)計(jì)了四種特異性LAMP檢測(cè)引物，構(gòu)建BVDVRT-LAMP快速診斷方法，其在63℃等溫環(huán)境下50min就可完成反應(yīng)，其最低能夠檢測(cè)到10-6倍稀釋后的BVDV病毒液。相較之常規(guī)RT-PCR病毒診斷方法，其靈活度達(dá)到100倍，與其他病毒也不會(huì)發(fā)生交叉反應(yīng)，操作方便、速度快、靈敏性強(qiáng)且具有特異性，因而在BVDV現(xiàn)場(chǎng)診斷與監(jiān)測(cè)中可采用該方法。

1.4 ELISA診斷方法

因該診斷方法操作方便、有很強(qiáng)的特異性、靈敏性強(qiáng)且可進(jìn)行大規(guī)模監(jiān)測(cè)，因而廣泛應(yīng)用于動(dòng)物疫病臨床診斷與流行病學(xué)調(diào)查中?；贐VDV單克隆與多克隆抗體的制備，構(gòu)建BVDV抗原雙抗體夾心ELISA方法，其特異性與敏感性強(qiáng)，利于檢測(cè)到160倍稀釋后的BVDV陽(yáng)性糞便樣品，不會(huì)與牛腸道、口蹄疫以及牛細(xì)小等病毒出現(xiàn)交叉反應(yīng)，對(duì)常規(guī)RE-PCR有百分百的符合率。該診斷方法適用于規(guī)模樣品BVDV感染流行病學(xué)調(diào)查，從技術(shù)層面為BVDV病毒感染診斷、檢疫、凈化與防治提供了保障。

2 防治措施

2.1 加強(qiáng)環(huán)境衛(wèi)生管理

牛養(yǎng)殖中，要定期清潔圈舍與周圍環(huán)境，并且選用無(wú)毒無(wú)害的消毒劑進(jìn)行消毒，以防消毒劑在牛體內(nèi)殘留，這與國(guó)家《中華人民共和國(guó)獸藥典》規(guī)定相符合。另外，飲水與飼料消毒也是十分必要的，飲水要滿足飲用水標(biāo)準(zhǔn)，沒(méi)有污染的清潔水，對(duì)牛舍內(nèi)垃圾糞便清理要及時(shí)。對(duì)患病牛牛舍做好徹底消毒，病死動(dòng)物與流產(chǎn)胎兒要及時(shí)處理，以防疾病蔓延。

2.2 做好動(dòng)物免疫接種

免疫接種利于預(yù)防牛病毒性腹瀉病毒感染。牛6～10個(gè)月大時(shí)，從初乳中獲得的母源抗體水平變?nèi)?，此時(shí)接種減毒與滅活疫苗利于有效預(yù)防牛患病毒性腹瀉病毒。此過(guò)程中，要選擇安全的疫苗，且接種必須要正確。

2.3 重視飼養(yǎng)管理

對(duì)牛群加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，為牛提供充足而均衡的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，以此全面提高牛只免疫力，有效降低牛病毒性疾病發(fā)病幾率。

2.4 合理選用治療方法

當(dāng)前，牛病毒性腹瀉病毒感染還沒(méi)有特效治療方法。生產(chǎn)時(shí)間常以對(duì)癥治療方法控制病情。其中，收斂劑與補(bǔ)液療法能夠縮短病程，對(duì)患病牛有很好的恢復(fù)效果。?；疾『?，及時(shí)選用抗生素預(yù)防出現(xiàn)繼發(fā)性細(xì)菌感染，造成大面積死亡。另外，還要詳細(xì)記錄治療過(guò)程，包含發(fā)病情況、用藥時(shí)間與計(jì)量、藥品生產(chǎn)情況、獸醫(yī)姓名及治療方案等信息。

3 結(jié)語(yǔ)

綜上所述，BVDV疾病會(huì)對(duì)養(yǎng)牛業(yè)造成嚴(yán)重的損失，也是牛群極易感染的病毒性傳染病。因而養(yǎng)殖場(chǎng)要加強(qiáng)疫苗免疫接種與生物安全防控，及時(shí)治療或淘汰帶毒牛患病牛，對(duì)飼養(yǎng)場(chǎng)環(huán)境做好消毒處理，確保飼料與飲用水干凈。定期清理糞便保持圈舍通風(fēng)換氣，加強(qiáng)防寒保暖。引種過(guò)程中，要嚴(yán)格做好隔離檢疫，只有積極防控BVDV 才能減小發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，為養(yǎng)牛業(yè)健康發(fā)展提供推動(dòng)力。