不同產地的蒲公英提取物中菊苣酸含量測定

◎ 黃綺敏，馮華業(yè)，李美珍，邱富源，江志鵬

（無限極（中國）有限公司，廣東 江門 529100）

蒲公英是菊科植物蒲公英（Taraxacum mongolicumHand.-Mazz.）、堿地蒲公英（Taraxacum borealisinenseKitam.）或同屬數(shù)種植物的干燥全草[1]。蒲公英提取物是以蒲公英為原料，經(jīng)水提取、過濾、濃縮、干燥等工序制成的提取物[2]。蒲公英提取物中含有菊苣酸、咖啡酸等成分[3-5]，現(xiàn)代藥理研究表明，蒲公英提取物具有提高免疫力[6]、降血糖[7]、輔助保護肝損傷[8-9]等作用。

目前在國內外未發(fā)現(xiàn)蒲公英提取物的官方質量評價方法[10]。本研究建立了蒲公英提取物的菊苣酸含量測定方法，并測定了不同產地的蒲公英提取物中菊苣酸含量，為初步評價蒲公英提取物的質量提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

HP1200型高效液相色譜儀，包括二極管陣列檢測器，美國Agilent公司；KQ-400KDE型高功率數(shù)控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司。

菊苣酸標準品（CAS號70831-56-0、批號110831-201906），中國食品藥品檢定研究院，含量以91.5%計；咖啡酸標準品（CAS號70831-56-0，批號111959-201903），中國食品藥品檢定研究院，含量以88.8%計；甲醇為色譜純，德國Merck公司；乙腈為色譜純，德國Merck公司；其他試劑均為分析純，水為純化水。

蒲公英提取物由適量蒲公英藥材加8倍量水煎煮3次，合并濾液，70 ℃減壓濃縮，經(jīng)噴霧干燥而得。10批蒲公英提取物來源于4個廠家，編號1～10。

1.2 方法

1.2.1 菊苣酸的含量測定

（1）對照品溶液配制。精密稱取菊苣酸對照品約8 mg于500 mL棕色容量瓶中，用50%甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，制成16 μg·mL-1的菊苣酸對照品溶液。

（2）試品溶液配制。精密稱取本品約0.5 g，置于具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，稱定重量，超聲（250 W，40 kHz）處理30 min，取出，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，用0.45 μm的針式過濾器過濾，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

（3）菊苣酸含量測定。精密吸取對照品溶液和供試品溶各10 μL，注入液相色譜儀測定。根據(jù)所得對照品溶液和供試品溶液色譜圖中菊苣酸峰面積計算供試品中的菊苣酸含量。

1.2.2 色譜條件

（1）色譜柱。十八烷基鍵合硅膠柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：以乙腈為流動相A，以0.1%磷酸溶液為流動相B。

（2）采用梯度洗脫。0～14 min流動相A由13%上升到15%，流動相B由87%下降到85%；14～29 min流動相A由15%上升到18%，流動相B由85%下降到82%；29～35 min流動相A由18%上升到26%，流動相B由82%下降到74%；35～48 min保持A為26%，B為74%。波長323 nm；柱溫35 ℃；流速1.0 mL·min-1；進樣量10 μL；理論塔板數(shù)按菊苣酸計不低于5 000。

1.2.3 方法學考察

（1）線性關系考察。精密稱取菊苣酸對照品6.940 mg置于250 mL容量瓶中，加50%甲醇溶解制成儲備液，再精密吸取該儲備液1.0 mL、2.0 mL、4.0 mL、6.0 mL、8.0 mL和10.0 mL分別至10 mL容量瓶中，加50%甲醇定容至刻度，搖勻，測定峰面積。

（2）精密度試驗。取1.2.1項中制備的菊苣酸對照品溶液，重復進樣6次，分別計算峰面積及保留時間的RSD值。

（3）穩(wěn)定性試驗。精密稱取蒲公英提取物（批號CPGY-C-925138），按1.2.1項中制備的供試品溶液，分別于0 h、2 h、4 h、6 h、12 h和24 h測定。

（4）重復性試驗。精密稱取同批號蒲公英提取物（批號CPGY-C-925138）同一天內按1.2.1項中制備的6份供試品溶液，按1.2.2項中色譜條件測定。

（5）回收率試驗。取菊苣酸對照品12.06 mg置500 mL棕色容量瓶中，加50%甲醇溶解并定容，分別吸取該對照品溶液2.5 mL、5.0 mL、7.5 mL各3組，分別加入已各自精密稱取同批號蒲公英提取物約0.25 g的9個具塞錐形瓶中，按1.2.1制成供回收率測定用供試品溶液，注入液相色譜儀測定，計算菊苣酸的回收率。

2 結果與分析

2.1 線性關系考察

以菊苣酸對照品的濃度（μg·mL-1）為橫坐標，峰面積為縱坐標，求得回歸方程Y=0.357 6X-0.074 9，R2=0.999 9。結果表明菊苣酸在2.709 4～27.093 8 μg·mL-1范圍內呈良好的線性關系。

2.2 精密度試驗

以菊苣酸計，保留時間和峰面積的RSD值為0.31%，不對稱度不高于1.1，理論塔板數(shù)約33 000，證明儀器精密度良好。

2.3 穩(wěn)定性試驗

穩(wěn)定性試驗結果顯示，供試品中菊苣酸峰面積的RSD為0.12%（n=6），表明供試品溶液在24 h內穩(wěn)定。

2.4 重復性試驗

菊苣酸平均含量為0.047%，RSD為1.35%，分離度大于1.5，表明該方法重復性良好。

2.5 回收率試驗

平均回收率為96.55%（92%～105%），表明該方法準確度良好。

2.6 樣品含量測定

10批蒲公英提取物中菊苣酸含量以干燥品計算在0.047%～0.360%，平均值約為0.23%，其中陜西B產地的含量偏高，為0.33%～0.36%；陜西A產地的含量最低，約為0.047%，但是每個產地本身數(shù)據(jù)差異較小，結果見表1。

3 結論與討論

上述方法學驗證表明，測定蒲公英提取物中菊苣酸含量的高效液相色譜法的適應性、精密度、線性關系、準確度等均符合要求，該方法穩(wěn)定、可靠，可以作為蒲公英提取物中菊苣酸的含量測定方法。研究發(fā)現(xiàn)，不同產地的蒲公英提取物的菊苣酸含量存在一定差異，這可能與蒲公英藥材本身的生長環(huán)境、采收時間、加工工藝等因素有關，有待進一步研究。