張馨心，宮福帥，歐小女，秦佳梅

（通化師范學(xué)院·吉林通化·134002）

龍牙楤木Aralia elata (Miq.) seem.是多年生的落葉小喬木，又稱(chēng)遼東楤木，春季萌發(fā)的嫩芽稱(chēng)刺老鴉，被稱(chēng)為山菜之王。整株均有藥效，具有抗癌、活血化瘀、補(bǔ)氣安神、 利尿消腫等功效， 可用來(lái)治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肝炎、糖尿病、慢性胃炎及心肌缺血等疾病[1]，其活性成分主要為皂苷類(lèi)化合物、多糖等。目前已從龍牙楤木中分離鑒定出100 多種皂苷類(lèi)化合物[2]。其中齊墩果酸皂苷難合成， 只能從植物中提取。 從龍牙楤木中提取、分離后獲得齊墩果酸單一成分，利用成熟的骨架材料羥丙基甲基纖維素(HPMC)制成中藥緩釋片劑,可減少服用劑量，提高臨床用藥的安全性[2]。

1 材料與方法

1.1 供試材料

供試材料為2019 年11 月采自吉林省通化市金廠鎮(zhèn)龍頭村野生的龍牙楤木，在不同的植株上剝根皮、干皮，剪取一年生枝條，60℃烘干[3]。用FZ102 型植物粉碎機(jī)粉碎，過(guò)40 目篩，裝袋、標(biāo)識(shí)，備用。

1.2 試劑

齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自上海金穗生物醫(yī)藥有限公司，純度≥98%；乙醇、甲醇、香蘭素、濃硫酸等化學(xué)試劑均為分析純；吐溫20，吐溫80，司班80，十二烷基硫酸鈉，十二烷基磺酸鈉等均為化學(xué)純；純凈水。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制

用BS210S 型電子天平精密稱(chēng)取0.006g 齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)品，置于5mL 容量瓶中，加甲醇定容，搖勻。 分別精密量取 20、40、60、80、10、120μL 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液分別置于6 個(gè)不同的試管中, 于PC-1000 型數(shù)顯式電熱恒溫水浴鍋中加熱，揮干甲醇。 取出放冷，分別向6 個(gè)試管加入8%香草醛—乙醇溶液0.5mL 和72%的濃硫酸5mL，搖勻，放置至管壁無(wú)殘留液。 將各試管置于60℃恒溫水浴上加熱10min， 取出立即冷水浴15min。 用721E 型分光光度計(jì)于540nm 處側(cè)吸光值[4]。 以齊墩果酸質(zhì)量濃度（X，mg/L）為橫坐標(biāo)、吸光值（Y）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線(xiàn)性回歸 （圖 1）， 得回歸方程為：Y=0.027x+0.1179，R2=0.9996，表明齊墩果酸的質(zhì)量濃度在4.4mg/L～26.1mg/L 范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。

圖1 齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

1.3.2 供試溶液制備

準(zhǔn)確稱(chēng)取1g 供試材料， 按液料比25∶1 加入70%的乙醇，并在其中加入質(zhì)量濃度為0.6%的表面活性劑(60℃水浴加熱，使其溶解)[5]。 按超聲時(shí)間 30min，超聲功率270W，超聲溫度60℃進(jìn)行超聲提取[6]，放涼后，稱(chēng)量，用70%的乙醇補(bǔ)足差量，真空抽濾，取濾液10mL，加水15mL，水浴加熱蒸去乙醇，加入適量甲醇使蒸干剩余的殘?jiān)芙?，轉(zhuǎn)移至10mL 容量瓶，加入甲醇至刻度線(xiàn)，搖勻，作為供試溶液[7]。 三次重復(fù)。

1.3.3 提取樣品的測(cè)定

將1.3.2 供試樣品溶液， 按標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)1.3.1 項(xiàng)下方法測(cè)吸光值，代入標(biāo)準(zhǔn)方程計(jì)算。

1.3.4 齊墩果酸得率的測(cè)定與計(jì)算

按以下公式計(jì)算齊墩果酸提取率：

X=C V n/1000m×100%[8]

式中：C 為測(cè)定樣品液中齊墩果酸的濃度（μg/mL）；V 為溶液的體積 （mL）；n 為稀釋倍數(shù)；m 為龍牙楤木粉的質(zhì)量（mg）。

1.4 數(shù)據(jù)處理

本實(shí)驗(yàn)得出數(shù)據(jù)均利用SPSS 25 版及Excel 進(jìn)行處理分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 質(zhì)量濃度為0.6%的不同表面活性劑對(duì)龍牙楤木中齊墩果酸提取的影響

圖2 0.6%的不同表面活性劑對(duì)龍牙楤木齊墩果酸的影響

天然活性成分的提取中, 通常用作增溶劑的表面活性劑其 HLB 值多在13 至18[8]，本實(shí)驗(yàn)選用了 5 種不同的表面活性劑對(duì)龍牙楤木中齊墩果酸提取率的影響見(jiàn)圖2。

由圖2 可知,與空白樣相比,用不同表面活性劑的水溶液作為提取劑均能提高龍牙楤木根皮中齊墩果酸的提取率, 說(shuō)明這些表面活性劑與超聲波在提取齊墩果酸時(shí)均具有協(xié)同效應(yīng)。 這是因?yàn)楸砻婊钚詣┑募尤虢档土巳軇┡c供試材料之間的界面張力, 使得溶劑分子更容易滲透到顆粒中,從而加快了內(nèi)擴(kuò)散過(guò)程,同時(shí)表面活性劑能增加難溶化合物在溶劑中的溶解度[8]。其中又以十二烷基硫酸鈉提取效果最好,Tween 80 次之,十二烷基磺酸鈉與對(duì)照比則不明顯。 認(rèn)為十二烷基硫酸鈉更適宜用作實(shí)驗(yàn)試劑。 十二烷基磺酸鈉雖可用作陰離子表面活性劑, 但由于十二烷基磺酸鈉制備較難,價(jià)格較高,且難以提純,儲(chǔ)存稍久易發(fā)黃,故很少用作實(shí)驗(yàn)試劑[9]。

圖3 不同SDS 濃度下齊墩果酸的提取率

2.2 不同質(zhì)量濃度的十二烷基硫酸鈉對(duì)提取效果的影響

在固定超聲條件的情況下， 用不同濃度的十二烷基硫酸鈉-乙醇溶液進(jìn)行齊墩果酸的提取結(jié)果見(jiàn)圖3，隨著十二烷基硫酸鈉用量的增大， 齊墩果酸的濃度也隨之提高， 當(dāng)十二烷基硫酸鈉在質(zhì)量濃度大于0.4%后得率顯著提高， 濃度為0.8%時(shí)提取效率達(dá)最大，達(dá)0.96%。 這是由于隨著表面活性劑用量的增大，形成的膠束增多，對(duì)齊墩果酸的增溶作用增強(qiáng)。當(dāng)表面活性劑用量大于0.8%時(shí)，提取率呈下降趨勢(shì)，這說(shuō)明十二烷基硫酸鈉不僅對(duì)齊墩果酸有增溶作用， 也對(duì)其他雜質(zhì)有增溶作用，導(dǎo)致提取率下降了[10-11]。 經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析（鄧肯）見(jiàn)表1，濃度為0.6%和0.8%都與其他濃度具有顯著差異，而二者之間則差異不顯著，鑒于0.8%的高于0.6%的，選取質(zhì)量濃度為0.8%的十二烷基硫酸鈉作為優(yōu)化條件之一。

表1 齊墩果酸含量（mg/g）

2.3 龍牙楤木根皮，枝條，干皮中齊墩果酸的含量測(cè)定

表2 龍牙楤木枝條，根皮，干皮中齊墩果酸的含量

依據(jù)1.3.2 方法不加表面活性劑提取，干皮中齊墩果酸含量最大， 為7.7428%； 枝條中提取率次之，為6.0427%；根皮中最低，為5.5530%。 加入質(zhì)量濃度為0.8%的十二烷基硫酸鈉作為輔助提取后，均有明顯的提高。 以枝條的效果最顯著。 據(jù)資料[12-13]報(bào)導(dǎo)常用根及根皮進(jìn)行提取齊墩果酸，對(duì)資源破壞嚴(yán)重。本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明，可充分利用枝條，有效提高資源利用率。

3 討論

3.1 超聲提取法是目前廣泛用于中藥成分提取的方法之一, 利用超聲波的高頻機(jī)械振蕩作用使溶劑快速進(jìn)入植物細(xì)胞中, 同時(shí)通過(guò)空化效應(yīng)瞬間將植物組織和細(xì)胞分解、破裂,使細(xì)胞的內(nèi)容物釋放與溶出,且超聲波具有熱效應(yīng), 可增大細(xì)胞內(nèi)溶質(zhì)的溶解度或擴(kuò)散速率,3 種作用機(jī)制相互配合發(fā)揮作用, 可大大提高中藥成分的提取率[14]，近年來(lái)，資源的緊缺及人類(lèi)環(huán)保意識(shí)的增強(qiáng),將進(jìn)一步推進(jìn)綠色表面活性劑的發(fā)展。 表面活性劑輔助提取具有縮短提取時(shí)間、提高提取效率、綠色節(jié)能等特點(diǎn)。兩種方法結(jié)合卻少有人嘗試，通過(guò)本次實(shí)驗(yàn)證明，兩者協(xié)同必將成為今后中藥開(kāi)發(fā)的重要手段,也將成為中藥提取的另一個(gè)熱點(diǎn)研究方向。

3.2 本實(shí)驗(yàn)從常用的非離子型和陰離子型表面活性劑中, 選擇了5 種HLB 值不同的表面活性劑, 通過(guò)對(duì)比, 十二烷基硫酸鈉為表面活性劑輔助超聲提取獲得滿(mǎn)意結(jié)果。 同時(shí)考察了加入不同濃度的十二烷基硫酸鈉,以0.8%的為龍牙楤木中齊墩果酸提取得率顯著提高。 認(rèn)為表面活性劑通過(guò)降低界面表面張力形成界面膜，促使微乳形成。十二烷基硫酸鈉具有較好的乳化作用，HBL 值較高，屬于親水性基表面活性劑，溶于水后定向吸附在溶液中。

3.3 本實(shí)驗(yàn)的輔助只是應(yīng)用了單一的表面活性劑，但表面活性劑復(fù)配一直都是研究的熱點(diǎn)， 使用兩種或多種表面活性劑的混合物， 因分子相互作用或成為絡(luò)合物或靜電吸引或排斥、 或其他的物理或化學(xué)的相互作用，因而產(chǎn)生協(xié)同和對(duì)抗作用[15]。 因此，將表面活性劑的復(fù)配應(yīng)用還有待研究。