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      刺激隱核蟲感染的免疫預(yù)防研究進(jìn)展

      2021-04-25 03:38:06余玲瑩,黃曉紅
      福建農(nóng)業(yè)科技 2021年2期
      關(guān)鍵詞:免疫預(yù)防

      摘要:綜述了刺激隱核蟲感染誘發(fā)的免疫應(yīng)答及其免疫預(yù)防的研究現(xiàn)狀,為開發(fā)阻斷或減少刺激隱核蟲感染的方法提供參考。研究顯示,刺激隱核蟲感染可以誘發(fā)宿主魚的先天性和適應(yīng)性免疫;利用刺激隱核蟲的蟲體(特別是幼蟲)以及表面蛋白(或抑動(dòng)抗原)的重組蛋白和真核表達(dá)的重組質(zhì)粒DNA免疫宿主魚,均獲得了一定的相對免疫保護(hù)率(40%~100%)。今后應(yīng)進(jìn)一步研究魚與刺激隱核蟲之間的相互作用,以便綜合利用魚對刺激隱核蟲的免疫應(yīng)答,研發(fā)高效、多元化的刺激隱核蟲病的防治方法。

      關(guān)鍵詞:刺激隱核蟲;刺激隱核蟲病;免疫應(yīng)答;免疫預(yù)防

      中圖分類號:Q 95文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A文章編號:0253-2301(2021)02-0063-07

      DOI: 1013651/jcnkifjnykj202102012

      Research Progress on the Immunoprophylaxis of Cryptocaryon Irritans Infection

      YU Lingying, HUANG Xiaohong*

      (College of Life Sciences, Fujian Normal University, Fuzhou, Fujian 350117, China)

      Abstract: The research status of the immune response induced by the infection of Cryptocaryon irritans and its immunoprophylaxis were reviewed, in order to provide reference for the development of methods to block or reduce the infection of Cryptocaryon irritans. The research showed that the infection of Cryptocaryon irritans could induce the innate and adaptive immunity of the host fish. The relative immune protection rate (40%-100%) was obtained by immunizing the host fish with the insect bodies of Cryptocaryon irritans (especially larvae), the recombinant proteins of surface proteins (or immobilization antigens) and the recombinant plasmid DNA expressed in eukaryons. In the future, it is necessary to further study the interaction between fish and Cryptocaryon irritans, so as to comprehensively utilize the immune response of fish to Cryptocaryon irritans, and develop the efficient and diversified prevention and control methods of cryptocaryoniosis.

      Key words: Cryptocaryon irritans; Cryptocaryoniosis; Immune response; Immunoprophylaxis

      刺激隱核蟲Cryptocaryon irritans是寄生在海水硬骨魚身上的一種纖毛蟲類原生動(dòng)物,其生活史包括4個(gè)階段:幼蟲期、滋養(yǎng)體期、包囊前體期、包囊期[1]。幼蟲在海水中游動(dòng)以便尋找宿主。當(dāng)遇到宿主時(shí),幼蟲可通過魚軀干、鰓、鰭和眼等處表皮入侵宿主,并在魚體表皮與真皮之間轉(zhuǎn)化成滋養(yǎng)體。滋養(yǎng)體在魚皮組織中吸收營養(yǎng),發(fā)育成熟后離開宿主,脫落到海水中形成了包囊前體。包囊前體在海水中緩慢游動(dòng),到達(dá)海底或容器底部時(shí)會(huì)黏附在上面逐漸形成包囊。隨后包囊開始不斷地分裂繁殖,最終產(chǎn)生高達(dá)200個(gè)左右幼蟲后,脫出包囊逸出到海水中繼續(xù)尋找新的宿主,開始下一個(gè)生活史循環(huán)。在26~28℃環(huán)境下,刺激隱核蟲以褐菖鲉Sebastiscus marmoratus作為宿主完成一個(gè)完整的生活史需要7~10 d的時(shí)間[2]。

      被刺激隱核蟲感染后,宿主魚會(huì)表現(xiàn)出厭食、黏液分泌過多、在海水中沖撞、在網(wǎng)箱壁上摩擦止癢等異常行為,以及魚體被感染部位出現(xiàn)充血等癥狀。隨著蟲體發(fā)育,在魚體表、鰓、鰭和眼睛上會(huì)出現(xiàn)肉眼可見的白點(diǎn),因此刺激隱核蟲病也被稱為“海水魚白點(diǎn)病”[3]。當(dāng)鰓上的黏液過多,阻礙了魚的呼吸作用、水循環(huán)以及有害物質(zhì)的排出,就會(huì)導(dǎo)致魚的死亡。當(dāng)宿主魚感染嚴(yán)重的時(shí)候,免疫因子的釋放受到抑制、器官組織功能紊亂從而導(dǎo)致免疫力的下降[4]。刺激隱核蟲病還易繼發(fā)細(xì)菌感染、炎癥發(fā)生,如鰓表皮細(xì)胞的腫脹、增生,以及寄生蟲接觸區(qū)域的壞死脫落。

      刺激隱核蟲對于熱帶和亞熱帶海水硬骨魚來說是一個(gè)主要的威脅[3]。由于野生環(huán)境中的魚類密度通常較低,刺激隱核蟲感染不易流行,因此危害不大。但是該蟲很容易在高密度的海水養(yǎng)殖魚中暴發(fā)感染,導(dǎo)致高死亡率,對海水魚養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失[5]。在福建省寧德市大黃魚主產(chǎn)區(qū),每年發(fā)病率達(dá)80%以上,經(jīng)濟(jì)損失約2億元[6]。2008年,農(nóng)業(yè)部將刺激隱核蟲病認(rèn)定為二級動(dòng)物傳染病。

      近年來,學(xué)者們針對刺激隱核蟲病的防治開展了許多研究。物理方法如間斷性淡水處理、及時(shí)移除脫落到水族箱底的包囊等[7],具有安全性較高、環(huán)境友好的特點(diǎn),但是防治效果較弱,且在大水體中不易操作。Yin等[8]研究發(fā)現(xiàn)銅合金可以使刺激隱核蟲包囊前體的細(xì)胞膜破裂、原生質(zhì)溢出,經(jīng)銅板處理后的刺激隱核蟲細(xì)胞的酶活力顯著降低,因此銅合金板可以有效地阻斷刺激隱核蟲生活史,是潛在的防治刺激隱核蟲病的材料。常用的防治刺激隱核蟲病的傳統(tǒng)化學(xué)藥物甲醛、孔雀石綠、次甲基蘭、鹽酸奎寧、硫酸銅、乙酸、雙氧水、次氯酸鈉、鹽霉素、磺胺類抗生素等對刺激隱核蟲都具有一定的殺傷效果[9-11],但對宿主具有毒性且易造成藥物殘留、使細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性、易污染環(huán)境,并且孔雀石綠等藥物已被政府明令禁止使用。我國中藥文化有著數(shù)千年的悠久歷史,近年來有學(xué)者研究辣椒、生姜、檳榔、復(fù)方中草藥以及植物中的葉酸等對刺激隱核蟲病防治效果[12-14],發(fā)現(xiàn)它們對殺滅刺激隱核蟲幼蟲具有較好的效果,但難以殺滅包囊。因此,中草藥療法僅適用于刺激隱核蟲形成包囊前的防治。

      此外,許多學(xué)者以免疫預(yù)防為出發(fā)點(diǎn)嘗試尋找防治刺激隱核蟲病的突破口。已有的研究主要是以幼蟲及刺激隱核蟲表面膜蛋白為抗原免疫宿主魚,證明了受免魚能夠產(chǎn)生特異性抗體,該抗體對幼蟲具有阻動(dòng)效應(yīng)[15-17],一定程度上為刺激隱核蟲病的免疫預(yù)防方法研究提供了理論依據(jù)。然而至今研究工作者還未能找到真正有效的預(yù)防、控制和治療該病的方法。本文綜述了當(dāng)前魚類對刺激隱核蟲感染的免疫應(yīng)答及刺激隱核蟲病的免疫預(yù)防研究進(jìn)展情況,旨在為相關(guān)研究者了解硬骨魚類感染刺激隱核蟲的發(fā)病機(jī)理、篩選高效的免疫抗原及研發(fā)有效的治療藥物和疫苗提供參考。

      1海水魚對刺激隱核蟲的先天性免疫應(yīng)答

      余玲瑩等:刺激隱核蟲感染的免疫預(yù)防研究進(jìn)展2021年第2期2021年第2期余玲瑩等:刺激隱核蟲感染的免疫預(yù)防研究進(jìn)展11Toll樣受體信號通路

      海水硬骨魚對刺激隱核蟲的感染會(huì)產(chǎn)生先天性免疫和特異性免疫反應(yīng)[18]。先天性免疫系統(tǒng)主要由模式識別受體(PRRs)介導(dǎo),可以特異性識別保守區(qū)域原相關(guān)分子模式(PAMPs)。在特異性免疫作出反應(yīng)之前,先天性免疫在抗擊病原體中占據(jù)了重要的作用。在硬骨魚中主要有4種類型的模式識別受體,即Toll樣受體(Tolllike receptors)、C型凝集素受體(Ctype lectin receptors)、NOD樣受體(NODlike receptors)和RIGI 樣受體(RIGIlike receptors)[19]。有研究表明,刺激隱核蟲感染魚宿主后,TRL的家族成員直接或間接地與PAMPs結(jié)合,隨后與下游的Toll白介素1受體結(jié)構(gòu)域(Tollinterleukin 1 receptor domain,TIR)相互作用,激活NFκB、MAPKs和IRFs等轉(zhuǎn)錄因子來誘導(dǎo)促炎因子和干擾素的表達(dá),從而引發(fā)先天性免疫的發(fā)生[20]。

      TLR2、MyD88和IL1β在TLR通路中充當(dāng)信號導(dǎo)入、傳導(dǎo)和信號導(dǎo)出的功能,斜帶石斑魚Epinephelus coioides被刺激隱核蟲感染后,其感染部位和免疫器官中的TLR2、MyD88和IL1β表達(dá)量均上調(diào);脾臟中TLR3的表達(dá)量在感染6 h 時(shí)顯著上調(diào)并達(dá)到峰值,與TLR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)的基因EcMal和EcTRAF5同樣在感染部位(鰓)和免疫器官(頭、腎)中的表達(dá)量上調(diào),說明TLR信號通路在宿主抗刺激隱核蟲過程中占據(jù)了重要的作用[21]。而大黃魚Larimichthys crocea在感染刺激隱核蟲后,TLR5的表達(dá)量增加了111倍,其很可能參與到宿主識別抗原組分提高防御病原的作用,并且其表達(dá)水平可能與宿主感染寄生蟲后的存活時(shí)間有關(guān)[22-23]。在先天性免疫中,這些信號傳送到局部感染位置形成了炎癥反應(yīng)。

      12趨化因子和細(xì)胞因子信號通路

      在早期感染階段,炎癥反應(yīng)在抗病原蟲機(jī)制中占據(jù)了重要的作用。在被刺激隱核蟲感染的大黃魚肝臟轉(zhuǎn)錄組中,TNFα、IL1β、IL6、IFNα 和 IFNβ等促炎細(xì)胞因子以及CXCL10/12 和CCL19/20/25等趨化因子的表達(dá)量升高,促進(jìn)炎癥反應(yīng)的發(fā)生;其他因子如TAK1、PIK3Ch和PIK3R等則可能為了避免炎癥反應(yīng)過度進(jìn)行了負(fù)反饋調(diào)節(jié)[22]。斜帶石斑魚皮膚中的趨化因子CCL1、CCL4和CXCL911在感染后表達(dá)量上調(diào),同時(shí)皮膚相關(guān)淋巴組織(SALT)召集了各類免疫細(xì)胞,免疫細(xì)胞迅速地遷移集中到感染部位形成一個(gè)局部免疫防御[24]。此外,在受染石斑魚的鰓上有檢測到大量非特異性免疫細(xì)胞,例如嗜酸性白細(xì)胞、中性粒白細(xì)胞、巨噬細(xì)胞[25]。作為最重要的吞噬細(xì)胞類型,中性粒細(xì)胞通過依賴氧的殺傷機(jī)制利用NADPH產(chǎn)生大量的活性氧ROS,氧化殺死大量的病原體,并且發(fā)現(xiàn)在感染部位免疫相關(guān)基因的表達(dá)要早于免疫器官相關(guān)基因的表達(dá),說明當(dāng)感染發(fā)生時(shí),大量的吞噬細(xì)胞聚集在了感染部位,激活生物合成能力,觸發(fā)了更強(qiáng)的免疫應(yīng)答。隨后吞噬細(xì)胞釋放免疫因子,導(dǎo)致了炎癥和免疫應(yīng)答的發(fā)生,并進(jìn)一步激活免疫器官的效應(yīng)細(xì)胞,使得相關(guān)基因表達(dá)量增加[26]。

      在先天性免疫的后期階段主要由細(xì)胞因子和趨化因子驅(qū)動(dòng)引起急性期反應(yīng)(the acute phase response, APR)[27]。其中,細(xì)胞因子IL1β被認(rèn)為是硬骨魚中炎癥免疫應(yīng)答中最重要的調(diào)節(jié)因子,在抗刺激隱核蟲的過程中具有重要作用。比如,感染刺激隱核蟲后斜帶石斑魚Ecoioides的皮膚及卵形鯧鲹Tovatus的主要免疫器官腎臟、脾臟、肝臟、鰓和皮膚中的IL1β的表達(dá)量會(huì)顯著增加[28]。此外,IL8、IL11、 IL34等細(xì)胞因子也參與到抗蟲過程中[29-30]。虹鱒魚Oncorhynchus mykiss皮膚中IL8的表達(dá)量在感染后第3 d顯著增加,并且中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞遷移到感染的部位并增殖,說明細(xì)胞免疫在感染72 h后被激活并對刺激隱核蟲產(chǎn)生抵御作用[24, 30]。細(xì)胞因子和細(xì)胞因子受體交互作用通路貫穿整個(gè)刺激隱核蟲感染過程,但細(xì)胞因子在抗蟲過程中的具體功能仍有待進(jìn)一步研究。

      13抗菌多肽和替代補(bǔ)體途徑

      抗菌多肽 (AMPs)是先天性免疫的重要組分之一,是由宿主產(chǎn)生的多肽或者小分子蛋白,幾乎存在于所有的生物體中,這些分子擁有強(qiáng)大的廣譜抗菌活性,在防御病原體入侵宿主中占有重要的作用。近年來,有學(xué)者發(fā)現(xiàn),在海洋生物的皮膚、鰓和腸道等表皮上擁有豐富的抗菌多肽,可以作為第一道防線防止病原微生物的入侵。大黃魚Lcrocea肝臟的轉(zhuǎn)錄組表明,在刺激隱核蟲感染過程中,AMPs家族中的Hepcidin、hepcidinlike、piscidin5like、piscidin5like type4 和BPI(Bactericidal permeability increasing protein)的表達(dá)量均上調(diào)以便大黃魚防御刺激隱核蟲的感染[31]。由此可見,抗菌多肽在刺激隱核蟲的入侵宿主的過程中具有防御作用。混血柳鱸(Morone chrysops×Morone saxatilis) MCs中分離的Piscidin 2,使用劑量高于125 μg·mL-1時(shí)可以使刺激隱核蟲幼蟲出現(xiàn)腫脹、膜破裂、內(nèi)容物溢出等現(xiàn)象[32],說明piscidins作為AMPs家族最普遍的成員之一,具有很強(qiáng)的抗刺激隱核蟲的活性。刺激隱核蟲感染后,大黃魚Lcrocea的Piscidinlike(LcPis)和piscidin 5like(LcP5L)表達(dá)上調(diào)并且對刺激隱核蟲有致命作用,可以讓其幼蟲行動(dòng)減緩、纖毛分開、細(xì)胞變形,使得幼蟲和滋養(yǎng)體細(xì)胞膜破裂,胞質(zhì)溢出[33-35]。因此,piscidins抗刺激隱核蟲的作用機(jī)制值得進(jìn)一步研究。

      補(bǔ)體系統(tǒng)是由35種胞質(zhì)溶解蛋白組成,在先天性免疫和適應(yīng)性免疫中占據(jù)了重要的作用。有研究表明在應(yīng)對刺激隱核蟲感染的早期,魚類主要通過激活替代補(bǔ)體途徑(the alternative pathway,AP),當(dāng)沒有抗原抗體復(fù)合物形成的情況下,魚的有機(jī)體缺乏C1、C2和C4,外源入侵物質(zhì)直接激活C3,激活非特異性免疫AP途徑[36]。Wang等[22]通過大黃魚肝臟轉(zhuǎn)錄組證實(shí)了激活A(yù)P途徑的FH和C3樣基因在刺激隱核蟲感染后表達(dá)量會(huì)顯著上調(diào)。Dan等[37]也說明了刺激隱核蟲感染可以調(diào)節(jié)斜帶石斑魚Ecoioides血液中的AP途徑。在受染的銅鑼魚Nalbiflora中,F(xiàn)I、FH、FB和CD59等AP補(bǔ)體途徑相關(guān)基因表達(dá)顯著上調(diào),而經(jīng)典補(bǔ)體途徑和凝集素補(bǔ)體途徑相關(guān)基因的表達(dá)沒有很大差別[38]。

      2宿主對刺激隱核蟲的適應(yīng)性免疫應(yīng)答

      Yoshinaga等[39]發(fā)現(xiàn)刺激隱核蟲免疫底鳉Fundulus heteroclitus sp后會(huì)產(chǎn)生免疫血清抗體。Luo等[15]發(fā)現(xiàn)對斜帶石斑魚Ecoioides進(jìn)行腹腔注射和表面感染刺激隱核蟲可以產(chǎn)生適應(yīng)性免疫應(yīng)答。適應(yīng)性免疫應(yīng)答主要通過B淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞進(jìn)行。目前為止,硬骨魚類主要有3種由B細(xì)胞分泌的免疫球蛋白,即IgM、IgD和IgT/IgZ,其中IgM在硬骨魚中的分布最為廣泛[40-41]。T細(xì)胞主要有2種,為細(xì)胞毒性T細(xì)胞(cytotoxic T cells)和輔助性T細(xì)胞(helper T cells)。細(xì)胞毒性T細(xì)胞可以直接殺死被感染的細(xì)胞,輔助性T細(xì)胞主要通過分泌細(xì)胞因子來調(diào)節(jié)其他細(xì)胞。

      斜帶石斑魚Ecoioides皮膚轉(zhuǎn)錄組分析發(fā)現(xiàn):感染刺激隱核蟲后,T細(xì)胞標(biāo)志物CD4和CD48、B細(xì)胞標(biāo)志物 CD22和CD81 以及B 細(xì)胞受體激酶Lyn的表達(dá)量上調(diào),說明在皮膚感染部位T/B 細(xì)胞的存在且進(jìn)行了擴(kuò)增,此時(shí)適應(yīng)性免疫應(yīng)答發(fā)揮了作用[24]。研究還發(fā)現(xiàn),注射過抗刺激隱核蟲DNA疫苗的斜帶石斑魚Ecoioides脾臟中細(xì)胞免疫應(yīng)答和體液免疫應(yīng)答均被激活,MHCII、MHCI、CD4+、CD8α+、IFNγ、TNFα、IL12、IgM 重鏈和IgT重鏈的表達(dá)量均上調(diào)[42],說明了免疫防治刺激隱核蟲病是有效可行的,可以通過疫苗注射讓宿主產(chǎn)生獲得性免疫來防御刺激隱核蟲的感染。在刺激隱核蟲感染銅羅魚Nalbiflora后期,CD34、IgM、IgD、IGH 和PIGR的表達(dá)量上調(diào),CCR9、GZMB和IGH的表達(dá)量下調(diào),在mRNA 水平說明了獲得性免疫主要發(fā)生在感染后期[38]。因此,在免疫防治的過程中,不僅可通過疫苗來提高宿主的適應(yīng)性免疫應(yīng)答,同時(shí)在日常的養(yǎng)殖過程中還要保證宿主魚的健康,提高它們的免疫力,發(fā)揮先天性免疫應(yīng)答與適應(yīng)性免疫應(yīng)答的協(xié)同作用,達(dá)到有效防治刺激隱核蟲病的目的。

      3宿主對刺激隱核蟲的皮膚黏膜免疫應(yīng)答

      硬骨魚類的皮膚中含粘膜相關(guān)淋巴組織,不僅參與生理屏障作用,還可以產(chǎn)生先天性和適應(yīng)性免疫應(yīng)答。有研究表明,未被感染的銅羅魚Nalbiflora的皮膚黏液可以殺死刺激隱核蟲[38],說明了銅羅魚Nalbiflora的皮膚黏液中含有一些天然活性成分可以防御刺激隱核蟲的感染。斜帶石斑魚Ecoioides感染和未感染的皮膚組織的轉(zhuǎn)錄組分析亦表明,一些免疫因子、趨化因子和趨化因子受體、TLR和Lyn都有顯著的基因表達(dá)差異,說明了皮膚黏膜在對抗刺激隱核蟲的感染過程中發(fā)生了免疫應(yīng)答[43]。有報(bào)道認(rèn)為,刺激隱核蟲感染后,ILs在鰓中具有很高的表達(dá)量,可能因?yàn)轹w在感染過程中首先遭到病原攻擊[44-45],免疫因子迅速集中到感染部位誘發(fā)免疫應(yīng)答。據(jù)此可以認(rèn)為,在感染的早期階段皮膚黏膜免疫應(yīng)答在局部感染位置占據(jù)主要防御作用,同時(shí)某些海水硬骨魚的皮膚黏膜中含有抗刺激隱核蟲物質(zhì)[38],因此可以通過研究相關(guān)海水硬骨魚的皮膚黏膜,找到抗刺激隱核蟲的有效成分,從而應(yīng)用于刺激隱核蟲病的防治工作中。

      4刺激隱核蟲病的免疫防治

      綜上所述,刺激隱核蟲感染誘發(fā)了魚類宿主的先天性和適應(yīng)性免疫反應(yīng)。利用刺激隱核蟲蟲體為抗原,可使魚類宿主對刺激隱核蟲(特別是幼蟲)的再次感染產(chǎn)生免疫保護(hù)作用,最高可達(dá)到100%的相對存活率(RPS)[46],為刺激隱核蟲的免疫保護(hù)方法的研究帶來了希望。

      41以刺激隱核蟲表面蛋白為抗原的疫苗研究

      寄生蟲的表面膜蛋白與宿主直接接觸,常被認(rèn)為是主要的免疫顯性抗原,是潛在的疫苗候選分子[47]。因此研究者也克隆了多種刺激隱核蟲的表面膜蛋白,由于這些表面膜蛋白的免疫血清對刺激隱核蟲幼蟲具有較好的阻動(dòng)效果,也將它們稱為抑動(dòng)抗原(immobilization antigens,即Iantigen)。將這些表面蛋白作為抗原腹腔注射魚體,可以使魚類表達(dá)免疫相關(guān)基因,防御刺激隱核蟲的感染。Hatanaka等[17]發(fā)現(xiàn)了幼蟲和滋養(yǎng)體上的表面抗原(CISA32);Lin等[48]從滋養(yǎng)體的cDNA文庫中篩選了多種表面膜蛋白,利用大腸桿菌表達(dá)了刺激隱核蟲表面蛋白的重組蛋白(rCiSA326),將它們作為抗原免疫小鼠后獲得的鼠血清對刺激隱核蟲幼蟲具有較好的阻動(dòng)效果。Mo等[49]通過刺激隱核蟲的比較轉(zhuǎn)錄組分析發(fā)現(xiàn)了9種可能的表面抗原基因,為刺激隱核蟲疫苗的制備提供了更多的可能。

      同時(shí),還有學(xué)者利用表達(dá)刺激隱核蟲表面蛋白基因的真核表達(dá)質(zhì)粒DNA作為抗原,也達(dá)到了不錯(cuò)的成效。Jose等[50]構(gòu)建了DNA疫苗pcDNA31optiAg,肌肉注射后提高了宿主46%的相對存活率(RPS)。將iAg與刺激隱核蟲Hsp70 C端區(qū)分別連到pcDNA31表達(dá)載體上共同免疫石斑魚,在第20 d和第32 d利用刺激隱核蟲進(jìn)行攻毒可達(dá)到100%的相對存活率(RPS),免疫后49 d仍達(dá)到51%RPS防護(hù)能力[42]。

      42以刺激隱核蟲細(xì)胞骨架蛋白、蛋白酶為靶標(biāo)的疫苗研究

      細(xì)胞骨架的動(dòng)態(tài)變化在原蟲生長發(fā)育、入侵宿主過程以及成囊和脫囊等各種生理活動(dòng)中起了重要的作用。刺激隱核蟲的寄生階段-滋養(yǎng)體是通過攝取寄生部位的組織碎片和組織液為生,因此猜測抗體也可隨著滋養(yǎng)體的攝食進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。Huang等[51]從刺激隱核蟲cDNA文庫中篩選了肌動(dòng)蛋白(CiActin)、肌動(dòng)蛋白解聚因子(CiADF)、組裝抑制蛋白(CiProfilin)等細(xì)胞骨架蛋白相關(guān)基因并進(jìn)行了重組表達(dá),評估重組蛋白對宿主的免疫保護(hù)效果;目前已報(bào)道了分別被重組的肌動(dòng)蛋白解聚因子(CiADF2)和1433蛋白免疫后的鼠血清能夠抑制刺激隱核蟲幼蟲的活性。

      除此之外,蛋白酶在原蟲的發(fā)育和感染的過程中占據(jù)著重要的作用。通過刺激隱核蟲的轉(zhuǎn)錄組分析發(fā)現(xiàn),在滋養(yǎng)體階段,絲氨酸和半胱氨酸的蛋白酶具有很高的表達(dá)量,在122種的蛋白酶中有82種為半胱氨酸蛋白酶[49]。Watanabe等[52]通過在培養(yǎng)刺激隱核蟲幼蟲的介質(zhì)中加入絲氨酸和半胱氨酸的蛋白酶抑制劑,發(fā)現(xiàn)刺激隱核蟲發(fā)育、感染和入侵宿主的生命過程受到阻礙。進(jìn)一步證實(shí)了這兩種蛋白酶在刺激隱核蟲的生長發(fā)育、感染和入侵宿主中擁有重要的作用,可以將其作為防治原蟲的藥物和疫苗潛在的靶向目標(biāo)。雖然滋養(yǎng)體時(shí)期蛋白酶的詳細(xì)信息有助于刺激隱核蟲病防治方法的研發(fā),但是相關(guān)蛋白酶的特性仍不夠明確,還有待于進(jìn)一步研究。

      5展望

      目前,許多學(xué)者在魚對刺激隱核蟲感染的免疫應(yīng)答及刺激隱核蟲病的免疫防治方面做了大量工作,也獲得了一些成果。然而由于無法對刺激隱核蟲進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室保種,傳代的過程中也經(jīng)常遇到困難,使得魚與刺激隱核蟲之間相互關(guān)系的研究進(jìn)展緩慢。因此,為了找到高效安全的刺激隱核蟲病的防治方法,未來還應(yīng)從以下幾個(gè)方面繼續(xù)努力。(1)加深對刺激隱核蟲發(fā)育規(guī)律、生活史不同時(shí)期特點(diǎn)的了解,以期找到刺激隱核蟲的實(shí)驗(yàn)室保種方法,建立簡單、可操作性強(qiáng)的大規(guī)模培養(yǎng)刺激隱核蟲的方法,為制備幼蟲滅活疫苗、實(shí)驗(yàn)室魚與刺激隱核蟲之間相互關(guān)系等研究奠定基礎(chǔ)。(2)進(jìn)一步開展海水魚對刺激隱核蟲感染的免疫應(yīng)答機(jī)制研究。建議通過構(gòu)建實(shí)驗(yàn)室模式動(dòng)物,利用轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)等生物學(xué)方法,從更深層次了解宿主魚感染刺激隱核蟲后的免疫應(yīng)答及其機(jī)制,為疫苗研究奠定理論基礎(chǔ)。(3)在深入了解刺激隱核蟲生物學(xué)的基礎(chǔ)上,開展多元化的疫苗研究,并將具有一定免疫效果的疫苗盡快應(yīng)用到實(shí)際生產(chǎn)中,以驗(yàn)證其免疫效果。同時(shí)應(yīng)將物理、化學(xué)和免疫預(yù)防手段相結(jié)合,建立一套切實(shí)可行高效的綜合防治系統(tǒng),以期早日解決刺激隱核蟲病帶來的問題。

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      (責(zé)任編輯:柯文輝)

      余玲瑩,黃曉紅刺激隱核蟲感染的免疫預(yù)防研究進(jìn)展\[J\]福建農(nóng)業(yè)科技,2021,51(2):63-69.

      收稿日期:2020-12-26

      作者簡介:余玲瑩,女,1995年生,在讀碩士,主要從事發(fā)育生物學(xué)研究。

      *通信作者: 黃曉紅, 女,1963年生,教授,主要從事疾病的遺傳與分子機(jī)制研究(Email:biohxh@fjnueducn)。

      基金項(xiàng)目:國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31672244)。

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