邱藝燕，歐秀華，陳嘉祥

廈門市集美區(qū)疾病預(yù)防控制中心，福建 廈門 361022

霍亂是甲類傳染病之一，是由霍亂弧菌引起的急性腸道傳染病，以發(fā)病急、傳播快、波及范圍廣為特征，可引起散發(fā)、暴發(fā)和大流行。其臨床特征為劇烈腹瀉、嘔吐、大量米泔樣排泄物、水電解質(zhì)紊亂等。為了解廈門市集美區(qū)外環(huán)境水體和水產(chǎn)品中O1 和O139 群霍亂弧菌的污染狀況，及時掌握霍亂的疫情動態(tài)并為制定霍亂預(yù)防控制措施提供依據(jù)，本文對廈門市集美區(qū)2011—2018年霍亂監(jiān)測情況進行統(tǒng)計分析，結(jié)果如下。

1 對象、材料與方法

1.1研究對象

1.1.1水體與水產(chǎn)品 檢測的水體包括江河水、池塘水、生活水、沿海水、養(yǎng)殖水(龍舟池養(yǎng)殖水、灌口陳井養(yǎng)殖水、馬鑾灣養(yǎng)殖水、杏林灣養(yǎng)殖水)。

選擇永輝集美店、大潤發(fā)集美店、杏林白泉菜市場、集美菜市場作為水產(chǎn)品采樣點，輪流采樣監(jiān)測。在每年霍亂流行季節(jié)的5—10月份，每月至少采集30份水體標本和35份水產(chǎn)品標本。

1.1.2腹瀉病人標本 在4個社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心，2個衛(wèi)生院(灌口衛(wèi)生院、僑英衛(wèi)生院)設(shè)置腸道門診監(jiān)測點,全年開展腹瀉患者腸道門診監(jiān)測并采集腹瀉病人標本。

1.2材料 堿性蛋白胨水增菌液、慶大霉素瓊脂培養(yǎng)基、霍亂生化鑒定試劑由北京路橋技術(shù)股份有限責任公司生產(chǎn)；霍亂診斷血清由天津生物芯片技術(shù)有限責任公司生產(chǎn)；VITEK 2 革蘭氏陰性細菌鑒定卡由生物梅里埃股份有限公司生產(chǎn)。以上培養(yǎng)基及診斷血清均在有效期內(nèi)使用。VITEK 2全自動微生物鑒定儀由法國梅里埃公司生產(chǎn)。

1.3方法 按《全國霍亂監(jiān)測方案》《霍亂診斷標準》(WS 289-2008)和《霍亂防治手冊(第6版)》的規(guī)定進行采樣、送檢、檢驗和鑒定。

1.3.1增菌 將適量樣品放入堿性蛋白胨水中增菌，培養(yǎng)8 h后，吸取第一次增菌的表層增菌液0.2 mL，加入10 mL堿性蛋白胨水管中，36 ℃培養(yǎng)8 h，進行二次增菌。

1.3.2分離培養(yǎng) 用接種環(huán)蘸取一環(huán)二次增菌后的表層增菌液在慶大霉素瓊脂上劃線分離培養(yǎng)。培養(yǎng)24 h后，挑取5個可疑菌落(略帶青灰色、半透明、扁平、微隆起、光滑濕潤的菌落)，劃線接種于營養(yǎng)瓊脂平板，(36±1) ℃培養(yǎng)24 h。

1.3.3疑似菌落鑒定 挑取營養(yǎng)瓊脂平板上的菌落，做氧化酶試驗、黏絲試驗、革蘭染色鏡檢、三糖鐵發(fā)酵試驗，再挑取初步鑒定結(jié)果符合的菌落，用VITEK 2全自動微生物鑒定儀做生化鑒定。

1.3.4血清分型 生化結(jié)果符合的菌落再用霍亂診斷血清做O1/O139凝集實驗。

1.3.5毒力鑒定 陽性菌種送到廈門市疾病預(yù)防控制中心復(fù)核確認，同時進行霍亂弧菌毒力基因ctxAB的檢測。

2 結(jié) 果

2.1各類標本的霍亂弧菌檢出情況 2011—2018年，集美區(qū)共檢測標本4 509份，檢出霍亂弧菌6份，陽性率為0.13%。其中，腹瀉病人糞便標本1 039份，未檢出霍亂弧菌；水體標本共檢測1 410份，檢出2份，陽性率為0.14%；水產(chǎn)品標本共檢測2 060份，檢出4份，陽性率為0.19%。不同年份霍亂弧菌陽性率不同。見表1。

表1 2011—2018年不同樣本霍亂弧菌檢出情況

2.2陽性標本血清分型 6份陽性標本中4份為O1群稻葉型，占66.7%；2份為O1群小川型，占33.3%。陽性標本送廈門市疾控中心做霍亂弧菌毒力基因ctxAB檢測，均為陰性。

2.3陽性標本溯源 對6份陽性標本的來源進行調(diào)查，結(jié)果顯示：水體檢出2份，均為灌口陳井的牛蛙養(yǎng)殖水；水產(chǎn)品檢出4份，其中牛蛙檢出3份，2份來自白泉菜市場，1份來自大潤發(fā)集美店；田螺檢出1份，來自白泉菜市場。

3 討 論

霍亂監(jiān)測是為了及時發(fā)現(xiàn)傳染源，了解霍亂弧菌在外環(huán)境水和水產(chǎn)品中的分布情況、菌株類型及其毒力情況，是預(yù)防和控制霍亂流行的重要工作。2011—2018年對集美區(qū)轄區(qū)的腸道門診腹瀉物、水產(chǎn)品以及外環(huán)境水體開展霍亂弧菌監(jiān)測，結(jié)果顯示：集美區(qū)腸道門診腹瀉物、外環(huán)境水和水產(chǎn)品的陽性率為0、0.14%和0.19%，與福建省的霍亂監(jiān)測陽性檢出率基本持平[1]，但低于廈門市整體的外環(huán)境水(1.01%)、水產(chǎn)品(1.21%)的陽性檢出率[2]。這可能與集美區(qū)蛙類及其養(yǎng)殖水采樣比例較低有關(guān)，集美區(qū)蛙類及其養(yǎng)殖水構(gòu)成比約占15%，而廈門市外環(huán)境標本中蛙類和池水標本近五年的采樣構(gòu)成比為34.11%[3]。

集美區(qū)2011—2018年檢出的6份陽性標本中,牛蛙養(yǎng)殖水2份,牛蛙3份,田螺1份?；魜y弧菌主要在水產(chǎn)品中檢出，牛蛙等兩棲類水產(chǎn)品中霍亂弧菌的陽性率明顯高于其他類型水產(chǎn)品，比如甲殼類、魚類、貝殼類等，這與其他區(qū)、市歷年水產(chǎn)品的監(jiān)測結(jié)果一致[4-5]。牛蛙多來自養(yǎng)殖場，一旦養(yǎng)殖場中的養(yǎng)殖水被霍亂弧菌污染，則牛蛙的陽性率較高[6]。建議今后重點對蛙類及蛙類養(yǎng)殖水進行監(jiān)測，適當提高其標本監(jiān)測比重。

霍亂毒素是引起霍亂流行的重要影響因素之一，不產(chǎn)霍亂毒素的霍亂弧菌一般不會致病或者僅引起散發(fā)的腹瀉病例，大概率不會引起霍亂的流行。集美區(qū)近幾年外環(huán)境檢出的霍亂弧菌經(jīng)檢測均為無毒力株，但有研究發(fā)現(xiàn)霍亂弧菌毒力基因能在產(chǎn)毒株和非產(chǎn)毒株之間水平轉(zhuǎn)移，從而產(chǎn)生新的致病菌株[7]，所以仍應(yīng)加強監(jiān)測，密切關(guān)注毒力的變遷，及早發(fā)現(xiàn)菌株的毒力變化。

2011年以來，我國霍亂疫情進入低水平流行階段，每年霍亂病例總數(shù)不超過100例[8]。盡管集美區(qū)腹瀉物多年監(jiān)測陽性率為0,但仍不能忽視腸道門診在早期監(jiān)測霍亂疫情中的重要作用。因此，應(yīng)加強對基層檢驗人員的培訓(xùn)，提高規(guī)范化采樣水平，保證采樣質(zhì)量和時效，同時提升實驗室人員的檢測水平，及時發(fā)現(xiàn)霍亂病例，以便盡快采取相應(yīng)措施進行控制，防止霍亂弧菌流行擴散。